激發(fā)CD40信號對人肺癌細(xì)胞的生物學(xué)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的:探討激發(fā)CD40信號對人肺癌細(xì)胞株的生物學(xué)作用及其相關(guān)機(jī)制.方法:以人肺癌細(xì)胞株H460、A549和SPC-A-1為研究對象,以可溶性CD40配體(sCD40L)及激發(fā)型CD40單克隆抗體(5C11)激發(fā)肺癌細(xì)胞中的CD40信號,采用四氮唑鹽(MTT)比色、<'3>H標(biāo)記胸腺脫氧嘧啶核苷(<'3>H-TdR)摻入法檢測激發(fā)CD40信號對肺癌細(xì)胞增殖的影響,免疫熒光標(biāo)記和流式細(xì)胞術(shù)測定細(xì)胞表型、細(xì)胞周期、細(xì)胞內(nèi)腫瘤壞死因子受體相關(guān)因

2、子(TRAFs)表達(dá)譜及細(xì)胞凋亡的改變,逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)測定sCD40L對凋亡相關(guān)基因Bcl-2、Bax表達(dá)的影響.在CD40激發(fā)前后加入化療藥物順鉑(DDP)或線裂霉素(MMC),MTT比色法測定CD40激發(fā)前后化療藥對細(xì)胞增殖的影響,流式細(xì)胞術(shù)測定CD40激發(fā)前后化療藥物對肺癌細(xì)胞的殺傷作用.結(jié)果:(1)激發(fā)CD40信號可抑制表達(dá)CD40細(xì)胞H460、A549的增殖.(2)激發(fā)CD40信號72h后,H460、A5

3、49細(xì)胞表面CD49e、CD54、TNFRⅠ及CD95L的表達(dá)明顯升高,而TNFRⅡ的表達(dá)下降(與對照組比較P<0.05).激發(fā)CD40信號可下調(diào)H460、A549細(xì)胞中TRAF2、3、5、6的表達(dá)(P<0.05).(3)激發(fā)CD40信號后,H460、A549細(xì)胞中G<,1>期細(xì)胞比例增加,S期細(xì)胞比例減少(P<0.05).(4)激發(fā)CD40信號短期(72h)內(nèi)并不引起H460、A549細(xì)胞明顯凋亡,但可上調(diào)Bax基因的表達(dá).(5)激發(fā)

4、CD40信號可增強(qiáng)DDP及MMC對H460、A549細(xì)胞增殖的抑制并增強(qiáng)DDP及MMC對H460、A549的殺傷力(P<0.05).(6)CD40陰性的細(xì)胞株SPC-A-1經(jīng)sCD40L或5C11處理后無上述變化(P>0.05).結(jié)論:激發(fā)CD40信可引起表達(dá)CD40的肺癌細(xì)胞H460、A549生長抑制以及細(xì)胞周期、細(xì)胞表型和TRAF表達(dá)譜改變,并可引起凋亡相關(guān)基因Bax表達(dá)的改變.同時(shí)激發(fā)CD40信號可增強(qiáng)H460、A549細(xì)胞對化療