簡(jiǎn)介：第三軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文腺病毒介導(dǎo)PTEN基因?qū)Y(jié)腸癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響姓名朱自滿申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)外科學(xué)（普外）指導(dǎo)教師孫念緒20050501第三軍醫(yī)入學(xué)碩士學(xué)位論文英文縮寫ADBPCMVCPEDABDMS0FBSN【APKMOIM訂ODPAGEPCRP13KPMSFPNNP卯SPTKSRRPCRSDSTBE’玎JMEDXGAL主要英文縮寫詞簡(jiǎn)表英文全稱ADENOVIRUSBASEPAIRCYTOMEGALOVIRUSCYTOPATHICEFFECTDIAMINOBENZIDINEDIMETHYLSULFOXIDEFETALBOVINESERUMMITOGENACTIVATEDPROTEINKINASEMUPTIPLIC畸OFINFECTION345DIMENTYLFIFIAZOL2Y125DIPHMYTEWAZOLIULNBROMIDEOPTICALDENSITYPOLYACRYLAMIDEGELELECTROPHORESISPOLYMERASECHAINREACTIONPHOSPHOINOSIIDE3KINASEPHENYLMETHYLSULFONYLFLUORIDEPHOSPHATASEANDTENSINHOMOLOGUEDELETED∞CB代M的SⅡ鹼10PROTEINTYROSINEPHOSPHATASESPROTEINTYROSINEKINASESREVERSETRANSCRIPTIONPCRSODIUMDODECYLSULPHATETRIS／BORATE／EDTAELECTROPHOMSISBUTIEFN，N，N’，NTETRAMETHYLETHYLENEDIAMINE5一BROMO4一CHLORO3INDOLYLBDGALACTOSIDE中文全稱腺病毒堿基對(duì)人類巨細(xì)胞病毒細(xì)胞病變效應(yīng)二氨基聯(lián)苯胺二甲基亞砜胎牛血清促細(xì)胞分裂素激活的蛋白激酶感染復(fù)數(shù)四甲基偶氮唑光密度聚丙烯酰胺凝膠電泳聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)三磷脂酰肌醇激酶苯甲磺酰氟與張力蛋白同源在LO號(hào)染色體缺失的磷酸酶基因蛋白酪氨酸磷酸酶蛋白酪氨酸激酶反轉(zhuǎn)錄PCR十二烷基硫酸鈉“IRIS／硼酸FEDTA電泳緩沖液N，N，N’，N’四甲基乙二胺5溴4氯3一吲哚一BD半乳糖苷

簡(jiǎn)介：分類號(hào)學(xué)號(hào)學(xué)號(hào)D201178375學(xué)校代碼學(xué)校代碼10487密級(jí)密級(jí)博士學(xué)位論文乙醛脫氫酶乙醛脫氫酶1用于乳腺癌干細(xì)胞的檢用于乳腺癌干細(xì)胞的檢測(cè)及其生物學(xué)特性分析測(cè)及其生物學(xué)特性分析學(xué)位申請(qǐng)人學(xué)位申請(qǐng)人邵軍學(xué)科專業(yè)學(xué)科專業(yè)外科學(xué)（整形外科外科學(xué)（整形外科）指導(dǎo)教師指導(dǎo)教師吳毅平吳毅平教授教授答辯日期答辯日期2014年5月獨(dú)創(chuàng)性聲明獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除文中已經(jīng)標(biāo)明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果。對(duì)本文的研究做出貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名日期年月日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū)本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即學(xué)校有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)華中科技大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。保密□，在年解密后適用本授權(quán)書(shū)。不保密□。（請(qǐng)?jiān)谝陨戏娇騼?nèi)打“√”）學(xué)位論文作者簽名指導(dǎo)教師簽名日期年月日日期年月日本論文屬于

簡(jiǎn)介：樹(shù)突狀細(xì)胞DC作為機(jī)體重要的一種專職抗原遞呈細(xì)胞APC，能有效活化初始T細(xì)胞。NK細(xì)胞可通過(guò)其表面NKG2D受體結(jié)合表達(dá)于DC表面的NKG2D配體。NKDC之間的對(duì)話不僅影響天然免疫的功能，對(duì)獲得性免疫的形成、發(fā)展及結(jié)果有深遠(yuǎn)的影響。為研究DC持續(xù)表達(dá)NKG2D配體對(duì)NK細(xì)胞免疫功能的影響，課題組前期制備了PCD86∶RAE1Ε轉(zhuǎn)基因小鼠，并完成轉(zhuǎn)基因小鼠的篩選鑒定與免疫功能的初步分析，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)NK細(xì)胞表面NKG2D下調(diào)、免疫功能低下的同時(shí)，CD4T細(xì)胞表面NKG2D表達(dá)上調(diào)。本研究擬進(jìn)一步探討轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)NK細(xì)胞表面NKG2D下調(diào)的機(jī)制，并對(duì)轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)異常增多的CD4NKG2DT細(xì)胞亞群的功能及其表型特征進(jìn)行深入研究。研究?jī)?nèi)容分為2部分1PCD86∶RAE1Ε轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)NKG2D介導(dǎo)的NK細(xì)胞功能分析目的觀察PCD86∶RAE1Ε轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)NKG2D介導(dǎo)的免疫功能變化，探討體內(nèi)NK細(xì)胞NKG2D表達(dá)下調(diào)的機(jī)制。方法首先利用免疫熒光技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因小鼠的肝、腎、胸腺、肺、腸等組織中IAIE細(xì)胞表達(dá)RAE1Ε的情況，基于流式細(xì)胞術(shù)分析轉(zhuǎn)基因小鼠脾臟內(nèi)各免疫細(xì)胞表面RAE1Ε的表達(dá)。其次分析轉(zhuǎn)基因小鼠脾臟NK細(xì)胞的頻率及其NKG2D表達(dá)的情況，利用CD107A標(biāo)記法檢測(cè)NK細(xì)胞對(duì)BAF3、BAF3RAE細(xì)胞的殺傷活性并體內(nèi)觀察轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)B16BL6MICA、B16BL6細(xì)胞生長(zhǎng)的情況，右旋葡聚糖硫酸鈉DSS誘導(dǎo)腸炎發(fā)病的情況。另外，體外將轉(zhuǎn)基因小鼠DC細(xì)胞、血清分別與正常小鼠NK細(xì)胞共培養(yǎng)，觀察NK細(xì)胞表面NKG2D表達(dá)的變化。最后檢測(cè)轉(zhuǎn)基因小鼠CD4T、CD4NKG2DT細(xì)胞的頻率，觀察CD4NKG2DT細(xì)胞膜表面是否表達(dá)TGFΒ，并將CD4NKG2DT細(xì)胞與正常小鼠NK細(xì)胞共培養(yǎng)，檢測(cè)NK細(xì)胞NKG2D的表達(dá)。結(jié)果轉(zhuǎn)基因小鼠胸腺、腸道組織、肝臟內(nèi)檢測(cè)到IAIE與RAE1Ε共表達(dá)的細(xì)胞，脾臟CD11C、CD11B、CD19、GR1細(xì)胞上調(diào)RAE1Ε的表達(dá)，而NK11、CD3細(xì)胞無(wú)RAE1Ε的表達(dá)。與對(duì)照小鼠相比，轉(zhuǎn)基因小鼠脾臟NK細(xì)胞的頻率無(wú)明顯變化，但NKG2D表達(dá)下調(diào)至中等程度水平，NK細(xì)胞殺傷BAF3RAE細(xì)胞的活性下降，而殺傷BAF3細(xì)胞的能力無(wú)明顯變化。轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)B16MICA細(xì)胞的生長(zhǎng)速度快于對(duì)照小鼠，而B(niǎo)16細(xì)胞的生長(zhǎng)速度在2種小鼠間無(wú)明顯區(qū)別。DSS處理的轉(zhuǎn)基因小鼠延緩了腸炎的發(fā)病。轉(zhuǎn)基因小鼠來(lái)源的DC細(xì)胞體外刺激NK細(xì)胞5天后，上調(diào)NK細(xì)胞功能，而對(duì)NKG2D的表達(dá)無(wú)明顯影響。轉(zhuǎn)基因小鼠來(lái)源的血清對(duì)NK細(xì)胞表達(dá)NKG2D無(wú)影響。轉(zhuǎn)基因小鼠脾臟CD4T細(xì)胞頻率無(wú)明顯變化，而CD4NKG2DT細(xì)胞的頻率明顯上調(diào)。CD4NKG2DT細(xì)胞膜表面表達(dá)TGFΒ，與NK細(xì)胞共培養(yǎng)后下調(diào)NKG2D的表達(dá)。結(jié)論P(yáng)CD86∶RAE1Ε轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)出現(xiàn)異常增多的CD4NKG2DT細(xì)胞，其分泌TGFΒ介導(dǎo)NK細(xì)胞下調(diào)表達(dá)NKG2D，并下調(diào)NKG2D介導(dǎo)的免疫功能。2PCD86∶RAE1Ε轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)CD4NKG2DT細(xì)胞的生物學(xué)特性研究目的深入分析CD4NKG2DT細(xì)胞的效應(yīng)功能及表型特點(diǎn)，探討CD4NKG2DT細(xì)胞體外和體內(nèi)的誘生機(jī)制，并初步鑒別CD4NKG2DT細(xì)胞與經(jīng)典調(diào)節(jié)型T細(xì)胞TREG、TH17細(xì)胞的生物學(xué)特點(diǎn)。方法首先觀察正常小鼠CD4T細(xì)胞過(guò)繼輸入至小鼠體內(nèi)，其細(xì)胞表面NKG2D表達(dá)的變化。其次，通過(guò)胞內(nèi)細(xì)胞因子法流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因小鼠、CT26細(xì)胞荷瘤小鼠、對(duì)照小鼠體內(nèi)CD4NKG2DT細(xì)胞分泌IL10、TGFΒ、FASL、IFNΓ的情況并將CD4NKG2DT細(xì)胞與CD4NKG2DT細(xì)胞、CD8T細(xì)胞共培養(yǎng)，觀察其抑制效應(yīng)性T細(xì)胞增殖的情況觀察CD4NKG2DT細(xì)胞胞漿內(nèi)顆粒酶B、穿孔素的表達(dá)，及其殺傷靶細(xì)胞活性。另外，檢測(cè)CD4NKG2DT細(xì)胞表面CD44、CD62L的表達(dá)分析該細(xì)胞的活化狀態(tài)，檢測(cè)其表面CD69、CD127、CD25、IAIE、NKG2DL、CD28、CD152的表達(dá)?；隗w外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，觀察不同刺激劑誘導(dǎo)CD4T細(xì)胞表面NKG2D的表達(dá)，并觀察不同刺激劑對(duì)CD4NKG2DT細(xì)胞分裂的影響基于小鼠體內(nèi)B16MICA、B16細(xì)胞荷瘤實(shí)驗(yàn)，體內(nèi)觀察腫瘤細(xì)胞表面MICA的表達(dá)對(duì)CD4NKG2DT細(xì)胞的影響。最后檢測(cè)CD4NKG2DT細(xì)胞表達(dá)FOXP3、CD223、CD39，分泌IL17A和RΓT的轉(zhuǎn)錄情況，以與TREG和TH17細(xì)胞相鑒別。結(jié)果正常小鼠CD4T細(xì)胞輸入轉(zhuǎn)基因小鼠后，明顯上調(diào)了NKG2D的表達(dá)。轉(zhuǎn)基因小鼠、CT26荷瘤小鼠體內(nèi)的CD4NKG2DT細(xì)胞表達(dá)FASL、高分泌TGFΒ、IL10，體外可抑制CD4NKG2DT細(xì)胞和CD8T細(xì)胞增殖，胞漿內(nèi)無(wú)顆粒酶、穿孔素分泌，無(wú)細(xì)胞毒活性，低分泌IFNΓ。CD4NKG2DT細(xì)胞以效應(yīng)記憶型細(xì)胞為主，高表達(dá)CD69、CD25、IAIE、NKG2DL等活化分子。NKG2D在CD4T細(xì)胞的誘導(dǎo)表達(dá)主要與TCRCD3信號(hào)及NKG2DL的持續(xù)刺激有關(guān)，MICA陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞荷瘤小鼠體內(nèi)CD4NKG2DT細(xì)胞的頻率明顯高于MICA陰性腫瘤細(xì)胞荷瘤小鼠。CD4NKG2DT細(xì)胞胞漿內(nèi)無(wú)FOXP3轉(zhuǎn)錄，細(xì)胞表面無(wú)CD223表達(dá)，高水平表達(dá)CD39分子。另外，CD4NKG2DT細(xì)胞可中等程度分泌IL17A，胞漿內(nèi)低水平轉(zhuǎn)錄核因子RΓT。結(jié)論P(yáng)CD86∶RAE1Ε轉(zhuǎn)基因小鼠、CT26荷瘤小鼠體內(nèi)均出現(xiàn)一群CD4NKG2DT細(xì)胞，該T細(xì)胞亞群主要分泌IL10、TGFΒ和SFASL，發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)功能。CD4NKG2DT細(xì)胞是不同于TREG細(xì)胞的一種調(diào)節(jié)CD4T細(xì)胞亞群。MICA陽(yáng)性腫瘤個(gè)體內(nèi)誘生的CD4NKG2DT細(xì)胞可能參與了腫瘤免疫逃逸過(guò)程。

簡(jiǎn)介：中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院碩士學(xué)位論文人非小細(xì)胞肺癌吉西他濱耐藥細(xì)胞系的建立及其生物學(xué)特性研究姓名王偉霞申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師劉曉晴20060530軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院碩士學(xué)位論文人非小細(xì)胞肺癌吉西他濱耐藥細(xì)胞系的建立及其生物學(xué)特性研究摘要目的選擇對(duì)非小細(xì)胞肺癌一線化療藥物吉西他濱敏感的人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系，以吉西他濱為誘導(dǎo)藥物，初步探討不同誘導(dǎo)方法對(duì)人非小細(xì)胞肺癌吉西他濱耐藥細(xì)胞系建立的影響、人TH細(xì)胞肺癌吉西他濱耐藥細(xì)胞系的生物學(xué)特性以及人非小細(xì)胞肺癌吉西他濱耐藥細(xì)胞系敏感藥物對(duì)其的作用。方法以目前常用的兩種誘導(dǎo)方法“高濃度間歇誘導(dǎo)”和“藥物濃度遞增誘導(dǎo)”為依據(jù)，模仿臨床用藥方式，設(shè)計(jì)了“吉西他濱臨床血漿峰濃度間歇誘導(dǎo)”、“吉西他濱2／3臨床血漿峰濃度間歇誘導(dǎo)”、“吉西他濱臨床血漿峰濃度沖擊與逐步增加劑量相結(jié)合誘導(dǎo)”和“吉西他濱2／3臨床血漿峰濃度沖擊與逐步增加劑量相結(jié)合誘導(dǎo)”4種誘導(dǎo)方法；根據(jù)MTT法檢測(cè)結(jié)果，從不同病理類型人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系中篩選出吉西他濱敏感細(xì)胞系人肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549和人肺大細(xì)胞癌細(xì)胞系NCIH460，以非小細(xì)胞肺癌的一線化療藥物吉西他濱為誘導(dǎo)藥物，采用如上所述4種方法進(jìn)行誘導(dǎo)，在誘導(dǎo)的不同時(shí)問(wèn)段觀察其形態(tài)學(xué)特征、耐藥指數(shù)、耐藥譜、生長(zhǎng)曲線及倍增時(shí)間、細(xì)胞周期和DNA含量等指標(biāo)，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析，初步判定4種誘導(dǎo)方法對(duì)人非小細(xì)胞肺癌吉西他濱耐藥細(xì)胞系建立的影響；在此過(guò)程中，還檢測(cè)了其非小細(xì)胞肺癌相關(guān)腫瘤標(biāo)志物的表達(dá)情況，并分別從DNA、MRNA和蛋白水平研究其生物學(xué)特性；最后，從人TH細(xì)胞肺癌吉西他濱耐藥細(xì)胞系的耐藥譜中選擇敏感藥物初步研究其對(duì)人非小細(xì)胞肺癌吉西他濱耐藥細(xì)胞系生物學(xué)特性的作用。結(jié)果成功建立了人TH細(xì)胞肺癌吉西他濱耐藥細(xì)胞系A(chǔ)549／GEM包括A5491一L／GEM、A54912／GEM、A54921／GEM和H46THZ／GEM和H460／GEM包括H46012／GEM、H46FFZDGEM和H46022／GEM，其耐藥指數(shù)依次為38277、7263、115297、25679、1644、129783、8695。倒置光學(xué)顯微鏡下可見(jiàn)A549細(xì)胞呈梭形，大小一致；NCLH460細(xì)胞呈多邊形，大小一致；而產(chǎn)生耐藥性的細(xì)胞形態(tài)各異，大小不一，且體積明顯增大，透光性減弱。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，耐藥細(xì)胞系均產(chǎn)生了不同范圍、不同程度的多藥耐藥性，其生物學(xué)特性差一1

簡(jiǎn)介：分類號(hào)密級(jí)國(guó)際十進(jìn)分類號(hào)（UDC）第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)位論文凋亡抑制基因凋亡抑制基因CFLIP的RNA干擾對(duì)骨肉瘤干擾對(duì)骨肉瘤細(xì)胞株細(xì)胞株MG63生物學(xué)活性的影響生物學(xué)活性的影響（題名和副題名）張小平（作者姓名）指導(dǎo)教師姓名周勇教授（主任醫(yī)師）指導(dǎo)教師單位第四軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院骨科申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)名稱外科學(xué)（骨外）論文提交日期201104答辯日期201105論文起止時(shí)間2008年10月至2011年04月學(xué)位授予單位第四軍醫(yī)大學(xué)凋亡抑制基因凋亡抑制基因CFLIP的RNA干擾對(duì)骨肉瘤干擾對(duì)骨肉瘤細(xì)胞株細(xì)胞株MG63生物學(xué)活性的影響生物學(xué)活性的影響研究生張小平學(xué)科專業(yè)外科學(xué)（骨外）所在單位第四軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院骨科導(dǎo)師周勇教授（主任醫(yī)師）輔導(dǎo)教師楊彤濤副教授（副主任醫(yī)師）資助基金項(xiàng)目資助基金項(xiàng)目自選課題關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞骨肉瘤CFLIPRNA干擾增殖凋亡中國(guó)人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)二O一一年四月

簡(jiǎn)介：目的神經(jīng)干細(xì)胞移植治療腸神經(jīng)元缺陷性疾病是一種潛在的、具有臨床應(yīng)用前景的根治方法腸神經(jīng)干細(xì)胞ENTERICNEURALSTEMCELLSENSCS可能是合適的移植干細(xì)胞源本研究從胎大鼠消化道分離培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞并與中樞神經(jīng)系統(tǒng)來(lái)源的神經(jīng)干細(xì)胞CENTRALNERVOUSSYSTEMDERIVEDNEURALSTEMCEILSCNSNSCS進(jìn)行增殖和分化特性比較研究為開(kāi)展進(jìn)一步腸神經(jīng)干細(xì)胞的移植應(yīng)用提供依據(jù)方法1采用改良的ENSCS培養(yǎng)液以反復(fù)傳代法從胚胎20天SD大鼠提取神經(jīng)干細(xì)胞2進(jìn)行NESTIN、TUI1、GFAP和SMA免疫熒光化學(xué)染色以確定分離培養(yǎng)的細(xì)胞是否為ENSCS3同時(shí)從同一胞胎鼠分離培養(yǎng)ENSCS和CNSNSCS分別比較兩者的神經(jīng)球生長(zhǎng)情況4CCK8測(cè)定的兩種神經(jīng)干細(xì)胞增殖速度5流式細(xì)胞儀測(cè)定、比較兩種神經(jīng)干細(xì)胞TUJ1、GFAP、NESTIN、RET染色陽(yáng)性細(xì)胞比例結(jié)果1培養(yǎng)第35天見(jiàn)細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)第67天貼壁細(xì)胞出現(xiàn)神經(jīng)球樣結(jié)構(gòu)第910天懸浮生長(zhǎng)的腸神經(jīng)球形成2通過(guò)我們使用的ENSCS培養(yǎng)液及分離培養(yǎng)方法培養(yǎng)的細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)NESTIN能分化成為表達(dá)TUJ1的神經(jīng)元和表達(dá)GFAP的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞以及表達(dá)SMA的平滑肌細(xì)胞確認(rèn)為ENSCS3ENSCS早期呈貼壁生長(zhǎng)神經(jīng)球生長(zhǎng)速度慢于CNSNSCS但神經(jīng)球表面常有長(zhǎng)的突起并相互連接成網(wǎng)絡(luò)狀4兩種神經(jīng)干細(xì)胞傳代培養(yǎng)第三天CCK8測(cè)定ENSCS的細(xì)胞增殖速度要慢于CNSNSCSP0056流式細(xì)胞儀測(cè)定兩種干細(xì)胞GFAP陽(yáng)性細(xì)胞比例分別為217﹪和225﹪P0057流式細(xì)胞儀測(cè)定兩種干細(xì)胞NESTIN陽(yáng)性細(xì)胞比例分別為108﹪和108﹪P0058流式細(xì)胞儀測(cè)定兩種干細(xì)胞RET陽(yáng)性細(xì)胞比例分別為14﹪和70﹪P005結(jié)論1通過(guò)我們使用的ENSCS培養(yǎng)液及分離培養(yǎng)方法能夠培養(yǎng)出腸神經(jīng)干細(xì)胞2培養(yǎng)的細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)NESTIN能分化為表達(dá)TUI1的神經(jīng)元、表達(dá)GFAP的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和表達(dá)SMA陽(yáng)性的的平滑肌細(xì)胞確認(rèn)為腸神經(jīng)干細(xì)胞3ENSCS細(xì)胞增殖速度慢于CNSNSCS4ENSCS分化為神經(jīng)元的比例與CNSNSCS類似5ENSCS分化為神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的比例與CNSNSCS類似6ENSCS中表達(dá)RET陽(yáng)性的細(xì)胞比例要低于CNSNSCS

簡(jiǎn)介：分類號(hào)密級(jí)UDC編號(hào)學(xué)位論文香煙對(duì)人皮脂腺細(xì)胞生物學(xué)活性影響及其機(jī)制的研究STUDYONTHEEFFECTSOFCIGARETTESMOKEONBIOLOGYOFHUMANSEBOCYTESANDITSMECHANISMS指導(dǎo)教師姓名鞠強(qiáng)、宋寧?kù)o主任醫(yī)師安徽醫(yī)科大學(xué)上海皮膚病臨床學(xué)院申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)名稱皮膚病與性病學(xué)提交論文日期20140313論文答辯日期20140522學(xué)位授予單位和日期安徽醫(yī)科大學(xué)答辯委員會(huì)主席張學(xué)軍評(píng)閱人曾抗、柏冰雪2014年5月

簡(jiǎn)介：目的免疫組織化學(xué)法檢測(cè)病理性瘢痕和周圍正常皮膚組織中成纖維細(xì)胞CD90表達(dá)情況；采用組織塊法原代培養(yǎng)建立病理性瘢痕成纖維細(xì)胞模型；使用免疫細(xì)胞化學(xué)法、免疫熒光雙標(biāo)記法結(jié)合激光掃描共聚焦顯微鏡，檢測(cè)體外培養(yǎng)的病理性瘢痕和正常皮膚成纖維細(xì)胞中CD90表達(dá)情況，并分析CD90表達(dá)和成纖維細(xì)胞增殖、合成、收縮等功能的相關(guān)性。方法1取手術(shù)切除的瘢痕疙瘩4例、增生性瘢痕12例、正常皮膚瘢痕邊緣16例標(biāo)本，組織切片HE染色進(jìn)一步證實(shí)臨床診斷后，分為瘢痕疙瘩組、瘢痕疙瘩周圍正常皮膚組、增生性瘢痕組、增生性瘢痕周圍正常皮膚組。2免疫組織化學(xué)SABC法檢測(cè)不同組別中成纖維細(xì)胞的CD90表達(dá)情況。3每組標(biāo)本中選取特異性較強(qiáng)的組織塊各三例，原代培養(yǎng)這四種不同組織來(lái)源的成纖維細(xì)胞，通過(guò)觀察細(xì)胞形態(tài)和增殖周期，檢測(cè)體外培養(yǎng)的三種成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)活性差異。4經(jīng)過(guò)3次傳代、自然純化后得到性質(zhì)穩(wěn)定的成纖維細(xì)胞，凍存后復(fù)蘇傳13代，制成細(xì)胞爬片，免疫細(xì)胞化學(xué)SABC法染色檢測(cè)CD90的表達(dá)情況。5間接法免疫熒光雙重標(biāo)記CD90和Ⅰ型膠原蛋白、CD90和KI67、CD90和ΑSMA每株細(xì)胞，激光共聚焦顯微鏡下觀測(cè)細(xì)胞并攝像后，通過(guò)計(jì)算每系成纖維細(xì)胞CD90、Ⅰ型膠原蛋白、ΑSMA的熒光值和KI67陽(yáng)性細(xì)胞百分比，檢測(cè)成纖維細(xì)胞中四種蛋白的表達(dá)情況。6統(tǒng)計(jì)分析CD90表達(dá)與其他3種蛋白表達(dá)的相關(guān)性。7共聚焦多通道、多層次掃描單個(gè)成纖維細(xì)胞，分析CD90和ΑSMA表達(dá)的關(guān)系。結(jié)果1免疫組織化學(xué)染色顯示4例瘢痕疙瘩組織及其周圍正常皮膚中未發(fā)現(xiàn)CD90陽(yáng)性成纖維細(xì)胞，而12例增生性瘢痕組織中7例有較多肥大的CD90陽(yáng)性成纖維細(xì)胞，增生性瘢痕周圍正常皮膚中也有少量體積較小的CD90陽(yáng)性細(xì)胞。2組織塊法原代培養(yǎng)建立了性狀穩(wěn)定的病理性瘢痕成纖維細(xì)胞模型。3免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示體外培養(yǎng)不同組織來(lái)源的細(xì)胞株均表達(dá)CD90。4免疫熒光雙重標(biāo)記結(jié)合共聚焦掃描熒光定量發(fā)現(xiàn)增生性瘢痕來(lái)源成纖維細(xì)胞的CD90表達(dá)強(qiáng)于正常皮膚的P005。5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析未發(fā)現(xiàn)體外培養(yǎng)的各組成纖維細(xì)胞CD90表達(dá)和ΑSMA、Ⅰ型膠原蛋白、KI67具有相關(guān)性。6單細(xì)胞共聚焦掃描發(fā)現(xiàn)CD90和ΑSMA具有共區(qū)域表達(dá)和表達(dá)趨勢(shì)較一致的特點(diǎn)。結(jié)論1增生性瘢痕中，CD90表達(dá)陽(yáng)性的成纖維細(xì)胞可能是瘢痕增生的特異表型。2組織塊法原代培養(yǎng)可以建立病理性瘢痕成纖維細(xì)胞的體外模型。3增生性瘢痕來(lái)源的成纖維細(xì)胞存在CD90多量表達(dá)的特異表型。4單個(gè)瘢痕成纖維細(xì)胞CD90和ΑSMA有共區(qū)域表達(dá)的特點(diǎn)和一致的表達(dá)趨勢(shì)，二者可能有一定的協(xié)同關(guān)系。

簡(jiǎn)介：南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文野生型XPD轉(zhuǎn)染對(duì)膽管癌細(xì)胞生物學(xué)行為影響姓名王振杰申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師朱水山20100501摘要結(jié)論野生型XPD基因可以抑制膽管癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，XPD基因可抑制CYCLINDL、CMYC基因的表達(dá)，增2HP53基因表達(dá)。關(guān)鍵詞膽管癌，QBC939細(xì)胞，XPD，CMYC，CYCLINDL，P53，細(xì)胞周期111

簡(jiǎn)介：背景下腰痛LOWBACKPAINLBP是臨床常見(jiàn)疾病是導(dǎo)致勞動(dòng)力喪失的主要原因之一現(xiàn)在一致認(rèn)為椎間盤退變性疾病DEGENERATIVEDISCDISEASEDDD是引起LBP最常見(jiàn)的原因。有報(bào)道發(fā)現(xiàn)80％的人一生當(dāng)中都曾發(fā)生過(guò)LBP如此高的發(fā)病率給國(guó)家和社會(huì)帶來(lái)了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。目前治療DDD的方法包括保守治療和手術(shù)治療。保守治療屬對(duì)癥治療以減輕和緩解疼痛為目的不能解決椎間盤INTERVERTEBRALDISCIVD退變導(dǎo)致的生物學(xué)喪失問(wèn)題因此并不能從根本上解決疼痛的根源。手術(shù)治療主要包括髓核摘除術(shù)和脊柱融合術(shù)。手術(shù)治療旨在解除突出的椎間盤組織的機(jī)械壓迫作用從而達(dá)到解除疼痛的目的但其也因未能恢復(fù)IVD的生物學(xué)性能遠(yuǎn)期效果并不好且常因內(nèi)固定的使用而加速相鄰節(jié)段椎間盤退變從而發(fā)生新的問(wèn)題。隨著科學(xué)技術(shù)的日新月異特別是近年來(lái)逐漸出現(xiàn)了多種IVD移植和人工椎間盤置換技術(shù)這些技術(shù)一定程序上改善了臨床治療的效果但這些技術(shù)也沒(méi)有從根本上解決或者逆轉(zhuǎn)IVD的生物學(xué)功能仍然存在許多并發(fā)癥和缺陷?，F(xiàn)在認(rèn)為理想的治療DDD的方法是既能緩解疼痛癥狀又能恢復(fù)IVD的結(jié)構(gòu)和生理功能遠(yuǎn)期效果好復(fù)發(fā)率低。隨著基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)特別是干細(xì)胞研究的迅速發(fā)展基于干細(xì)胞的治療手段已成為治療DDD最有希望前途的手段之一。近年來(lái)應(yīng)用組織工程技術(shù)對(duì)退變椎間盤進(jìn)行再生和修復(fù)的研究取得了一些成績(jī)尋求以提高所構(gòu)建的組織工程椎間盤的生物學(xué)活性為目的的新型種子細(xì)胞來(lái)源成為一項(xiàng)重要的任務(wù)。當(dāng)前多項(xiàng)研究證實(shí)人退變纖維環(huán)、髓核組織中存在具有多向分化潛能的干細(xì)胞。此外在我們的前期工作中課題組從人退變軟骨終板中亦分離出類似于MSC的干細(xì)胞這些細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)可以向骨、軟骨、脂、肌方向分化且體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示出比BMMSCS更強(qiáng)的成軟骨能力。本研究旨在前期研究的基礎(chǔ)上從人退變椎間盤中分離、擴(kuò)增纖維環(huán)細(xì)胞、髓核細(xì)胞、軟骨終板細(xì)胞經(jīng)瓊脂糖懸浮培養(yǎng)法篩選后并探討纖維連接蛋白篩選的效能所獲取的干細(xì)胞克隆與來(lái)自同一個(gè)體的BMMSCS進(jìn)行初步的細(xì)胞生物學(xué)特性比較作為種子細(xì)胞分別構(gòu)建組織工程髓核進(jìn)一步比較上述四種干細(xì)胞在動(dòng)物體內(nèi)的髓核再生和椎間盤的修復(fù)能力。目的通過(guò)體內(nèi)、外實(shí)驗(yàn)對(duì)NPSCS、AFSCS、CESCS與BMMSCS的生物學(xué)特性進(jìn)行檢測(cè)與比較初步探討四種干細(xì)胞在細(xì)胞形態(tài)、增殖活性、表面標(biāo)記物和體外向三系分化的能力以及作為組織工程種子細(xì)胞在組織工程應(yīng)用上的生物學(xué)特性差異以期尋找一種新的、可應(yīng)用于組織工程學(xué)的種子細(xì)胞為組織工程椎間盤的構(gòu)建甚至臨床的應(yīng)用治療提供良好的種子細(xì)胞來(lái)源。方法從因患腰椎間盤退變性疾病行椎間盤摘除植骨融合術(shù)中收集符合納入標(biāo)準(zhǔn)的標(biāo)本。將手術(shù)中最先切除出來(lái)的AF組織經(jīng)副教授以上職稱經(jīng)驗(yàn)豐富的術(shù)者確認(rèn)后收入AF標(biāo)本盒隨后兩次切除組織予以舍棄其后切除的標(biāo)本經(jīng)術(shù)者確認(rèn)為NP時(shí)裝NP標(biāo)本盒刮除的CEP裝入CEP盒植骨前取髂骨時(shí)接5ML骨髓以上標(biāo)本再在解剖顯微鏡下清理異物雜質(zhì)如韌帶、肌肉及脂肪等再次分離AF、NP及CEP運(yùn)用機(jī)械酶消化法獲取AF細(xì)胞、NP細(xì)胞和CEP細(xì)胞。BMMSCS運(yùn)用PERCOLL液梯度分離法獲取。獲得的IVD來(lái)源的三種細(xì)胞經(jīng)體外擴(kuò)增至第2代時(shí)第2代細(xì)胞經(jīng)瓊脂糖懸浮培養(yǎng)法篩選并初步探討FIBONECTIN差別粘附法的篩選效果挑選取單細(xì)胞形成的克隆進(jìn)行體外擴(kuò)增擴(kuò)增后的細(xì)胞進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)干細(xì)胞標(biāo)志物、多向分化能力進(jìn)行干細(xì)胞的鑒定。同樣經(jīng)誘導(dǎo)向骨、軟骨及脂三系分化的不同干細(xì)胞經(jīng)RTPCR及組織學(xué)檢測(cè)分析尋找不同干細(xì)胞向不同細(xì)胞系分化能力的差異性。將不同干細(xì)胞復(fù)合藻酸鹽體外構(gòu)建組織工程髓核培養(yǎng)1、7、14及28天后進(jìn)行支架細(xì)胞增殖檢測(cè)、DNA和SGAG含量檢測(cè)最后行SEM檢測(cè)尋找差異性。另外所獲細(xì)胞經(jīng)CFDASE熒光染料標(biāo)記后植入纖維環(huán)穿刺抽髓核抽吸法制造的椎間盤退變動(dòng)物模型體內(nèi)于術(shù)后第1、3及6月后進(jìn)行MRI和X線檢測(cè)評(píng)估IVD的退變情況并在第6月處死動(dòng)物進(jìn)行目標(biāo)椎間盤的組織學(xué)檢測(cè)評(píng)估。鑒于在前兩部分實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)四種不同干細(xì)胞中CESCS具有最強(qiáng)的體外成骨及成軟骨能力復(fù)合藻酸鹽構(gòu)建的組織工程髓核也具有良好的生物學(xué)性能。此外已有大量研究發(fā)現(xiàn)BMMSCS具有良好的體內(nèi)成骨效應(yīng)常常作為種子細(xì)胞來(lái)探討用于橫突間植骨融合的應(yīng)用研究并顯示出了良好的應(yīng)用前景。因此我們特將CESCS與BMMSCS一起復(fù)合多孔羥基磷灰石植入新西蘭大白兔兩側(cè)橫突間術(shù)后2月時(shí)間內(nèi)進(jìn)行X線、三維CT及MICROCT檢測(cè)及組織學(xué)評(píng)估探討兩種不同干細(xì)胞間的成骨效應(yīng)差異分析和評(píng)估橫突間融合的融合效率差異。數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS130軟件作統(tǒng)計(jì)學(xué)處理定量結(jié)果采用配對(duì)T檢驗(yàn)、單因素方差分析和重復(fù)測(cè)量的單因素方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析P結(jié)果1來(lái)自同一個(gè)體的AFSCS、NPSCS、CESCS與BMMSCS形態(tài)上類似呈成纖維細(xì)胞樣外觀但仍存在細(xì)小差別AFSCS最細(xì)長(zhǎng)BMMSCS最寬大而CESCS尺寸最短N(yùn)P居中四種干祖的體外增殖能力沒(méi)有顯著差異在體外實(shí)驗(yàn)觀察中經(jīng)PCR及半定量分析CESCS成骨和成軟骨能力最強(qiáng)AFSCS和BMMSCS居中兩者沒(méi)有顯著差異而NPSCS最弱BMMSCS成脂能力最強(qiáng)NPSCS次之CESCS和AFSCS最弱流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果表明AFSCS和CESCS的CD105表面標(biāo)志物均值呈中強(qiáng)表達(dá)低于95而NPSCS略低于95四組干細(xì)胞的其它標(biāo)志物的表達(dá)滿足ISCT對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞的定義標(biāo)準(zhǔn)四種干細(xì)胞體外構(gòu)建的組織工程髓核培養(yǎng)結(jié)果表明CESCS與BMMSCS組中合成和分泌的SGAG與DNA含量最高NPSCS次之AFSCS最弱組織工程髓核中的細(xì)胞增殖無(wú)顯著差異組織工程髓核的SEM結(jié)果表明各干細(xì)胞皆與支架粘附較好在28天后能分泌大量的ECM其中CESCS最多BMMSCS次之NPSCS居中AFSCS最弱。2AFSCS、NPSCS、CESCS與BMMSCS復(fù)合藻酸鹽植入椎間盤退變的動(dòng)物模型體內(nèi)通過(guò)術(shù)后的檢測(cè)分析CESCS藻酸鹽復(fù)合物相對(duì)其余三組細(xì)胞具有最強(qiáng)的髓核再生和椎間盤修復(fù)能力BMMSCS藻酸鹽和NPSCS藻酸鹽居中而AFSCS藻酸鹽最弱。3CESCS與BMMSCS與HA復(fù)合進(jìn)行兔腰椎橫突間植骨對(duì)比中兩組干細(xì)胞復(fù)合HA皆能達(dá)到橫突融合增強(qiáng)脊柱的穩(wěn)定性CESCS相對(duì)BMMSCS具有更強(qiáng)的體內(nèi)成骨能力多孔羥基磷灰石在應(yīng)用于腰椎橫突間植骨融合實(shí)驗(yàn)時(shí)抗折性較差需要加以改進(jìn)以適應(yīng)一定的抗折性要求。結(jié)論1體外比較實(shí)驗(yàn)中CESCS具有最強(qiáng)的成骨和成軟骨能力AF和BMMSCS居中NPSC最弱。2CESCS顯示了用于構(gòu)建組織工程髓核的優(yōu)秀的生物學(xué)特性在體內(nèi)或體外都可以作為一種具有優(yōu)越性能的種子細(xì)胞應(yīng)用于髓核組織工程領(lǐng)域發(fā)揮干細(xì)胞的潛能。3初步實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明相比較BMMSCSCESCS具有更強(qiáng)的體內(nèi)成骨能力。此外CESCS能夠作為一種優(yōu)秀的種子細(xì)胞用于腰椎橫突間融合通過(guò)提高融合率和增強(qiáng)成骨效應(yīng)達(dá)到增加脊柱穩(wěn)定性的作用。

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多人膝骨關(guān)節(jié)炎患者關(guān)節(jié)液中納米細(xì)菌檢測(cè)及其對(duì)軟骨細(xì)胞生物學(xué)形狀的影響和機(jī)制探討.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：粘液表皮樣癌是口腔中常見(jiàn)的涎腺惡性腫瘤占涎腺惡性腫瘤30﹪左右而且區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高低分化型粘液表皮樣癌的復(fù)發(fā)率高達(dá)60﹪78﹪患者5年生存率只有017﹪目前臨床上治療仍以手術(shù)治療、放射治療和化學(xué)治療為主因此有必要探索新的治療方法通過(guò)補(bǔ)充或替代體內(nèi)基因的缺陷或不足治療人類疾病的基因治療方法是腫瘤治療的新途徑是當(dāng)今醫(yī)學(xué)研究中有前景的研究之一由于涎腺屬于外分泌腺位置表淺其解剖特點(diǎn)特別適于基因治療OHTA等在1996年首先披露在人染色體3P142區(qū)域利用外顯子捕捉法得到了一個(gè)CDNA序列長(zhǎng)約11KB的新基因該基因?qū)儆贖ITHISTIDIRIAD組氨酸三聚體超家族編碼一個(gè)168KDA蛋白質(zhì)且含有脆性斷裂位點(diǎn)FRA3B故命名為脆性組氨酸三聚體FRAGILEHISTIDINETRIADFHIT粘液表皮樣癌細(xì)胞系MEC1是該教研室建立的永生化細(xì)胞系來(lái)源于腮腺粘液表皮樣癌低分化型組織具有高成瘤性和轉(zhuǎn)移性該研究圍繞FHIT基因在口腔惡性腫瘤細(xì)胞系MEC1細(xì)胞、舌癌TCA8113細(xì)胞及其衍生細(xì)胞系M3MSPTBTBT1細(xì)胞口底鱗癌HSC2細(xì)胞中的缺失及人正常FHIT基因轉(zhuǎn)染對(duì)人粘液表皮樣癌MEC1細(xì)胞體外生物學(xué)特性的影響及在裸鼠體內(nèi)成瘤的抑制作用研究結(jié)果表明脂質(zhì)體真核表達(dá)載體基因轉(zhuǎn)移系統(tǒng)是安全、簡(jiǎn)便、有效的基因轉(zhuǎn)移系統(tǒng)將人正常FHIT基因轉(zhuǎn)染MEC1細(xì)胞在體外及動(dòng)物體內(nèi)均能有效抑制MEC1細(xì)胞的增殖力并能提高M(jìn)EC1細(xì)胞的分化程度脂質(zhì)體真核表達(dá)載體介導(dǎo)人正常FHIT基因?yàn)檗D(zhuǎn)染粘液表皮樣癌的基因治療提供了理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)

簡(jiǎn)介：重慶醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文成骨生長(zhǎng)肽對(duì)成骨細(xì)胞在種植體表面相關(guān)生物學(xué)特性的研究姓名孟琳申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)口腔臨床醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師王璐20080501重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文結(jié)論在本實(shí)驗(yàn)條件下，OGP在10叫0_LO’7MOL／L濃度范圍內(nèi)能促進(jìn)鈦片表面成骨細(xì)胞的增殖和分化活動(dòng)，并且有各自的最大有效濃度。關(guān)鍵詞成骨生長(zhǎng)肽，成骨細(xì)胞，種植體3

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多低強(qiáng)度脈沖式超聲波對(duì)三維培養(yǎng)兔關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞、基質(zhì)的生物學(xué)效應(yīng)及相關(guān)基因研究.pdf精彩內(nèi)容。

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