BRD7參與小鼠炎癥發(fā)生的功能及機制研究.pdf

1、[研究目的]
　　BRD7是我室自主克隆的全長新基因，10余年來的工作基礎證實BRD7是一個抑瘤基因和核轉錄調節(jié)因子，通過調控多種靶基因參與不同的信號通路，從而表現(xiàn)出不同的生物學表型，如炎癥，發(fā)育，生殖及腫瘤發(fā)生。近年來的研究表明，很多抑癌基因如PTEN、P53、PDCD4等不僅與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關，而且參與了免疫反應和炎性疾病等正常生理和病理過程。因此，在前期成功構建BRD7基因敲除小鼠模型的基礎上，本研究擬探討B(tài)RD7在小

2、鼠炎癥發(fā)生中的作用和機制，為炎癥性疾病發(fā)病機制及臨床診治提供實驗基礎和理論依據。
　　[研究方法]
　　利用前期構建的BRD7條件剔除小鼠模型，系統(tǒng)研究了BRD7剔除對小鼠炎癥發(fā)生的影響;通過全基因組基因芯片雜交，探討B(tài)RD7剔除前后小鼠重要免疫器官-脾臟差異基因表達譜，并通過real-time PCR進行驗證;進一步構建LPS誘導的小鼠胚胎成纖維細胞炎癥模型和AOM/DSS聯(lián)合誘導的潰瘍性結腸炎小鼠模型，探討B(tài)RD7剔除對

3、LPS誘導MEF細胞及AOM/DSS誘導的小鼠結腸炎癥發(fā)生發(fā)展的影響，并通過qRT-PCR或免疫組化技術分別在MEF細胞和小鼠結腸炎組織中對BRD7介導的重要炎癥因子及參與的信號通路進行證實。
　　[結果]
　　本研究在構建BRD7基因條件敲除小鼠模型的基礎上，通過外在表型的觀察，發(fā)現(xiàn)與野生型（BRD7+/+）小鼠相比BRD7-/-小鼠極易發(fā)生體表炎癥，如外生殖器炎癥、腹部膿腫及舌的乳頭狀細胞瘤，同時發(fā)現(xiàn)免疫器官-脾臟明顯增

4、大，并發(fā)生脾功能亢進和溶血等現(xiàn)象。這些炎癥表型及相關免疫器官形態(tài)和功能的改變說明BRD7基因剔除容易誘發(fā)小鼠炎癥的發(fā)生，降低小鼠的免疫功能。通過全基因組芯片雜交，構建了脾臟差異基因表達譜，篩選出了差異顯著的靶基因及所涉及的信號通路，并通過驗證發(fā)現(xiàn)IL-6、iNOS和CXCL1在BRD7-/-小鼠脾臟中mRNA表達水平明顯增加，TNFα明顯降低。在LPS誘導的BRD7-/-MEF細胞中，IL-6、iNOS和CXCL1的mRNA明顯增加，T

5、NFα的mRNA降低。AOM/DSS聯(lián)合誘導的慢性潰瘍性結腸炎小鼠模型中，BRD7-/-小鼠的炎癥級別高于BRD7+/+小鼠，免疫組化結果顯示IL-6、iNOS、CXCL1和NF-κB/P65在BRD7-/-小鼠結直腸的表達也明顯高于BRD7+/+組，且NF-κB/P65入核較明顯，而TNFα在BRD7+/+小鼠結直腸組織中表達較高，其中BRD7-/-小鼠中NF-κB/P65核聚集的結果進一步得到了免疫熒光實驗方法的證實，說明BRD7剔