黃海養(yǎng)殖真海鞘降血糖活性的研究.pdf

1、海洋動(dòng)物海鞘類含有結(jié)構(gòu)新穎且活性獨(dú)特的次生代謝產(chǎn)物，目前，從海鞘類獲取海洋活性物質(zhì)的研究還處于發(fā)展階段，已有的相關(guān)報(bào)道主要集中在抗腫瘤、抗病毒、抗菌等方面，而對(duì)海鞘類降血糖活性的研究較少。真海鞘是一種大型海鞘，原分布于日本、韓國等低溫海域，作為海洋食品深受青睞。2006年，山東威海地區(qū)引進(jìn)日本真海鞘并試養(yǎng)成功，現(xiàn)已形成規(guī)模化養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)，產(chǎn)品主要出口日韓，但截止目前，鮮少涉及對(duì)黃海養(yǎng)殖真海鞘生理活性的相關(guān)報(bào)道。本研究初步考察了真海鞘降血糖作

2、用及其機(jī)制，旨在為黃海養(yǎng)殖真海鞘的綜合開發(fā)利用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　實(shí)驗(yàn)通過對(duì)昆明小鼠一次性大劑量腹腔注射鏈脲佐菌素（STZ），使其血糖升高，建造糖尿病動(dòng)物模型，采用葡萄糖氧化酶-過氧化物酶法測定真海鞘凍干粉及其提取物的體內(nèi)降血糖作用；通過高糖誘導(dǎo)人體肝癌細(xì)胞（HepG2）建立胰島素抵抗細(xì)胞模型，采用熒光探針（2-NBDG）測定細(xì)胞糖攝取的作用；采用Western blot方法測定Akt的磷酸化水平；采用比色發(fā)測定細(xì)胞中糖原、己糖激

3、酶（HK）、丙酮酸激酶（PK）的活性。主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下：
　?。?）昆明種小鼠一次性腹腔注射150 mg/kg的鏈脲佐菌素，成功復(fù)制糖尿病小鼠模型，灌胃給予0.5、1、2 g/kg真海鞘凍干粉14 d，糖尿病小鼠血糖分別降低了8.90％、11.20%、21.79%，且呈劑量依賴性，但是大劑量真海鞘凍干粉會(huì)造成小鼠消化不良導(dǎo)致其死亡。
　　（2）采用水、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、乙醇等溶劑對(duì)真海鞘凍干粉進(jìn)行提取，通過對(duì)糖

4、尿病小鼠灌胃不同提取物，測定其血糖，并對(duì)提取物進(jìn)行口服糖耐量實(shí)驗(yàn)，確定真海鞘凍干粉的降血糖活性部位。結(jié)果顯示：真海鞘水提沉淀物的降血糖活性高于真海鞘水提物的降血糖活性，且與模型組有顯著性差異，水提沉淀物組糖尿病小鼠血糖降低了22.35%；有機(jī)溶劑提取物中的降血糖活性為：正丁醇相>乙酸乙酯相>乙醇相>石油醚，糖尿病小鼠血糖值分別降低了28.26%、22.01%、20.55%、10.09%；在口服糖耐量實(shí)驗(yàn)中，正丁醇相的糖耐量最好，其次是乙

5、醇相、乙酸乙酯相、石油醚相。
　　（3）MTT法檢測表明不同濃度真海鞘粗提物對(duì)HepG2細(xì)胞的細(xì)胞活力沒有明顯影響；高糖誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞，建立細(xì)胞模型，采用2-NBDG熒光探針的方法，確定其糖攝取能力，確定建模的糖濃度為30 mmol/L。真海鞘提取物對(duì)高糖誘導(dǎo)HepG2 細(xì)胞糖攝取能力的影響結(jié)果表明提取物的體外降糖作用與體內(nèi)基本保持一致。
　?。?）真海鞘凍干粉提取物降糖作用機(jī)制研究中發(fā)現(xiàn)，正丁醇相提取物可使