磁分離靶蛋白-配體復合物快速篩選混合物配體庫的技術.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩63頁未讀 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領

文檔簡介

1、本論文提出一種基于磁分離靶蛋白-配體復合物快速篩選混合物配體庫的技術,其過程包括(a)將混合物樣品與適量外源參考配體混合作為用于篩選樣品(pMFS);(b)啟動PMFS中所有配體與固定在納米磁珠上的靶蛋白競爭結合:(c)磁力回收靶蛋白.配體復合物,提取結合的配體;(d)定量PMFS和對應結合配體提取物中每個可檢測配體色譜峰面積;(e)如所有必要條件都滿足,則計算候選配體與參考配體的相對親和力,否則需優(yōu)化PMFS和/或競爭結合系統(tǒng)的組成直

2、到滿足所有必要條件;(f)確定每個混合物庫成分中潛在有價值配體;(g)確定潛在有價值配體中的高親和力配體為潛在hit(s);(h)通過競爭結合判斷潛在hit(s)特異性以確認hit(s);否則確定其它潛在有價值配體的特異性。 用HPLC-MS分析,以生物素衍生物與固定在納米磁珠上鏈親和素為模型,考察此技術用于測定平行液相組合合成(PLCS)單一預期配體混合物、PLCS制備多個預期配體混合物、粗天然產物中多個預期配體等親和力的可靠

3、性,及鑒定粗天然產物中痕量高親和力配體的可行性。 測定混合物中單一預期配體親和力時,維持競爭結合體系參考配體結合率低于10%,逐步增加PMFSs中候選配體量則候選配體結合率逐步降低,同時兩種配體的峰面積可大于各自線性響應截距絕對值的5倍,候選配體相對親和力也逐步降低;當二者結合率都低于10%后相對親和力達到下降曲線水平底部的均值可為該配體的相對親和力。 定量測定混合物中多個預期配體親和力時,對純化生物素衍生物的混合物和P

4、LCS制備的多生物素衍生物混合物,只要其中所含候選配體數(shù)量足夠少且含量差異足夠小,在相同的實驗條件下用HPLC-MS分析能成功篩選出多個混合物中最高親和力的配體。對此兩類樣品,其組成決定此方法可靠性。通過與高親和力參考配體競爭結合和同變性靶蛋白結合,可有效同步判斷混合物中多個候選配體的特異性。 如粗天然產物中候選生物素衍生物間含量差異較小,此技術也可同步測定其中有限數(shù)量候選配體的親和力和同步判斷其特異性。以前一輪回收的配體為樣品

5、進行下一輪的篩選,通過競爭結合、磁分離后提取結合配體等過程的迭代進行,理論上可實現(xiàn)混合物中高親和力配體的指數(shù)富集(EELHA)。用含有多個不同親和力和不同含量生物素衍生物的川芎甲醇提取液為樣品,證實該策略有效富集高親和力配體,從而快速發(fā)現(xiàn)混合物中含量僅2%但親和力高三倍的配體。為提高EELHA的效果,相鄰下輪篩選時靶蛋白量應不多于上一輪回收配體總量的20%,但此迭代過程對應的靶蛋白用量很大。EELHA對發(fā)現(xiàn)已知藥理活性粗天然產物中的痕量

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論