蘭屬(Cymbidium)植物與其內(nèi)生真菌間共生關(guān)系的初步研究.pdf

1、為探討蘭屬植物與內(nèi)生真菌間的專一性，以及二者的共生關(guān)系，本研究以云南的6種蘭屬（Cymbidium）植物春劍(C.longibracteatum)、春蘭(C.goeringii)、蕙蘭(C.faberi)、送春(C.cyperifolim)、建蘭(C.ensifolium)、蓮瓣蘭(C.tortisepalum)作為研究材料，對其肉質(zhì)根分離內(nèi)生真菌，同時采用ITS分子技術(shù)分析其遺傳多樣性，并以分離得到的內(nèi)生真菌與蘭屬植物組培根狀莖進行回

2、接試驗和蘭屬植物雜交種子進行共生萌發(fā)試驗。主要研究結(jié)論如下:
　　1、從6種蘭屬植物中分離到30種內(nèi)生真菌，真菌形態(tài)學特征觀察和菌株ITS序列Blast比對結(jié)果皆顯示這30種內(nèi)生真菌隸屬于鐮刀菌屬(Fusariumsp)、毛殼菌屬(Chaetomiumsp)、柱孢霉屬(Cylindrocarponsp)和瘤菌根菌屬（Epulorhizasp）。
　　2、分離的30種內(nèi)生真菌ITS1-5.8S-ITS2序列總長429～563b

3、p，GC含量為41.67％～58.06％,其中ITS1長92～259bp，GC含量為47.66％～58.62％;5.8S長155～158bp，GC含量為40.81％～52.05％;ITS2長146～192bp，GC含量為38.78％～55.56％;聚類分析顯示，分離自送春、蕙蘭、建蘭的內(nèi)生真菌皆屬于鐮刀菌屬，聚在Ⅰ組上;分離自春劍的內(nèi)生真菌除CJ7單獨聚在Ⅳ組外，其他均聚在Ⅰ組上;分離自春蘭的內(nèi)生真菌聚在Ⅰ、Ⅱ2個分支上，分離自蓮瓣蘭的

4、內(nèi)生真菌聚在Ⅱ、Ⅲ2個分支上。ITS序列分析表明春劍、春蘭、蓮瓣蘭、蕙蘭內(nèi)生真菌分別包含292，117，115，75個變異位點。這些說明成年植株春劍、春蘭、蓮瓣蘭和蕙蘭中分離得到的內(nèi)生真菌的遺傳多樣性較送春、建蘭中內(nèi)生真菌的遺傳多樣性豐富。
　　3、分離到的30種內(nèi)生真菌與春蘭根狀莖的共生試驗表明，能促進根狀莖分化出大量或少量不定芽的共有10種菌株，其促進作用效果依次LBL2＞CJ6＞CL6＞CL5＞CL1＞LBL1＞HL1＞CJ

5、4＞CJ2＞CJ7。光學顯微鏡和電子掃描電鏡觀察表明，真菌入侵時，蘭屬植物根狀莖表皮及相鄰的皮層細胞內(nèi)細胞核、葉綠體等細胞器逐漸消失，細胞異常變大，向外形成凸狀。菌絲通過破壞凸狀處的表皮細胞細胞壁進入皮層，在外皮層、中皮層、內(nèi)皮層中均有分布，并在皮層細胞形成菌絲結(jié)和被消化。掃描電鏡圖顯示，被真菌入侵后的根狀莖橫切面組織表面分布有球形顆粒狀物質(zhì)。分離到的30種內(nèi)生真菌與蓮瓣蘭與春劍、春劍與春蘭互為母本、父本雜交種子室內(nèi)萌發(fā)試驗，目前沒有觀