流動-酶催化化學發(fā)光新體系的研究與應用.pdf

1、本文綜述部分簡要介紹了化學發(fā)光分析的基本情況、發(fā)展以及應用。流動化學發(fā)光分析法具有儀器設備簡單、分析速度快、靈敏度高、線性范圍寬等優(yōu)點，所以越來越受到分析化學工作者的重視。本文基于魯米諾-過氧化氫體系的化學發(fā)光現象，以辣根過氧化物酶(HRP)和血紅蛋白(Hb)作為酶催化劑，采用固定化酶和可更新表面聯用流動注射等技術，建立了測定抗壞血酸、膽固醇及免疫球蛋白G的流動注射化學發(fā)光分析法。研究報告包括以下三部分： 1．基于抗壞血酸對Lu

2、minol-HRP-H<,2>O<,2>體系化學發(fā)光反應的抑制作用，結合固定化酶技術，建立了一種簡單、快速檢測抗壞血酸的流動注射化學發(fā)光分析新方法。該方法線性范圍為4.0×10<'-8>～4.0×10<'-4>mol/L，檢測限為1.6×10<'-8>mol/L。 2．利用血紅蛋白(Hb)作為模擬酶催化H<,2>O<,2>與魯米諾的化學發(fā)光反應，將該反應與膽固醇氧化酶(COD)催化氧化膽固醇生成H<,2>O<,2>的反應偶合，聯

3、用流動注射分析技術，建立了測定膽固醇的流動注射化學發(fā)光分析法。該方法用于測定人體血清中的游離膽固醇及總膽固醇含量，結果令人滿意。進樣頻率為30個/小時，游離膽固醇線性范圍為5.6×10<'-7>mol·L<'-1>～3.8×10<'-5>mol·L<'-1>，檢測限為3.0×10<'-7>mol·L<'-1>：總膽固醇線性范圍為1.1×10<'-6>mol·L<'-1>～4.3×10<'-5>mol·L<'-1>，檢測限為1.5×10<

4、'-7>mol·L<'-1>。 3．將羊抗人IgG抗體(第一抗體)固定于包被有蛋白A的Sepharose 4B FastFlow凝膠微珠表面制成固相抗體，用辣根過氧化物酶(HRP)標記的羊抗人IgG抗體作為第二抗體，在自制的微型流通式反應器中與人IgG進行免疫反應生成雙抗體夾心式抗原．抗體復合物。該復合物中含有的HRP能夠催化發(fā)光底物增強化學發(fā)光，其發(fā)光強度與人體血清中IgO的含量成良好的線性關系。由于包被有蛋白A的Sephar

5、ose 4FF凝膠微珠顆粒非常小(45-165μm)，每次測定所需的第一抗體隨包被有蛋白A的Sepharose 4FF凝膠微珠進入微型流通式反應器中，完成一次測定后微珠即隨廢液一起排出。從而用自制的微型流通式反應器建立了流動注射可更新表面非均相增強化學發(fā)光免疫法測定人體血清中的免疫球蛋白G的新方法。體系經優(yōu)化后，檢出限為0.01mg/L，分析速率達到10次/h，校正曲線的線性范圍為0.05～3.0mg/L。本法已成功地應用于人血清中Ig