鹽角草鉀離子通道蛋白基因SeAKT1的克隆與表達(dá).pdf

1、鉀是植物生長(zhǎng)所必需的營(yíng)養(yǎng)元素之一，廣泛分布于植物各組織和器官，參與植物體內(nèi)多種重要的生理過(guò)程，維持細(xì)胞質(zhì)內(nèi)高水平且相對(duì)穩(wěn)定的鉀含量對(duì)植物至關(guān)重要。鉀離子通道是植物吸收鉀的主要途徑。目前已從不同植物中克隆得到一些AKT1亞族鉀離子通道基因，然而這些基因大部分來(lái)自甜土植物，并且多數(shù)對(duì)Na+敏感，其中包括來(lái)自鹽生植物的MKT1，對(duì)真鹽生植物鉀離子通道的報(bào)道很少。所以，本論文選用迄今為止報(bào)道過(guò)的最耐鹽的陸生高等真鹽生植物之一的鹽角草為實(shí)驗(yàn)材料，

2、旨在獲得一種在高鹽環(huán)境下仍具有鉀吸收能力的Na+不敏感的鉀通道蛋白。
　　本文從真鹽生植物鹽角草中克隆得到鉀離子通道蛋白基因SeAKT1 cDNA。其長(zhǎng)度為3189bp，其中ORF為2577bp，編碼858個(gè)氨基酸。氨基酸序列分析表明SeAKT1具有6個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域(S1-S6)，同時(shí)帶有一個(gè)cNMP結(jié)合位點(diǎn)和C端的ANK結(jié)構(gòu)，并且含有一個(gè)錨蛋白結(jié)合結(jié)構(gòu)域KHA，是典型的Shaker家族內(nèi)向整流型鉀離子通道。系統(tǒng)發(fā)育分析顯示該基因?qū)?/p>

3、于Shaker家族鉀離子通道中的AKT1亞族。缺鉀情況下鹽角草幼苗和成苗中SeAKT1表達(dá)量均有所上調(diào)，且幼苗中上調(diào)幅度尤為明顯;同樣，幼苗和成苗中SeAKT1表達(dá)量均可被缺鉀+Na+所誘導(dǎo);在100mMNa+處理的幼苗中表達(dá)量有所增加，然而在700mMNa+處理下成苗中eAKT1表達(dá)略有下降。SeAKT1在鹽角草成苗的根和冠中均有表達(dá)，但在根中表達(dá)量略高。構(gòu)建植物表達(dá)載體pBI121-SeAKT1，利用花器浸泡法將eAKT1基因轉(zhuǎn)入野