溶菌酶修飾的慶大霉素脂質(zhì)體對抗細菌生物膜的研究.pdf

1、細菌生物膜引發(fā)的慢性感染是臨床上棘手的問題之一。由于細菌生物膜對抗生素具有高度耐藥性，而在缺乏新抗生素或者高效抗菌策略的前提下，只能加大現(xiàn)有抗生素的使用劑量、延長給藥時間。長此以往，容易導(dǎo)致耐藥性和耐藥菌株的產(chǎn)生，同時，抗生素的毒副作用也會增加。因此，通過改良抗生素的現(xiàn)有給藥方式，降低抗生素的使用劑量，提高作用效果，可以為細菌生物膜感染的治療提供更好的解決辦法。本文采用生物相容性好的帶正電荷的溶菌酶修飾帶負(fù)電荷的脂質(zhì)體，提高了脂質(zhì)體的穩(wěn)

2、定性，增強了對細菌生物膜的親和力，提升了慶大霉素對生物膜的作用效果。具體研究內(nèi)容如下:
　　采用1，2-棕櫚酰磷脂酰甘油(DPPG)和二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)，通過擠壓法制備了慶大霉素脂質(zhì)體(LG)，經(jīng)磷鎢酸鈉沉淀法測定可知慶大霉素的包封率為0.6％。其次利用靜電作用將帶正電荷的溶菌酶吸附到負(fù)電荷的脂質(zhì)體表面得到溶菌酶修飾的慶大霉素脂質(zhì)體(LLG)。根據(jù)表面Zeta電位由LG的負(fù)值向LLG的正值轉(zhuǎn)變可知，溶菌酶成功吸附到了脂

3、質(zhì)體表面。通過定時檢測48h內(nèi)LG及LLG的粒徑變化可知，溶菌酶的引入可以穩(wěn)定脂質(zhì)體。利用紫外分光光度計實時監(jiān)測72h內(nèi)LG及LLG體外釋放慶大霉素含量發(fā)現(xiàn)，LG在前48h內(nèi)，慶大霉素釋放量超過了50％，而在72h時70％以上的藥物已經(jīng)釋放。相反地，在72h時也僅有14％的藥物從LLG中釋放出來。由此也證明了溶菌酶吸附到慶大霉素脂質(zhì)體表面可以有效改善脂質(zhì)體的穩(wěn)定性。通過體外構(gòu)建銅綠假單胞桿菌（革蘭氏陰性菌）和金黃色葡萄球菌（革蘭氏陽性菌

4、）生物膜，利用結(jié)晶紫染色法和MTT實驗評價發(fā)現(xiàn)，與單獨慶大霉素相比，LLG在破壞已形成的細菌生物膜和抑制細菌生物膜形成時更為有效。通過熒光顯微鏡及掃描電鏡觀察細菌生物膜發(fā)現(xiàn)，LLG不僅破壞了生物膜的形態(tài)及內(nèi)部結(jié)構(gòu)，也影響了單個細菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)。通過熒光定量羅丹明B與細菌生物膜的結(jié)合量，探討了LLG破壞細菌生物膜的潛在機制，結(jié)果顯示，LLG能更有效的吸附于負(fù)電荷的生物膜，進而定點釋放藥物，從而達到增強LLG的抗生物膜效果。
　　綜上所