聚乙二醇衍生物的合成和特性研究.pdf

1、越來(lái)越多的蛋白質(zhì)多肽類(lèi)藥物被應(yīng)用于人類(lèi)疾病的治療，與其它合成化學(xué)藥物相比，它們有易引起機(jī)體的免疫反應(yīng)，體內(nèi)半衰期短，在體內(nèi)易水解、變性等缺點(diǎn)?；瘜W(xué)修飾作為一種新興技術(shù)，能改善上述不良特性。本文主要優(yōu)化合成了一種PEG修飾劑——mPEG-NHS，采用牛血清白蛋白BSA和溶菌酶作為模式蛋白對(duì)其修飾條件進(jìn)行了優(yōu)化，并用層析法分離修飾后蛋白質(zhì)。 mPEG-NHS的合成主要通過(guò)兩個(gè)反應(yīng)得到，第一步是mPEG同丁二酸酐之間的酯化反應(yīng)，得到m

2、PEG-SA，第二步是mPEG-SA同NHS(N-羥基硫代琥珀酰亞胺)反應(yīng)，在脫水劑DCCI(N.N'一二己基碳二亞胺)的催化下得到mPEG-NHS。通過(guò)優(yōu)化反應(yīng)條件使得mPEG的轉(zhuǎn)化率和mPEG-NHS的純度都得到提高。優(yōu)化后反應(yīng)條件分別為：(1)酯化反應(yīng)采用吡啶為催化劑，酸醇比為10∶1，反應(yīng)時(shí)間3 h；(2)脫水反應(yīng)時(shí)間25h，溫度40℃,反應(yīng)物摩爾比mPEG-SA∶NHS為1∶2.5。優(yōu)化后的兩步反應(yīng)的轉(zhuǎn)化率分別為60.1％和5

3、6.0％。 mPEG-NHS修飾蛋白質(zhì)在不同的反應(yīng)條件下得到不同修飾率的蛋白質(zhì)，優(yōu)化反應(yīng)條件后能得到更高氨基修飾率的修飾產(chǎn)物。最佳修飾反應(yīng)條件為：反應(yīng)時(shí)間10min，蛋白質(zhì)和修飾劑質(zhì)量比為1∶5，采用pH=9.0的硼砂緩沖液，在優(yōu)化條件下可得到修飾率為47.5％的產(chǎn)物。 由于修飾反應(yīng)得到的蛋白質(zhì)溶液中含有連接有修飾劑的蛋白質(zhì)和未連接修飾劑的蛋白質(zhì)，可通過(guò)層析的方法將它們分離開(kāi)。溶菌酶修飾產(chǎn)物采用sephadexG-75凝