簡介：復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文幕上星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤MR表現(xiàn)的分子生物學(xué)相關(guān)因素的研究姓名張輝申請學(xué)位級別博士專業(yè)影像醫(yī)學(xué)與核醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師周康榮2002426第二部分幕上星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤胍征象與微血管密度的相關(guān)性研究，目的探討星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤MR影像學(xué)特征與腫瘤微血管密度的相關(guān)性，研究MRI對該腫瘤生物學(xué)行為及惡性程度的評估價值OF’，材料與方法對88例術(shù)前MR檢查及術(shù)后病理證實的幕上星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤標(biāo)本進(jìn)行免疫組化染色，測定微血管密度MICROVESSELDENSITY，MVD。按照WHO腦腫瘤分類標(biāo)準(zhǔn)將星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤分為三組低級別星形細(xì)胞瘤LGA49例、間變性星形細(xì)胞瘤AA23例和多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤GBM16例。LO例正常成人腦組織作為對照組。磁共振常規(guī)頭顱掃描后行DDDTPA增強掃描。在MR圖像上測量腫瘤大小、形狀、囊變壞死、信號均勻性、穿越中線、占位效應(yīng)、邊緣界線、出血、瘤周水腫范圍及強化程度。結(jié)果星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤MVD平均值為35731565，正常對照組MVD值為1410527，兩組間比較差異顯著P001。星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤大小、形狀與MVD比較，無統(tǒng)計學(xué)差異P005。隨著腫瘤病理級別的增高，微血管形態(tài)由以竇狀擴(kuò)張為主，逐漸轉(zhuǎn)變成以芽狀或細(xì)索狀血管為主，部分出現(xiàn)球狀血管叢。MVD值亦隨之增大，GBM組MVD明顯高于AA、LGA組，三組之間比較差異顯著PO01。MR圖像中，星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤壞死、出血、信號不均勻、穿越中緣關(guān)系密切P005，P001。聲一一萬結(jié)論星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤MVD除了與腫瘤大瘤周水腫及占位效應(yīng)、強化程度與MVD小、形態(tài)無關(guān)聯(lián)外，與腫瘤的囊變壞死、意義。粼詞唾篡鬻渾移螂度免疫組化技術(shù)廠相關(guān)性研究，1／

簡介：蘇州大學(xué)碩士學(xué)位論文激發(fā)CD40信號對人肺癌細(xì)胞的生物學(xué)作用及其機制研究姓名王天立申請學(xué)位級別碩士專業(yè)呼吸內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師黃建安20040401BIOLOGICALEFFECTOFCD40STIMULATIONONHUMANLUNGCANCERCELLSANDITSPOSSIBLEMECHANISMSABSTRACTOBJECTIVETOINVESTIGATETHEBIOLOGICALEFFECTOFCD40STIMULATIONONHUMANLUNGCANCERCELLSANDITSPOSSIBLEMECHANISMSMETHODSHUMANLUNGCANCERCELLLINESH460，A549ANDSPCA1WERECHOSENASTARGETCELLSANDCD40SIGNALWASSTIMULATEDBYSOLUBLECD40LIGANDSCD40LORAGONISTICCD40MONOCLONALANTIBODY5C1MTTASSAYAND3HTDRINCORPORATIONMETHODWEREUSEDTODETERMINETHEPROLIFERATIONOFTUMORCELLSIMMUNOFLUORESCENCETECHNIQUEANDFLOWCYTOMETRYWEREUSEDTOMONITORCHANGESOFCELLSURFACEMOLECULES，CELLCYCLE，TRAFSEXPRESSIONASWELLASCELLAPOPTOSISEXPRESSIONCHANGESOFBCL2ANDBAXWEREOBSERVEDBYRTPCRFURTHERMORE，CISPLATINDDPORMITOMYCINMMCWASCOINCUBATED、VITLLCELLLINESAFTERCD40STIMULATIONMTTASSAYWASUSEDTODETERMINETHECELLPROLIFERATIONINHIBITIONEFFECTOFCISPLATINORMITOMYCINAFTERCD40STIMULATEDIMMUNOFLUORESCENCETECHNIQUEANDFLOWCYTOMETRYWEREEMPLOYEDTOMONITORTHEEFFECTOFCYTOTOXICITYOFDDPOR、MMCONLUNGCANCARCELLLINESAFTERCD40STIMULATIONTRESULTS1THEREWASANINHIBITIONOFCELLPROLIFERATIONONCD40POSITIVECELLLINESH460ANDA549AFTERCD40STIMULATION272HOURSAFTERCD40STIMULATION，THEEXPRESSIONOFCELLSURFACEMOLECULESCD49E，CD54，TNFRIANDCD95LWEREHIGHERTHANTHOSEINTHECONTROLGROUP，WHILETHEEXPRESSIONOFTNFRIIWASLOWERTHANTHOSEINTHECONTROLGROUPP005THEEXPRESSIONOFTRAF2，3，5，6INH460ANDA549WEREDOWNN

簡介：中國醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文特異性下調(diào)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分子伴侶GRP94對人大腸癌細(xì)胞生物學(xué)特性影響的研究姓名陳瑤申請學(xué)位級別博士專業(yè)細(xì)胞生物學(xué)指導(dǎo)教師宋今丹200331功能，還有助于理解UPR通路的變化?；诖?，我們選擇了人大腸癌細(xì)胞株CCL229作為研究對象，通過特異性核酶打靶的方式，下調(diào)細(xì)胞中GRP94的表達(dá)水平，觀察其對人大腸癌細(xì)胞某些生物學(xué)特性及UPR通路的影響，加深對GRP94、UPR和腫瘤這三者間關(guān)系的了解。方法1穩(wěn)定下調(diào)GRP94的人大腸癌細(xì)胞克隆株的構(gòu)建1分別對含有特異性打靶GRP94核酶的質(zhì)粒PRE／RSVRIBOL和對照組質(zhì)粒PRE／RSV進(jìn)行小量提取、PVULI酶切鑒定?！?測定PRC／RSVRIBOL和PRE／RSV的基因序列，以質(zhì)粒DNA大量提純方法獲得純化的質(zhì)粒。3按照FUGENE?！?TRANSFECTIONREAGENT說明書分別用兩種質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人大腸癌細(xì)胞CCL229。4分別通過RTPER方法和WESTERNBLOT方法從MRNA和蛋白水平檢測GRP94的表達(dá)情況，以此鑒定轉(zhuǎn)染成功的陽性克隆株。2檢測GRP94表達(dá)水平下降對人大腸癌細(xì)胞生物學(xué)特性的影響1光鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)、貼壁狀態(tài)、聚集生長能力和生長速度。2繪制細(xì)胞生長曲線，計算細(xì)胞群體倍增時間。3檢測細(xì)胞聚集能力，計算細(xì)胞的聚集度。4流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期分布。3檢測GRP94表達(dá)水平下降對相關(guān)分子伴侶GRP78和PDI的影響1分別通過RTPER方法和WESTERNBLOT方法從MRNA和蛋白水平檢測分子伴侶GRF78的表達(dá)情況。2分別通過LITPER方法和WESTERNBLOT方法從MRNA和蛋白水平檢測折疊酶PDI的表達(dá)情況。4檢測GRP94表達(dá)水平下降對UPR中CHOP通路的影響1利用WESTERNBLOT和免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測UPR通路特異的，與程序性死亡密切相關(guān)的CHOP蛋白表達(dá)水平。5檢測穩(wěn)定下調(diào)GRP94表達(dá)水平的細(xì)胞株對化療藥物的敏感性2

簡介：華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文轉(zhuǎn)化生長因子Α與人腦星形細(xì)胞瘤生物學(xué)特性的相關(guān)研究姓名徐濱申請學(xué)位級別博士專業(yè)外科學(xué)（神經(jīng)外科）指導(dǎo)教師朱賢立200341華中科技人譬閣濟(jì)艇學(xué)院博士學(xué)做論文者性澍無關(guān)，而與耀形剮胞瘸病理分級、惡性穰艘有最潴相關(guān)性，其中{II綴豢麓裴搴努聚鴦38。9％7／T8爨33。3翳6／18，瓣綴簧勢蘧巍75，0％15／20棚85，O％17／20，IV級搿分別為83、3％10／12椰91，7％{T／12。藤IIT鼗轡專彩襞學(xué)瓣禿罄霹勢，蕊親善裁烈霜秘TGF、EGFR爨波表達(dá)菠異謝照羲性P0．05；MRNA粥拽表逮海28鍘56．溉，在50鍘人艇爨形繼贍癌申嘲FTG弘娃MRNA陽往液逡與種瘸病理努綴蠻顯著淫穗美，其審L～L溪卷鬻竣襲遮為5撼27。寒斡；LLI綴囂舞I4翻70．O‰；IV綴者為9例75．0％。隙III級省與Ⅳ繳潸問無熬湃外，箕衾器綴裂縫籍臻技蓑霧蠢顯著睡尹龜0S≥。天藤鼙囂憋壅霆棗TGFN與EG觸騷自裝遮有擻藩相關(guān)性PO．01；TGFN島PCNA照顯著臻靛委贛美關(guān)系R嚼；864,PO．0I。繼諗1零磺究袋鼴TGF。A／EGFR形戲的睡分泌巧雀人腦星形鰓飚蠖愛叟愛震遨程孛藤黧要襻瀚，TGFO及其辯體蔚籬褒運與靜者往掰箍關(guān)，與夫藏墅薅纓魏瘸熬癱瑾綴慰、溪犍程襲鴦美系。2TG霉NMTH“QA在太腦鼴形綱胞瘤發(fā)漱發(fā)展過稷中起一定的干臀闡，其襲這高低與腫瘤病理級鬟蜜甥轆芙；3≥大簸星甏纓蹩瘞中TGF釋EGFR、PCNA存在攘芙毪，三辮共同刺激腫瘸蜘胞的搬長與耬性增趟。4TGFA、E∞R以殿TGFU。MRNA潞霹攆蔫褥羹大濂星黟纓鼴霪瑟贛程囊辯穗美囂簿，秀漆濠裁定食理的潰療方襄、預(yù)后削疑及療效評定攝供客戲辮考俄掇。美鐮透鬃澎蘩黧滾TGF～一EGFRPCNA卜／2蟊挈專、

簡介：第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文裸鼠脊髓轉(zhuǎn)移灶人粘液表皮樣癌細(xì)胞系MS的建立及其生物學(xué)特性姓名楊宏林申請學(xué)位級別碩士專業(yè)口腔基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)（口腔生物學(xué)）指導(dǎo)教師吳軍正200351第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文ABPASDMSODTFBSFCMMC3MEC1PASPBSRP加SPFSCSC∞TEM中英文縮寫詞表ALCIANBLUEPERIODICACIDSCHIFFDIMETHYLSULFOXIDEDOUBLINGTIMEFETALBOVINESERUMFLOWCYTOMETRYMUCOEPIDERMOIDC鯽CMOMACELLLINEMUCOEPIDERMOIDCARCINOMACELLLINELPERIODICACIDSCHIFFPHODPHATEBUFFEREDSALINE1640ROSEWELLPARKMEMORIALINSTITUTESPECIFICPATHOGENFREESUBCUTANEOUSLYSEVEL“ECOMBINEDIMMUNODEFICIENTTRANSMISSIONELECTRONMICROSEOPE阿辛藍(lán)過碘酸雪夫二甲基亞砜群體倍增時間胎牛血清流式細(xì)胞分析粘液表皮樣癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞系粘液表皮樣癌細(xì)胞系一L過碘酸雪夫磷酸鹽緩沖液RPMLL640培養(yǎng)基無特殊病原體皮下嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷透射電鏡

簡介：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文褪黑素抑制垂體催乳素瘤增生及其細(xì)胞生物學(xué)機制姓名楊全會申請學(xué)位級別博士專業(yè)生理學(xué)指導(dǎo)教師許榮焜曹濟(jì)民20060301

簡介：本研究分為三部分第一部分組織工程人工肌肉的構(gòu)建與評價及神經(jīng)支配特性的改進(jìn)目的體外構(gòu)建組織工程人工肌肉，并分析組織工程人工肌肉中肌球蛋白重鏈亞型（MHC）表達(dá)情況。為進(jìn)一步提高人工肌肉對神經(jīng)遞質(zhì)的敏感性，我們嘗試上調(diào)乙酰膽堿受體在人工肌肉表面的數(shù)目并誘導(dǎo)人工肌肉形成形態(tài)成熟的乙酰膽堿受體。方法將表達(dá)綠色熒光蛋白的C3H小鼠原代成肌細(xì)胞與120ΜLFIBRIN水凝膠混合，體外構(gòu)建人工肌肉。利用實時定量PCR對平面培養(yǎng)細(xì)胞和組織工程人工肌肉中的MHC亞型進(jìn)行分析。利用AGRIN蛋白上調(diào)乙酰膽堿受體在人工肌肉表面的數(shù)目。用LAMININ蛋白在人工肌肉表面誘導(dǎo)形成形態(tài)成熟的乙酰膽堿受體。并用激光共聚焦顯微鏡計數(shù)乙酰膽堿受體數(shù)目，觀察乙酰膽堿受體形態(tài)。結(jié)果未經(jīng)過任何處理的組織工程人工肌肉的MHC亞型處于胚胎期和成熟期之間，相當(dāng)于圍周期（PERINATAL）的發(fā)育水平。平面培養(yǎng)的細(xì)胞中MHC亞型為胚胎期水平。AGRIN蛋白誘導(dǎo)，增加了乙酰膽堿受體在人工肌肉表面的數(shù)目。LAMININ蛋白處理，改善了乙酰膽堿受體的結(jié)構(gòu)，形成形態(tài)成熟乙酰膽堿受體。結(jié)論從發(fā)育學(xué)意義上看，人工組織肌肉表達(dá)更加成熟的MHC亞型，更類似成熟肌肉組織。AGRIN蛋白誘導(dǎo)成功增加乙酰膽堿受體數(shù)目。LAMININ蛋白誘導(dǎo)改善了乙酰膽堿受體的結(jié)構(gòu)，使之變得更加成熟有利于更多神經(jīng)突觸的形成，進(jìn)一步提高了人工組織肌肉在神經(jīng)生物學(xué)上的結(jié)構(gòu)優(yōu)勢，為在人工肌肉中引入神經(jīng)分布奠定了基礎(chǔ)。第二部分VEGF改善組織工程人工肌肉周圍血管網(wǎng)絡(luò)分布的研究目的改善人工組織工程肌肉的生物特性，增加其周圍血管生成，達(dá)到增強其與宿主循環(huán)系統(tǒng)營養(yǎng)與代謝交流的目的，使之在移植后更好與宿主整合，長期生存，在宿主體內(nèi)發(fā)揮作用。方法逆轉(zhuǎn)錄病毒感染成肌細(xì)胞，使其分別表達(dá)VEGF和GFP。用分化培養(yǎng)液，體外融合表達(dá)VEGF和GFP的成肌細(xì)胞，以形成雜交人工肌肉。用共聚焦顯微鏡觀察雜交人工肌肉組織形態(tài)和結(jié)構(gòu)，以及移植前后細(xì)胞存活率。用免疫酶連反應(yīng)檢測VEGF含量。用伊文思藍(lán)染色評價人工肌肉周圍血管網(wǎng)絡(luò)形成情況。結(jié)果表達(dá)VEGF的細(xì)胞可在分化條件下分化為成熟肌細(xì)胞，并形成肌纖維，肌細(xì)胞分化過程不受VEGF生長因子表達(dá)的抑制。用這種細(xì)胞在體外成功構(gòu)建組織工程人工肌肉，結(jié)構(gòu)形態(tài)與生理狀態(tài)下的肌肉相似。VEGF的表達(dá)不影響雜交人工肌肉中肌細(xì)胞的存活率。調(diào)節(jié)雜交比例可調(diào)節(jié)VEGF的生成量。移植到小鼠皮下之后，表達(dá)VEGF的人工肌肉明顯增加人工肌肉周圍血管網(wǎng)絡(luò)的生成，提高肌細(xì)胞的存活率。結(jié)論肌細(xì)胞分泌的VEGF可在移植區(qū)域強烈促進(jìn)局部微血管生成，這種影響可持續(xù)幾個月，為其移植后與宿主整合提供了生理基礎(chǔ)，也有利于肌細(xì)胞所表達(dá)的治療性蛋白盡可能多進(jìn)入血液循環(huán)，在宿主體內(nèi)發(fā)揮有效作用。第三部分PLG生物支架作為骨骼肌細(xì)胞載體的研究及NK細(xì)胞移除對支架上肌細(xì)胞體內(nèi)存活率的影響目的評價人工合成的可降解生物支架PLG作為成骨骼肌細(xì)胞載體的效果，以及去除裸鼠NK細(xì)胞對PLG支架上成熟肌細(xì)胞成活率的影響。方法利用高壓氣泡法成功制備可降解的多孔PLG生物支架。將人類原代骨骼成肌細(xì)胞接種至PLG生物支架上，檢測成肌細(xì)胞在PLG支架是否可體外分化為成熟肌細(xì)胞。將接種肌細(xì)胞的PLG生物支架移植至免疫缺陷型小鼠體內(nèi)，觀察肌細(xì)胞在體內(nèi)存活率。利用抗NK細(xì)胞抗體去除裸鼠體內(nèi)NK細(xì)胞，檢測去除NK細(xì)胞后，PLG生物支架上肌細(xì)胞的存活率。結(jié)果成功制備PLG生物支架。成肌細(xì)胞可在PLG生物支架上分化為成熟肌細(xì)胞。與無張力組相比，PLG支架顯著提供肌細(xì)胞在體存活率。PLG在移植四周后，PLG生物支架上的肌細(xì)胞密度降低了78。去除裸鼠體內(nèi)NK細(xì)胞的影響，在第4周，肌纖維中肌細(xì)胞的存活率達(dá)3472，遠(yuǎn)高于未去除NK細(xì)胞組的存活率2272。經(jīng)過NK細(xì)胞抗體處理過的動物肌纖維綠色熒光強度比未經(jīng)過處理組高2倍以上。結(jié)論PLG生物支架可作為成肌細(xì)胞的載體，為肌細(xì)胞提供張力，成肌細(xì)胞在其上可分化為成熟肌細(xì)胞，形成肌纖維，并長期存活。去除NK細(xì)胞可使肌細(xì)胞在移植之后存活率提高。該實驗為肌細(xì)胞以及PLG生物支架用作基因療法的載體提供了實驗依據(jù)。

簡介：青島大學(xué)博士學(xué)位論文人血小板源性生長因子基因B轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)貓角膜內(nèi)皮細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng)姓名羅文娟申請學(xué)位級別博士專業(yè)眼科學(xué)指導(dǎo)教師王傳富20050518損傷后的愈合情況，經(jīng)SPSSIO0軟件包中聚類分析組間聯(lián)結(jié)方法行統(tǒng)計學(xué)分析處理，重組質(zhì)粒PCDNH。一PDGFB轉(zhuǎn)染組與其他三組非同組資料，PDGFB的轉(zhuǎn)染促進(jìn)了體外培養(yǎng)的貓角膜內(nèi)皮細(xì)胞的能量代謝和有絲分裂，而單純脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染組與未經(jīng)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞組歸為同組資料，說明PDGFB基因可在體外培養(yǎng)的貓角膜內(nèi)皮細(xì)胞中發(fā)揮其促進(jìn)細(xì)胞分裂再生的作用，同時也證明脂質(zhì)體對體外培養(yǎng)的貓角膜內(nèi)皮細(xì)胞沒有毒性作用。五、G418最小致死量篩選出抗性細(xì)胞克隆，行免疫組織化學(xué)染色見該細(xì)胞人PDGFB單克隆抗體免疫組織化學(xué)染色強陽性，明顯區(qū)別于轉(zhuǎn)基因前淡染的貓角膜內(nèi)皮細(xì)胞。結(jié)論EFFECTENE“脂質(zhì)體可介導(dǎo)人PDGFB基因轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的貓角膜內(nèi)皮細(xì)胞，該基因可在貓角膜內(nèi)皮細(xì)胞中長期、穩(wěn)定表達(dá)并促進(jìn)該細(xì)胞的分裂再生，為下一步“轉(zhuǎn)基因角膜內(nèi)皮細(xì)胞的載體移植”的研究奠定基礎(chǔ)，為臨床解決“人角膜內(nèi)皮細(xì)胞不能再生”的難題提供新思路。博士研究生羅文娟眼科學(xué)指導(dǎo)教師王傳富教授關(guān)鍵詞角膜內(nèi)皮細(xì)胞轉(zhuǎn)染血小板源性生長因子增殖

簡介：糖尿病DM創(chuàng)面難愈是常見的臨床現(xiàn)象，其發(fā)生機制可能與機體糖代謝異常、非酶促糖基化反應(yīng)及其生成的晚期糖基化終末產(chǎn)物AGES等一系列生物學(xué)變化所導(dǎo)致的局部微環(huán)境改變有關(guān)。在創(chuàng)面愈合的機制中，中性粒細(xì)胞并非所謂的修復(fù)細(xì)胞，不直接參與纖維增生和傷口愈合，作為最早進(jìn)入創(chuàng)面局部的炎癥細(xì)胞，它僅在創(chuàng)面愈合的早期階段，吞噬、溶解細(xì)胞，清除壞死組織，使壞死組織分離脫落，為組織修復(fù)、創(chuàng)面愈合奠定基礎(chǔ)；同時中性粒細(xì)胞可分泌多種炎癥介質(zhì)和酶類，參與其他炎癥細(xì)胞的活動及炎癥反應(yīng)的調(diào)控。本文探討糖尿病因素對皮膚組織生理狀態(tài)的影響以及糖代謝產(chǎn)物AGES對中性粒細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。方法選用STZ誘導(dǎo)的速發(fā)型DM大鼠模型和糖尿病患者皮膚組織標(biāo)本，通過生化技術(shù)、免疫組化等手段檢測糖尿病大鼠血糖、皮膚中的糖含量和AGES的表達(dá)；檢測皮膚組織中丙二醛MDA、髓過氧化物酶MPO含量；建立不同濃度AGES蛋白體外培養(yǎng)體系，觀察AGES對外周血中性粒細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及其變化規(guī)律。研究表明糖尿病皮膚在損傷前就存在組織損傷，局部皮膚AGES的蓄積及其對于中性粒細(xì)胞的作用所導(dǎo)致的中性粒細(xì)胞功能異常增殖和凋亡、遷移功能、氧化應(yīng)激功能等可能是糖尿病創(chuàng)面難愈的因素之一，糖尿病創(chuàng)面愈合是一種伴有組織進(jìn)行性損害的愈合過程。

簡介：Y99‘585學(xué)校代碼10610學(xué)號S0弛842四川大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)碩士專業(yè)學(xué)位論文納米抗茵材料對人牙齦成纖維細(xì)胞論文題目生鹽生塹鹽受墮盟堡鹽塞墜盟杰作者堡墮學(xué)科專業(yè)旦蕉些壓墮芏指導(dǎo)教師姓名＼職稱宣芏塾握二OO六年五月四川失學(xué)華西口腔醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文縮略詞HAHGFM訂縮略詞表英文全稱中文名稱HYDROXYAPATITE羥基磷灰石HUMANGLNGIVALFIGBROBLAST人牙壤成纖維細(xì)胞345DIMETHYLTHIAZOL2Y125DI3F45Q1基噻唑PHENNYLTETRAZOLIUMBROMIDE225一苯基四氮唑嗅鹽

簡介：山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院碩士學(xué)位論文胰腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因EZRIN、C14F166的相互作用蛋白的篩選及C14F166對腫瘤細(xì)胞生物學(xué)特性的影響姓名張登祿申請學(xué)位級別碩士專業(yè)微生物與生化藥學(xué)指導(dǎo)教師韓金祥20100428山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院碩士學(xué)位論文第一章EZRIN、C140RFL66真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其在293T細(xì)胞的表達(dá)目的構(gòu)建含有EZRIN、C140RFL66基因的真核表達(dá)載體，并使其在293T細(xì)胞中表達(dá)方法提取人胰腺癌PANCI細(xì)胞總RNA，RTPCR法擴(kuò)增EZRIN、C140RFL66基因。將擴(kuò)增得到的基因片段，利用PCR引入酶切位點和標(biāo)簽，與PCDNA31質(zhì)粒連接，獲得PCDNA31FALGEZRINHIS和PCDNA3卜FLAGC140RFL66一HIS重組質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化ECOHDH5Q，雙酶切后測序鑒定。將測序正確的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，48H后，利用RTPCR和WESTERNBOLT驗證外源基因的表達(dá)情況結(jié)果RTPCR擴(kuò)增出的基因片段與理論DNA表達(dá)片段大小一致，測序鑒定顯示克隆的基因序列與GENBANK報道序列相符。RTPCR、WESTERNBLOT證明外源基因在293T細(xì)胞中成功表達(dá)。結(jié)論成功構(gòu)建了表達(dá)載體PCDNA3卜FLAGEZRINHIS、PCDNH3卜FLAGC140RFL66HIS，在293T細(xì)胞中成功表達(dá)。關(guān)鍵詞EZRIN；C140RFL66真核表達(dá)；轉(zhuǎn)染第二章PULLDORN結(jié)合蛋白質(zhì)組學(xué)方法發(fā)現(xiàn)EZRIN、C140RFL66相互作用蛋白目的篩選人胰腺癌細(xì)胞中與EZRIN、C140RFL66蛋白相互作用的蛋白。方法利用脂質(zhì)體將真核表達(dá)載體PCDNA31一FLAGC140RFL66HIS、PCDNA31FLAGEZRINHIS轉(zhuǎn)染至293T細(xì)胞。采用NIAGROSE進(jìn)行HIS標(biāo)簽蛋白的PULLDOWN純化，分離EZFIN、C140RFL66的蛋白結(jié)合復(fù)合體，對蛋白混合物進(jìn)行SDSPAGE分析，選擇差異條帶，進(jìn)行LC／MS／MS或MALDITOFTOF質(zhì)譜鑒定。結(jié)果質(zhì)譜鑒定結(jié)果共篩選出可與EZRIN重組蛋白相互作用的3種蛋白，其分別為RPS9、NRAP、LEUCINERICHGLIOMAINACTIVATEDPROTEINL；C140RFL66重組蛋白相互作用蛋白RPSL3、CKMTLB、CKMTLA、EEFLA、RPSL3、RPSL5、RPL27A、TUTRANSLATIONELONGATIONFACTOR、TCEBL等19種。2

簡介：皮膚組織有著很強的再生能力表皮基底層中的干細(xì)胞終身不斷自我更新、持續(xù)分化以取代終末分化細(xì)胞從而進(jìn)行組織結(jié)構(gòu)的更新。終末分化細(xì)胞的死亡、脫落與基底干細(xì)胞的分裂維持一定的平衡這是維持正常的表皮組織結(jié)構(gòu)和細(xì)胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的基本要求1。隨著分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、組織工程學(xué)及生物工程學(xué)等學(xué)科的發(fā)展表皮干細(xì)胞EPIDERMALSTEMCELLESC憑借其特有的生物學(xué)優(yōu)勢在基因治療、細(xì)胞治療中越來越受到重視成功地分離、培養(yǎng)表皮干細(xì)胞對臨床上創(chuàng)傷修復(fù)、皮膚癌的研究也起著至關(guān)重要的作用28。皮膚創(chuàng)面的修復(fù)是一個多細(xì)胞與細(xì)胞因子參與的復(fù)雜過程。創(chuàng)傷早期創(chuàng)緣周圍產(chǎn)生大量滲出液多種細(xì)胞因子可能調(diào)節(jié)創(chuàng)傷修復(fù)過程中的細(xì)胞反應(yīng)影響細(xì)胞增殖、遷移、細(xì)胞外基質(zhì)合成和釋放等。間質(zhì)細(xì)胞衍生因子1STROMALCELLDERIVEDFACT1SDF1是由間質(zhì)細(xì)胞分泌并被證實在多種成體組織損傷修復(fù)過程中介導(dǎo)成體干細(xì)胞向受損區(qū)域遷移參與創(chuàng)傷修復(fù)。因此我們推測SDF1很可能在皮膚組織創(chuàng)傷后也有表達(dá)并進(jìn)而影響表皮干細(xì)胞在創(chuàng)緣的分布變化及數(shù)量改變。目的1利用改良的人胎盤Ⅳ型膠原快速粘附法從人包皮組織獲得ESC并進(jìn)行無血清培養(yǎng)觀察其體外培養(yǎng)的生長特點尋求一種理想的人ESC體外分離培養(yǎng)技術(shù)。2觀察SDF1對體外培養(yǎng)的人ESC增殖、遷移等生物學(xué)活性的影響并初步探討其作用機制。3以ESC為種子細(xì)胞構(gòu)建三維皮膚等價物THEEDIMENSIONALSKINEQUIVALENTSTDSE全層創(chuàng)傷模型觀察皮膚創(chuàng)面發(fā)生過程中創(chuàng)緣SDF1的表達(dá)及ESC的動態(tài)變化分析二者相關(guān)性。方法1按照DISPASEⅡ胰酶兩步消化法從人包皮組織獲得ESC以人胎盤Ⅳ型膠原按照5ΜCM2的密度包被培養(yǎng)瓶將ESC以無血清培養(yǎng)基DEFINEDKERATINOCYTESERUMFREEMEDIUMDKSFM進(jìn)行體外培養(yǎng)觀察其生長及形態(tài)變化、克隆形成并對原代培養(yǎng)的ESC表面標(biāo)記物Β1INTEGRIN、CK19、PCNA進(jìn)行細(xì)胞免疫組織化學(xué)染色對CD49F和分化標(biāo)記CD71雙染進(jìn)行免疫熒光鑒定。2通過MTT實驗檢測不同濃度SDF1對ESCS增殖的影響以及在相同濃度SDF1作用下另添加不同濃度AMD3100對ESCS增殖的影響通過劃痕實驗檢測不同濃度SDF1對ESCS趨化遷移的作用趨勢及SDF1促遷移運動的時間效應(yīng)。3將成纖維細(xì)胞與鼠尾膠原、DMEM培養(yǎng)基、血清按比例混勻制成“真皮等價物”。經(jīng)過72H培養(yǎng)原代人角質(zhì)形成細(xì)胞接種在真皮等價物的表面。繼續(xù)培養(yǎng)1周后抬高到氣液面使ESC分化為各層最終形成“三維皮膚等價物”隨后用液氮冷凍的金屬棒凍傷模型建立離體全層凍傷創(chuàng)面。在凍傷后3、7天、10天取材免疫組化染色觀察創(chuàng)緣SDF1的表達(dá)變化另添加外源性SDF1和其受體阻斷劑AMD3100作用后在凍傷后3、7天取材免疫組化染色觀察創(chuàng)緣ESCS的分布變化。結(jié)果1Ⅳ型膠原分選的粘附細(xì)胞在DKSFM培養(yǎng)基中生長良好細(xì)胞胞體呈圓形細(xì)胞核大核質(zhì)比大培養(yǎng)9天能行成含200個細(xì)胞以上的大克隆呈鋪路石樣鋪滿瓶底。Β1INTEGRIN、CK19、PCNA均呈陽性表達(dá)。免疫熒光法雙重標(biāo)記顯示細(xì)胞為Α6BRICD71DIM細(xì)胞。2SDF1Α濃度依賴性的促進(jìn)ESC的增殖、遷移作用。在100NGML時促增殖和遷移的作用最顯著AMD3100則能有效阻斷上述增殖和遷移的作用。3利用ESC為種子細(xì)胞成功構(gòu)建了三維皮膚等價物全層凍傷模型。HE染色顯示正常未凍傷區(qū)細(xì)胞分層良好凍傷創(chuàng)緣區(qū)表皮細(xì)胞壞死增多表皮層變薄。免疫組織細(xì)胞化學(xué)染色顯示凍傷發(fā)生后創(chuàng)緣周圍組織中SDF1表達(dá)量不斷增加。但是表達(dá)量的增加不是持續(xù)的第7天即為高峰隨后表達(dá)量迅速減少。至愈合晚期局部無SDF1表達(dá)。伴隨創(chuàng)面愈合進(jìn)程ESC的定位分布不象正常皮膚那樣呈單層片狀、散在分布于表皮基底層而是向創(chuàng)面遷移聚集的趨勢更加明顯且在多層內(nèi)出現(xiàn)散在Β1整合素陽性細(xì)胞。組織形態(tài)學(xué)上表現(xiàn)為新生表皮組織較正常組織明顯增厚。結(jié)論1對人ESC的體外無血清培養(yǎng)方法進(jìn)行觀察發(fā)現(xiàn)通過Ⅳ型膠原快速粘附法能有效的分離ESC。2外源性的SDF1Α對ESC增殖和遷移的促進(jìn)作用這些影響是通過SDF1Α及其受體CXCR4的相互作用實現(xiàn)的。3TDSE離體創(chuàng)面愈合過程中SDF1在創(chuàng)緣呈可控性表達(dá)SDF1通過趨化效應(yīng)引起ESC在創(chuàng)緣的異位分布并且與增殖效應(yīng)一起共同作用加速實現(xiàn)創(chuàng)面的上皮化過程。

簡介：中南大學(xué)碩士學(xué)位論文RNAI封閉內(nèi)源性CMYC對鼻咽癌細(xì)胞58F生物學(xué)特性及分子機制影響的初步研究姓名牛朝霞申請學(xué)位級別碩士專業(yè)病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師李桂源20070501中文摘要CONTROL細(xì)胞系。通過RTPCR齊IWESTEMBLOT鑒定CMYC基因的封閉效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)與對照組相比，I能有效抑制CMYC的高表達(dá)，效果達(dá)70％75％；II的效果不明顯。因此我們選擇抑制效果最佳的58F／SIRNACMYCI／C3口D性單克隆細(xì)胞系進(jìn)行后續(xù)實驗。【抑制CMYC基因高表達(dá)對58F細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變】將58F、58F／SIRNACONTROL和58F／SIRNACMYCI／C3進(jìn)行透射電鏡掃描，結(jié)果顯示抑制CMYC表達(dá)的58F細(xì)胞表面微絨毛逐漸脫落，稀少；部分細(xì)胞結(jié)構(gòu)趨于正?；?，胞漿內(nèi)線粒體數(shù)量中等，結(jié)構(gòu)較清晰，少量內(nèi)質(zhì)網(wǎng)；部分細(xì)胞趨于靜止?fàn)顟B(tài)，胞漿內(nèi)線粒體嵴丟失或呈空泡變，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輕度擴(kuò)張?？瞻讓φ占拔刺幚?8F細(xì)胞表面微絨毛較豐富，胞漿內(nèi)線粒體數(shù)量較多，結(jié)構(gòu)較清晰，核漿比例嚴(yán)重失調(diào)。表明封閉CMYC的高表達(dá)有利于細(xì)胞間的緊密接觸，增強接觸抑制，不利于細(xì)胞的快速生長，從而逆轉(zhuǎn)58F細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為?！疽种艭MYC高表達(dá)對58F細(xì)胞生長的影響】將58F、58F／SIRNACONTROL和58F／SIRNACMYCI／C3細(xì)胞分別接種200個到平板中，靜止培養(yǎng)14天左右直至肉眼可見克隆形成，終止培養(yǎng)，觀察每組細(xì)胞的克隆形成數(shù)并計算克隆形成率；分別取O5104個細(xì)胞接種于96孔板，每種細(xì)胞接種8孔，連續(xù)6天在酶聯(lián)免疫檢測儀上測定各孔吸光度值，進(jìn)行MTT檢測；分別取IXL04個細(xì)胞接II

簡介：東南大學(xué)碩士學(xué)位論文骨橋蛋白下調(diào)對乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為及MMP2表達(dá)的影響姓名焦南林申請學(xué)位級別碩士專業(yè)病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師鄭杰20070501英文摘要DAWⅡ件鰣H旺ONOF僻TEOPON恤BYRNAMTER如REN∞L∞出TOIⅡH曲MOⅡOFPMLMNTIOⅡ，MAUGNANTBEHAVIOR卸DMMP2旺P代SSIONIⅡHUMAⅡB嗍TCANCERCE№ABSTI鼉CTGMDUATEJIAONAMINSUPERVI∞RPRO￡乃伍NGJIESCHOOLOFB船ICMEDICALSCI∞CE，SO叫IEASTU11IVE幅時OBJ∞咖CV訊XPFE商∞OFO娜M如OPNC伽研BUTEST0吐把P聊弘SSI衄鋤DMETASTASISOFH投咖C釩IMPLYIILGTLL舡OPNG刪ISA蛐ITABLETARGETOFRNAINTEM啪CENAIFORBREASTC鋤C盯T11EMPYINTLLISSTUDY’TLLE劬C廿ONOFOPNINBJOIO百CALBCLLAVIOR鋤DMMP2EXPR器SI∞OFB嘲C鋤C盯MDAM23I∞LBWEMMV囂廿韶LED廿1LDUGHO咖PONTHLSNE眥IILGBYRNAIM劬。山S訌斟AEXP∞SSI∞VE咖DESI印EDTOTARGETOPN，PS“∞∞OPNSL柚DPSIL曲CEOPNS2，WE他口铘讎CEDIⅡTOMDAM23L∞LBBYⅡPOFB噸IMIM2000，瞄P％吐VELY1KEXP旭SSI∞OFO剛ANDM仍2W越叫豳UREDBYRTPCRANDWESTERⅡBLOTMREDUCEDPROU衙撕ONCENCYCLECH趾GE缸DTHEC印∞時OF∞FTAGAR∞E孕OWCLLOFTHE岫S舭TEDMDAMB231∞LLS峨鼬SAYEDBYMTT，丑。唧OME乜YAND∞FTAGARO∞ASSAY托SPECDVCLY1HCHM口2PR帳JNINCULTIL托州P鞠衄TANTW罄ME罄U嵋DW曲ELISA酗U№11LEOPN既PN潞I∞INⅡ把仃AMF醅TEDCEUSW越INLLIBJTEDMB0血MRNAA耐PR嘶婦1WELSCON∞QUENⅡY吐屺DOWN腭GUL撕ON0F∞愀研嚇NIILNOT011LYINLLIBBD吐把GROWLLLOFMDAMB23L∞ⅡS，J丑山塢EDSPILA鞴缸RESTILLTLLEM，BIITA且∞LEDTOASIGLLIFICANTRED刪∞INCOLONYFO皿址ION姐DHⅡ伊2EXPRESSI鋤ININ】UIA觚DPMTEINL“ELS笛C伽P玳DWITILTHE∞N仃0L擘。叩S111EREDUCTIONOFM～釁2PMTEIN∞C研IONHTHE鋤SFE曲EDCELLSW如CORLF蚰EDBYELISACOⅡCLUSIOⅡTHESTABLESIL朋CILLGOFOPNGENEEX畔弱IONWI血PL罄MID唧曬SIILG時LI心峨瑚UNEDIN吐圮GROWCLLIN№I曲NOFMDAⅧ231CELLS，SPLLA靶A玳吒DECⅡ眥MALI乎LAMPH朋。卯EALLD加心2EXPRE豁I∞OF血EMAII印ANTCELLST11ATMAYHOLDAPMMISC鷦ANOVELTLIERAPYFOROPN唧MSSIILGBFEASTCⅫ∞IILFLITUREKEYWORDSBRE器TC鋤C盯；OSTEOP0Ⅱ血；RNAINTEMTENCE；MALI刪PH∞O咖PC；MMP2Ⅱ

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