層層組裝構(gòu)建多重響應(yīng)性復(fù)合基因載體.pdf

1、非病毒基因載體以其生物安全性、低毒性以及易組裝等優(yōu)點(diǎn)成為人們關(guān)注的焦點(diǎn),所以人們一直希望在非病毒基因載體中尋找到一種安全高效的載體,能在基因治療方面取得突破。本文利用層層組裝方法和殼交聯(lián)方法制備了以Fe3O4磁性納米粒子為核,以PEG為冠的可控的磁靶向基因載體。首先在磁性納米粒子表面修飾三甲基丙烯酰氧基丙基三甲氧基硅烷(MPS),然后通過自由基聚合在磁性納米粒子表面接枝PDMAEMA,得到表面接枝PDMAEMA的磁性納米粒子(PDMAE

2、MA-MNPs)。然后利用層層組裝方法在PDMAEMA—MNPs包裹DNA分子,包括4個(gè)步驟：⑴通過靜電作用,將DNA與帶正電荷的PDMAEMA-MNPs結(jié)合,得到表面帶負(fù)電荷的粒子；⑵用部分質(zhì)子化的PDMAEMA均聚物與第一步得到的表面帶負(fù)電荷的納米粒子靜電結(jié)合,得到PDMAEMA/DNA/MNPs納米粒子；⑶利用共聚物MePEG2000-b-PMAASH中的陰離子(-COO-)與上述納米粒子表面的-N+H(CH3)2作用,使納米粒子

3、表面帶水溶性PEG鏈；⑷對巰基進(jìn)行氧化,生成S-S鍵,獲得磁性納米粒子外表面交聯(lián)的基因載體。本文對層層組裝的過程進(jìn)行跟蹤研究。利用瓊脂糖凝膠電泳和Zeta電位測試進(jìn)行表征,并利用動(dòng)態(tài)光散射(DLS)對每一步粒子的粒徑進(jìn)行了測試。MTT實(shí)驗(yàn)用于評價(jià)復(fù)合納米粒子的細(xì)胞毒性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明,這種復(fù)合納米粒子具有低的細(xì)胞毒性和模擬體內(nèi)循環(huán)條件下的穩(wěn)定性,是潛在的非病毒基因載體。
　　 納米粒子表面改性可以使粒子具有特殊的功能以滿足各種材料

4、需求。本文利用原子轉(zhuǎn)移自由基聚合(ATRP)與點(diǎn)擊反應(yīng)(Click)相結(jié)合,在Fe3O4@SiO2表面接枝聚合物(如PDMAEMA),對納米粒子進(jìn)行表面改性,使其具有特殊功能。首先,我們利用溶膠-凝膠法合成了SiO2包裹的磁性納米粒子Fe3O4(Fe3O4@SiO2),利用ATRP合成末端帶炔基的PDMAEMA,然后利用硅烷化反應(yīng)在Fe3O4@SiO2表面修飾疊氮基團(tuán),最后與帶有炔基的聚合物發(fā)生“Click”反應(yīng),完成對納米粒子的表面修