提高免疫層析試紙條靈敏度方法的研究.pdf

1、目前有許多常見的食品檢測方法，主要包括氣相色譜質(zhì)譜法、液相色譜質(zhì)譜法、高效液相色譜法以及酶聯(lián)免疫吸附法等，然而這些方法都需要昂貴的儀器、復雜的前處理以及專業(yè)的操作人員，這些特點限制了它們的現(xiàn)場應用。免疫層析試紙條是一種操作簡單、快速、結(jié)果穩(wěn)定、價格低廉的檢測方法，適宜于樣品的現(xiàn)場快速篩查，然而，免疫層析試紙條的檢測靈敏度較低，因此，應用受到限制。本研究初步探索了提高免疫層析試紙條靈敏度的方法。
　　本實驗以食源性致病菌大腸桿菌 O

2、157:H7為研究對象，基于雙抗夾心的檢測原理，成功建立了膠體金免疫層析信號放大試紙條檢測系統(tǒng)。本研究在傳統(tǒng)膠體金免疫層析試紙條的基礎上，通過添加增敏劑（氯金酸和鹽酸羥胺）提高檢測信號。利用膠體金試紙條讀取儀獲得信號放大前后試紙條的檢測限分別為為4×104 CFU/mL及5×103 CFU/mL，信號放大后靈敏度提高了8倍，檢測時間為20 min；該試紙條與27株非目標菌無交叉反應；以牛奶為食品基質(zhì)，用試紙條對增菌培養(yǎng)不同時間的樣本進行

3、檢測，信號放大后的試紙條檢出陽性信號的時間比傳統(tǒng)試紙條短1.5 h。該試紙條具有快速、靈敏、操作簡單、適宜于現(xiàn)場檢測的特點，為大腸桿菌O157:H7的高靈敏檢測提供了一種新的方法。
　　合適的探針材料是提高免疫層析試紙條檢測靈敏度的重要因素。在本實驗中，基于競爭抑制的檢測原理，成功制備了銀金多孔納米粒子免疫層析試紙條并對克倫特羅進行檢測。通過添加不同量的氯金酸到十六烷基三甲基氯化銨包裹的銀納米粒子溶液，制備了不同金銀含量以及不同孔

4、徑大小的銀金多孔納米粒子，由于獲得的銀金多孔納米粒子的表面活性劑帶正電，通過添加巰基十一烷酸到十六烷基三甲基氯化銨包裹的銀金多孔納米粒子溶液，成功地將銀金多孔納米粒子的表面電荷從正電荷轉(zhuǎn)變?yōu)樨撾姾?。將巰基十一烷酸包裹的不同的銀金多孔納米粒子與抗克倫特羅單克隆抗體分別反應，得到相應的免疫探針，將它們并應用于免疫層析試紙條進行克倫特羅檢測。結(jié)果顯示，隨著氯金酸添加量的增加，獲得的銀金多孔納米粒子的Ag/Au摩爾比從12.69:1、4.78: