親水性離子液體1,3-二丁基咪唑氯代鹽在溶菌酶結(jié)晶中的應(yīng)用研究.pdf

1、離子液體可設(shè)計(jì)的結(jié)構(gòu)特性使其成為潛力巨大的功能性材料，其優(yōu)良的物理和化學(xué)性質(zhì)也使離子液體在多種領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)分析是蛋白質(zhì)組學(xué)研究中的重要組成部分，而X-射線衍射是確定蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的最有效方法。但迄今為止，適合X-射線衍射的蛋白質(zhì)晶體的獲取仍是這一領(lǐng)域的主要技術(shù)瓶頸。因此發(fā)展蛋白質(zhì)結(jié)晶技術(shù)以獲取高質(zhì)量的蛋白質(zhì)晶體具有重要意義。
　　本論文以親水性離子液體1，3-二丁基咪唑氯代鹽(BBimCl)為添加劑，以溶菌酶為模型

2、蛋白，研究了離子液體對(duì)蛋白質(zhì)結(jié)晶的影響。分別考察了離子液體對(duì)溶菌酶晶體形貌與數(shù)量、晶體生長(zhǎng)速度以及蛋白質(zhì)結(jié)晶純度要求的影響;采用X-射線衍射對(duì)所得晶體進(jìn)行結(jié)構(gòu)測(cè)定及解析;并探討了離子液體對(duì)溶菌酶結(jié)晶過程影響的相關(guān)作用機(jī)理。
　　實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)結(jié)晶過程中離子液體可有效地增大溶菌酶的溶解度、降低溶菌酶的過飽和度；離子液體的低蒸汽壓有利于調(diào)節(jié)結(jié)晶過程中達(dá)到過飽和度的速率和控制晶體生長(zhǎng)速率，避免多晶態(tài)現(xiàn)象的發(fā)生并能夠顯著增大晶體的尺寸，得到更適

3、合衍射分析的高質(zhì)量晶體；此外以離子液體為添加劑可顯著降低結(jié)晶過程中對(duì)溶菌酶樣品純度的要求，在高濃度雜蛋白共存的情況下仍能得到高質(zhì)量的溶菌酶晶體。X-射線衍射分析結(jié)果表明離子液體的加入不影響溶菌酶晶體的空間結(jié)構(gòu)，離子液體的陽(yáng)離子進(jìn)入晶體結(jié)構(gòu)內(nèi)部，其結(jié)合位點(diǎn)位于溶菌酶分子表面的狹長(zhǎng)空隙，與周圍的Trp(色氨酸)62、Trp63、Asp(天冬氨酸)101殘基之間有相互作用。
　　將新鮮雞蛋清經(jīng)過稀釋、酸化、加熱、冷凍干燥處理后，無須加入