2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:利用純化的前列腺素E2(Prostaglandin E2,PGE2)單克隆抗體(mAb-1G)建立檢測PGE2的高靈敏度ELISA測定方法,利用此方法測定了經(jīng)典炎癥細胞模型LPS誘導的RAW264.7巨噬細胞分泌PGE2的情況。
   方法:采用硫酸銨沉淀法純化得到了產(chǎn)量較高的且符合實驗要求的單克隆抗體mAb-1G。并合成了PGE2-多聚賴氨酸(PLL)以及PGE2-堿性磷酸酶(AKP)兩種偶聯(lián)物,選擇TNBS法檢測了偶聯(lián)

2、比率。然后利用純化的抗體與偶聯(lián)物共建立四種ELISA檢測方法:間接競爭ELISA法,直接競爭ELISA法,改良型直接競爭ELISA法(比色法)以及改良型直接競爭ELISA法(熒光法)測定PGE2;建立LPS誘導的RAW264.7巨噬細胞炎癥反應模型,采用改良型直接競爭ELISA法(熒光法)測定經(jīng)典炎癥細胞模型LPS誘導的RAW264.7巨噬細胞分泌PGE2的情況。
   結(jié)果:間接競爭ELISA法,直接競爭ELISA法,改良型直

3、接競爭ELISA法(比色法)和改良型直接競爭ELISA法(熒光法)的檢測范圍分別為1.56~50.00μg/mL;0.63~20.00μg/mL;1.95~250.00 ng/mL;0.156~5.00 ng/mL。在細胞模型中,采用改良型直接競爭ELISA法(熒光法)測定細胞上清,結(jié)果顯示,LPS(10 ng/mL)刺激24 h后可顯著增高RAW264.7巨噬細胞PGE2的分泌,而在該模型下,中藥六類新藥原生痛對PGE2的增加無明顯的

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