量子點熒光信號放大及其用于豬偽狂犬病的診斷.pdf

1、豬偽狂犬病是當前危害全球養(yǎng)殖業(yè)的主要疾病之一，給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經濟損失。目前，在我國等一些發(fā)展中國家和地區(qū)，該病仍頻繁發(fā)生，因此發(fā)展快速高靈敏的檢測方法，對于豬偽狂犬病的早期診斷以及病情控制都具有重要的意義。采用量子點的信號放大免疫分析具有靈敏度高、檢測范圍廣、特異性好、檢測手段多樣性等優(yōu)勢，在環(huán)境檢測、生物分析、臨床診斷等方面得到了廣泛的應用。本文針對基于CdSe量子點的熒光信號放大進行了研究并將其用于豬偽狂犬病的檢測。論文圍繞C

2、dSe量子點探針以及CdSe功能化SiO2微球探針的制備，結合量子點信號放大技術與豬偽狂犬病病毒(PRV)抗體免疫分析新方法的建立，開展了以下三個方面的工作：
　　 ⑴采用熒光染料羅丹明5N(Rhod-5N)檢測CdSe量子點，闡述了該方法在生物分析及免疫檢測中的應用前景以及其相比于傳統(tǒng)檢測手段的優(yōu)勢。實驗優(yōu)化了Rhod-5N檢測CdSe量子點的條件，得出在最佳條件下，對CdSe量子點檢測的線性范圍為10.0到500 pmol/

3、L，檢測的線性方程Y=0.1538+0.00134X，線性相關系數R2為0.9943，最低檢測限為10.0 pmol/L。采用該方法所檢測的熒光信號強度為直接合成的油相CdSe量子點的45倍，為轉水相之后的CdSe量子點的370倍。該方法對量子點本身的光學以及其它性能要求不高，因此目前的量子點合成技術完全可以滿足需求。該方法為生物分析中量子點等標記物的檢測提供了一種新的快速靈敏的檢測途徑，同時該方法還可以推廣到對其它納米材料標記物的檢測

4、。
　　 ⑵采用基于CdSe量子點離子置換反應的信號放大方法實現了對PRV抗體的靈敏檢測。該方法利用CdSe量子點中含有的大量Cd2+進行免疫反應之后信號的放大。免疫反應之后通過Ag+置換出標記物CdSe中的Cd2+，最后采用Cd2+熒光指示劑Rhod-5N對釋放出來的Cd2+進行檢測從而間接的檢測PRV抗體的含量。結果表明，在最優(yōu)化的條件下，該方法對PRV抗體的檢測可達陽性血清稀釋1024倍，對PRV抗體的檢測限約為1.22

5、ng/mL。和傳統(tǒng)的酶聯免疫吸附法(ELISA)相比，該方法成本較低，檢測線性范圍較寬，靈敏度更高，特異性好，在臨床分析和控制疾病傳播方面顯示出了良好的應用前景。
　　 ⑶合成了穩(wěn)定的SiO2@QDs@SiO2微球并和兔抗豬IgG偶聯制備探針，并將該探針用于PRV抗體的檢測。實驗采用St(S)ber方法合成尺寸分布均勻的二氧化硅微球，對其表面巰基化后直接修飾油相CdSe量子點，將修飾之后的硅球進一步硅烷化，并進行環(huán)氧基修飾，合成