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1、本論文共分為五章,主要對(duì)近年來(lái)小分子與血清白蛋白相互作用的研究概況進(jìn)行了綜述,并分別研究了幾種小分子與牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)的相互作用。光譜法在小分子與生物大分子相互作用的研究領(lǐng)域中的應(yīng)用日益廣泛,但是用光譜法結(jié)合化學(xué)計(jì)量學(xué)方法來(lái)探討小分子與血清白蛋白的結(jié)合機(jī)理的文章還比較少。本論文嘗試將化學(xué)計(jì)量學(xué)方法平行因子和多元曲線(xiàn)分辨-交替最小二乘法用于解析實(shí)驗(yàn)所得的光譜數(shù)據(jù)。討論了方法的原理和實(shí)際應(yīng)用,
2、并探討了化學(xué)計(jì)量學(xué)在復(fù)雜體系中實(shí)現(xiàn)同時(shí)解析多組分平衡濃度和純光譜的可行性。 第一章:本章首先簡(jiǎn)要的介紹了蛋白質(zhì)的定義、結(jié)構(gòu)、功能和性質(zhì)等,然后依次對(duì)小分子與血清白蛋白相互作用的研究方法、研究?jī)?nèi)容和存在的問(wèn)題等方面展開(kāi)了評(píng)述,探討了化學(xué)計(jì)量學(xué)在小分子與血清白蛋白相互作用研究中的應(yīng)用。最后還展望了小分子與血清白蛋白相互作用研究的發(fā)展趨勢(shì),將新探針的開(kāi)發(fā)、各種儀器方法的聯(lián)用及化學(xué)計(jì)量學(xué)方法的引入作為研究重點(diǎn)。 第二章:熒光光譜
3、法研究異丙威及2-異丙基苯酚鈉與BSA的相互作用。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),異丙威與BSA通過(guò)范德華力和氫鍵結(jié)合形成復(fù)合物,而2-異丙基苯酚鈉與BSA通過(guò)靜電引力作用結(jié)合為復(fù)合物。采用同步熒光和三維熒光光譜法探討了異丙威及2-異丙基苯酚鈉對(duì)BSA構(gòu)象的影響,結(jié)果表明異丙威及2-異丙基苯酚鈉對(duì)BSA構(gòu)象均有影響,甚至可能破壞BSA的結(jié)構(gòu)。通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)2-異丙基苯酚鈉與異丙威在BSA上有相同的結(jié)合位點(diǎn),并且2-異丙基苯酚鈉能將結(jié)合在BSA上的異丙威競(jìng)爭(zhēng)
4、出來(lái)。 第三章:熒光光譜法結(jié)合平行因子法(PARAFAC)研究鹽酸特拉唑嗪和鹽酸哌唑嗪與BSA的相互作用,結(jié)果發(fā)現(xiàn)這兩種藥物都對(duì)BSA的內(nèi)源熒光有猝滅作用,且屬于靜態(tài)猝滅。熱力學(xué)參數(shù)證明鹽酸特拉唑嗪與BSA之間的作用力主要為氫鍵,鹽酸哌唑嗪與BSA之間的作用力主要為疏水作用力和靜電引力。本文以華法林和安定作標(biāo)記藥物,采用三維熒光技術(shù)分別對(duì)競(jìng)爭(zhēng)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行掃描,用PARAFAC處理所得三維數(shù)據(jù)。根據(jù)血清白蛋白結(jié)合位上藥物的置換作用確定
5、了鹽酸特拉唑嗪和鹽酸哌唑嗪的結(jié)合位點(diǎn)都是BSA的site I。 第四章:紫外吸收光譜和熒光光譜法結(jié)合多元曲線(xiàn)分辨-交替最小二乘法(MCR-ALS)研究富馬酸比索洛爾與BSA的相互作用。由于體系中各組分的光譜曲線(xiàn)有部分重疊且現(xiàn)象不明顯,以及MCR-ALS解析單個(gè)矩陣時(shí)存在旋轉(zhuǎn)不確定性,本文采用擴(kuò)展矩陣進(jìn)行交替最小二乘迭代。MCR-ALS所分辨出的BSA和富馬酸比索洛爾的光譜曲線(xiàn)與實(shí)際光譜曲線(xiàn)很好地吻合,保證了分辨的濃度趨勢(shì)圖可靠。
6、MCR-ALS很好地分辨出各組分的平衡濃度變化趨勢(shì)圖,通過(guò)各圖可以很直觀地監(jiān)測(cè)反應(yīng)過(guò)程中各個(gè)組分的濃度變化,并算出富馬酸比索洛爾與BSA相互作用的表觀結(jié)合常數(shù)。本文還通過(guò)同步熒光光譜法和紫外吸收光譜法發(fā)現(xiàn)富馬酸比索洛爾對(duì)BSA構(gòu)象有一定影響。 第五章:熒光光譜法結(jié)合多元曲線(xiàn)分辨-交替最小二乘法研究傘形花內(nèi)酯與BSA的相互作用。本實(shí)驗(yàn)采用兩種不同的試劑滴加模式對(duì)傘形花內(nèi)酯與BSA的相互作用進(jìn)行研究,對(duì)經(jīng)典的熒光光譜數(shù)據(jù)矩陣加以擴(kuò)展
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