掃描電化學(xué)顯微鏡測(cè)定DNA.pdf

1、掃描電化學(xué)顯微術(shù)(SECM)作為一種電化學(xué)方法,已經(jīng)用于DNA片斷斑點(diǎn)的表征.目前已經(jīng)報(bào)道的關(guān)于SECM測(cè)定DNA的文章僅有四篇.在這些工作中,利用直接雜交法將目標(biāo)DNA片段固定在載玻片上,分別通過(guò)銀增強(qiáng)、鳥(niǎo)嘌呤氧化和具有電化學(xué)活性的雜交指示劑來(lái)表征目標(biāo)DNA片段.我們首次將DNA夾心雜交法和SECM相結(jié)合,利用醇的高效催化作用,進(jìn)行了DNA的定量分析,并對(duì)實(shí)際樣品進(jìn)行了測(cè)定.全文分為三部分:第一部分是用固相直接雜交法,通過(guò)SECM的收

2、集模式測(cè)定DNA.首先利用生物素與鏈霉親和素的結(jié)合反應(yīng),把生物素化的DNA探針固定在鏈霉親和素覆蓋的聚苯乙烯板上,然后加入生物素化的目標(biāo)DNA,利用核酸分子雜交使目標(biāo)DNA與探針發(fā)生雜交.雜交反應(yīng)結(jié)束后,加入鏈霉親和素—辣根過(guò)氧化物酶(HRP)結(jié)合物,將HRP連接到被測(cè)DNA上.利用掃描電化學(xué)顯微鏡的收集模式,通過(guò)檢測(cè)HRP催化氫醌(H<,2>Q)和H<,2>O<,2>反應(yīng)產(chǎn)生的1,4-苯醌(BQ)來(lái)間接檢測(cè)目標(biāo)DNA.第二部分用固相夾