簡介：點(diǎn)擊查看更多絲氨酸蛋白酶抑制劑--2在胃癌預(yù)后意義及其在胃癌細(xì)胞株SGC7901中的生物學(xué)功能.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：論文題目廈豎地劍也IB2壟至塑蟲IB壟壟壟過煎到退疸細(xì)胞生塹堂功篚笪髭喧丞墨盟至壟然過程生佳且答辯委員會(huì)主席昌圭民麴撞答辯委員會(huì)成員墨廷斐麴援奎7塞麴撞，』、’五凡』蓋一一論文答辯日期二0一四年五月溫州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文已發(fā)表文章59致謝一60文獻(xiàn)綜述一61學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明71

簡介：目的成骨細(xì)胞被認(rèn)為是力學(xué)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中對(duì)應(yīng)力應(yīng)變信號(hào)進(jìn)行感知的主要力學(xué)敏感性細(xì)胞，但體外培養(yǎng)時(shí)，應(yīng)力（應(yīng)變）水平和細(xì)胞反應(yīng)程度間的關(guān)系及細(xì)胞間信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的機(jī)制還不是十分清楚。本文以生物力學(xué)為基礎(chǔ)，采用四點(diǎn)彎曲拉伸裝置，研究不同時(shí)間和周期的拉伸應(yīng)變對(duì)小鼠MC3T3E1細(xì)胞的影響及其作用機(jī)制。方法1研究運(yùn)用四點(diǎn)彎曲拉伸裝置對(duì)小鼠成骨細(xì)胞系MC3T3E1細(xì)胞分別施加頻率為05HZ，不同強(qiáng)度2500ΜΕ、5000ΜΕ，不同時(shí)間1MIN、3MIN、5MIN、10MIN的拉伸應(yīng)變，另設(shè)0ΜΕCONTROLGROUP做為對(duì)照組，采用熒光分光光度法檢測(cè)各組細(xì)胞的熒光強(qiáng)度值，探討拉伸應(yīng)變對(duì)細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度CA2I的影響。2分別給MC3T3E1細(xì)胞施加2500ΜΕ、5000ΜΕ，頻率為05HZ，1次D、1H次，連續(xù)拉伸3D，同時(shí)設(shè)有加入鈣離子抑制劑維拉帕米組VERAPAMIL及U73122組，另設(shè)0ΜΕ做為對(duì)照組，采用熒光分光光度法檢測(cè)各組細(xì)胞的熒光強(qiáng)度值，分析不同應(yīng)力下CA2I、CAM的變化；采用WESTERNBLOT技術(shù)檢測(cè)CAMKⅡΒ、CREB、PCREB的蛋白表達(dá)，探討力學(xué)載荷對(duì)CA2CAMCAMKⅡΒCREB信號(hào)通路的影響。結(jié)果1拉伸應(yīng)變對(duì)小鼠MC3T3E1細(xì)胞CA2I的影響。熒光分光光度法結(jié)果顯示給MC3T3E1細(xì)胞施加2500ΜΕ，頻率為05HZ，拉伸1MIN、3MIN、5MIN，其CA2I與對(duì)照組16100±1323相比顯著升高P＜001，其中3MIN組拉伸30600±557達(dá)最高值；當(dāng)MC3T3E1細(xì)胞施加5000ΜΕ，頻率為05HZ，拉伸1MIN29067±1834其CA2I即達(dá)到峰值P＜001，與對(duì)照組相比1MIN、3MIN、5MIN、10MIN拉伸CA2I均顯著升高（P＜005）。2拉伸應(yīng)變對(duì)小鼠MC3T3E1細(xì)胞CAM活性的影響。結(jié)果顯示MC3T3E1細(xì)胞分別施加2500ΜΕ、5000ΜΕ，頻率為05HZ，拉伸時(shí)間和周期為1次D，每次1H，連續(xù)3D，2500ΜE作用下CAM活性34567±80525較對(duì)照組23467±5442相比顯著升高P＜005），給予鈣通道阻滯劑VERAPAMIL及磷脂酶CPLC抑制劑U73122后，CAM活性與2500ΜΕ組相比均顯著下調(diào)P＜0015000ΜΕ作用下與對(duì)照組相比活性升高但沒有顯著性差異（P＞005）；給予VERAPAMIL及U73122后，CAM活性與5000ΜΕ組相比均顯著下調(diào)P＜001。3拉伸應(yīng)變對(duì)小鼠MC3T3E1細(xì)胞CAMKⅡΒ蛋白表達(dá)的影響。WESTERNBLOT結(jié)果顯示MC3T3E1細(xì)胞施加2500ΜΕ，頻率及拉伸周期同前，CAMKⅡΒ蛋白表達(dá)11120±02112較對(duì)照組08552±01488相比顯著升高（P＜005），加入VERAPAMIL和U73122，CAMKⅡΒ蛋白表達(dá)均顯著下調(diào)（P＜005；當(dāng)細(xì)胞施加5000ΜΕ時(shí)，CAMKⅡΒ蛋白表達(dá)05870±01548與對(duì)照組相比顯著降低P＜005），加入VERAPAMIL，U73122，CAMKⅡΒ蛋白表達(dá)顯著下調(diào)P＜001。4拉伸應(yīng)變對(duì)小鼠MC3T3E1細(xì)胞CREB和PCREB蛋白表達(dá)影響結(jié)果顯示細(xì)胞施加2500ΜΕ、5000ΜΕ時(shí)，CREB蛋白表達(dá)與對(duì)照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞005）；加入抑制劑VERAPAMIL和U73122后，2500ΜΕ、5000ΜΕ組CREB蛋白表達(dá)仍無顯著變化（P＞005）。PCREB蛋白表達(dá)在相同拉伸頻率、拉伸時(shí)間2500ΜΕ組66529土12615蛋白表達(dá)量最高，與對(duì)照組38407±15157比較具有顯著差異P＜001，與加入抑制劑VERAPAMILP＜001和U73122P＜005組比較抑制劑組蛋白表達(dá)均顯著下調(diào)；相同條件拉伸5000ΜΕ與加入抑制劑組比較，抑制劑組蛋白表達(dá)也顯著下調(diào)（P＜005）。結(jié)論1拉伸應(yīng)變可以引起成骨細(xì)胞CA2I改變，不同時(shí)間的拉伸應(yīng)力1MIN、3MIN、5MIN均可以顯著升高CA2I，2500ΜΕ組3MIN出現(xiàn)峰值，而5000ΜΕ組1MIN出現(xiàn)峰值，5000ΜΕ組CA2I達(dá)到峰值的時(shí)間早于2500ΜΕ組。分析認(rèn)為在細(xì)胞受到超生理范圍拉伸應(yīng)力時(shí)，細(xì)胞表現(xiàn)出一種應(yīng)激狀態(tài)，在這種狀態(tài)下細(xì)胞內(nèi)鈣庫和控制鈣離子內(nèi)流的膜控通道共同作用提升CA2I以此來應(yīng)對(duì)突然改變的外環(huán)境，而生理范圍拉伸只需細(xì)胞作出正常的應(yīng)答即可。改變拉伸頻率和周期后，生理性拉伸刺激可以增強(qiáng)CAM活性，超生理范圍拉伸可以減弱CAM的活性，加入鈣離子阻滯劑后CAM活性與未加入阻滯劑組相比，CAM活性下調(diào)。CAM是細(xì)胞內(nèi)主要的鈣結(jié)合蛋白，本研究結(jié)果說明力學(xué)信號(hào)在成骨細(xì)胞MC3T3E1細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)導(dǎo)與細(xì)胞內(nèi)CA2J和CAM活性具相關(guān)性。2MC3T3E1細(xì)胞施加2500ΜΕ，頻率為05HZ，拉伸時(shí)間和周期為1次D，每次1H，連續(xù)3D時(shí)，CAMKⅡΒ蛋白表達(dá)顯著上調(diào)，分別加入VERAPAMIL、U73122拉伸2500ΜΕ、5000ΜΕ組，蛋白表達(dá)均顯著性下降。說明CAMKⅡΒ參與了力學(xué)信號(hào)在成骨細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)導(dǎo)。3CREB是細(xì)胞的核轉(zhuǎn)錄因子，只有被磷酸化后才能進(jìn)行下一級(jí)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。實(shí)施拉伸應(yīng)變后細(xì)胞內(nèi)PCREB變化有顯著性差異，2500ΜΕ組蛋白表達(dá)顯著升高，其結(jié)果與CAM和CAMKⅡΒ的結(jié)果完全相同。實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析認(rèn)為在拉伸應(yīng)變作用于成骨細(xì)胞引起細(xì)胞內(nèi)CA2CAMCAMKⅡΒPCREB一系列連鎖的反應(yīng)，通過這一過程力學(xué)信號(hào)轉(zhuǎn)化為生物學(xué)信號(hào)傳達(dá)到細(xì)胞內(nèi)。4本研究證實(shí)成骨細(xì)胞MC3T3E1細(xì)胞受到拉伸刺激，其力學(xué)信號(hào)是通過CA2CAMCAMKCREB信號(hào)途徑轉(zhuǎn)化為生物學(xué)效應(yīng)的。

簡介：分類號(hào)密級(jí)R737．31公開單位代碼10422學(xué)號(hào)201013402碩士學(xué)位論文論文題目SREBPL在卵巢上皮癌組織中表達(dá)的臨床，意義及SREBPLSHRNA對(duì)卵巢癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響THECLINICALSIGNIFICANCE．OFSREBPLEXPRESSIONINEPITHELIALOVARIANCANCERANDTHEINFLUENCEOFSREBPLSHRNAONTHEBIOLOGICALBEHAVIOROFOVARIANCANCERCEI。I。S作者學(xué)院專業(yè)指導(dǎo)聶龍?jiān)漆t(yī)學(xué)院婦產(chǎn)科姜潔教授2013年05月07日名稱稱師姓名名教目錄中文摘要??????????????????????????????1英文摘要??????????????????????????????3符號(hào)說明??????????????????????????????6前言????????????????????????????????????????7日U青????????????????????????????????????????7材料與方法?????????????????????????????．9結(jié)果???????????????????????????????????????．21討論??????????????????????????．．‘????????????．．ZI結(jié)論???????????????????????????????????????．31附表附圖??????????????????????????????32參考文獻(xiàn)??????????????????????????????40致謝????．??????????????????????????????????．．45攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文???????????????????46

簡介：AⅡ1ESISDISSERTATIONSUBMITTEDTOZHENGZHOUU1LIVERS時(shí)FORTHEDEGREEOFMASTERDOCTORTHEEXPRESSIONOFⅪSSLINLUNGCANCERANDROLEOFⅪSSLINBIOLO醇CALFUNCTIONOFLUNGCANCERCEUBYAIGUOXUSUPERVISOR沁OJULLZHANGCLINICALMEDICINETHEFIRSTAMLIATEDHOSPITALOFZHENGZHOUUNIVERSITYMARCH，2013摘要摘要肺癌是最常見的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重危害人類的生命及健康，其發(fā)病機(jī)制迄今尚不完全明確。肺癌的早期臨床癥狀輕微，多數(shù)患者在確診時(shí)已屬中晚期，因而造成了大量的術(shù)后轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)，在相當(dāng)長的時(shí)間內(nèi)尋找與肺癌侵襲轉(zhuǎn)移的相關(guān)因子仍然是人類面臨的亟需解決的重大問題。ⅪSSL是LEE等在1997年利用修飾遞減雜交技術(shù)在黑色素瘤細(xì)胞株中發(fā)現(xiàn)的一種腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因，編碼一個(gè)由145個(gè)氨基酸組成的親水性蛋白，其氨基酸位點(diǎn)上存在著具有SRC癌蛋白SH3區(qū)特征的PXⅪ，，可抑制帶有SH3的各種因子，參與轉(zhuǎn)移級(jí)聯(lián)反應(yīng)抑制多種腫瘤的浸潤、轉(zhuǎn)移。NFKB是近年來發(fā)現(xiàn)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，轉(zhuǎn)錄因子NFKB廣泛存在于人的各種細(xì)胞中，調(diào)節(jié)從免疫系統(tǒng)、細(xì)胞生長到炎癥等多個(gè)基因的表達(dá)，它的失調(diào)會(huì)導(dǎo)致包括腫瘤在內(nèi)多種疾病的發(fā)生。NF1CB最常見的形式是由P50和P65組成的異源二聚體，NF1CB在細(xì)胞中與其阻抑物IKBQ蛋白結(jié)合，以非活性形式存在于胞質(zhì)中，當(dāng)它被激活后，通過信號(hào)傳導(dǎo)引起11B的泛素化及蛋白酶體途徑的降解，導(dǎo)致NF1B11CB復(fù)合物解體，解離的NF1CB進(jìn)入到核內(nèi)并暴露它的核識(shí)別位點(diǎn)，與特定靶基因結(jié)合而啟動(dòng)靶基因轉(zhuǎn)錄開放，調(diào)節(jié)多種基因的表達(dá)，在很多癌癥中可以觀察到NF1CB的異常，它通過轉(zhuǎn)錄調(diào)控激活一些與細(xì)胞增殖、血管新生、轉(zhuǎn)移、腫瘤惡化、抑制細(xì)胞凋亡等有關(guān)基因的表達(dá)來參與腫瘤的發(fā)生和惡化過程?；|(zhì)金屬蛋白酶MATRIXMETALLOPROTEINASE，MMPS是一類具有降解細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜能力的蛋白水解酶，在腫瘤細(xì)胞突破基底膜屏障而浸潤、轉(zhuǎn)移中起重要作用，在腫瘤演進(jìn)等眾多生理和病理過程中均發(fā)揮著重要的作用。研究發(fā)現(xiàn)，在許多腫瘤組織中，都發(fā)現(xiàn)有較高M(jìn)MP9的表達(dá)，且其表達(dá)程度與腫瘤的侵襲性有關(guān)。目前研究表明ⅪSSL、NF出P65和MMP9在多種腫瘤組織中均存在異常表達(dá)，并證實(shí)與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移過程存在密切關(guān)系，但目前對(duì)三者的研究多數(shù)是在各自獨(dú)立的層面上，且三者之間的關(guān)系及相互作用機(jī)制至今尚未完全闡明，在肺癌中三者結(jié)合起來研究尚無文獻(xiàn)報(bào)道。多種腫瘤細(xì)胞KISSL處于低表達(dá)狀

簡介：分類號(hào)分類號(hào)R34學(xué)校代碼學(xué)校代碼10392學(xué)科專業(yè)代碼學(xué)科專業(yè)代碼071010學(xué)號(hào)號(hào)2101001562福建醫(yī)科大學(xué)碩士研究生畢業(yè)論文BBCCLL1100基基因因KKNNOOCCKKDDOOWWNN對(duì)對(duì)HHCCTT111166細(xì)細(xì)胞胞生生物物學(xué)學(xué)行行為為的的影影響響EEFFFFEECCTTSSOOFFBBCCLL1100GGEENNEEKKNNOOCCKKDDOOWWNNOONNTTHHEEHHCCTT111166CELL’SBIOLOGICALACTERISTICS學(xué)位類型型科研型碩士科研型碩士所在學(xué)院院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院研究生生蘇光建學(xué)科、專業(yè)專業(yè)生物化學(xué)與分子生物學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)導(dǎo)師葉韻斌葉韻斌教授教授研究起止日期研究起止日期2011年8月至月至2013年4月答辯日期期2013年5月30日二O一三年一三年五月目錄英漢縮略名詞對(duì)照表英漢縮略名詞對(duì)照表1中文摘要中文摘要3英文摘要英文摘要5前言7正文9第一部分第一部分構(gòu)建慢病毒介導(dǎo)的構(gòu)建慢病毒介導(dǎo)的BCL10穩(wěn)定沉默的穩(wěn)定沉默的HCT116細(xì)胞株細(xì)胞株引言9材料與方法材料與方法9結(jié)果29討論32第二部分第二部分BCL10基因基因KNOCKDOWN對(duì)HCT116細(xì)胞生物學(xué)性狀的影響細(xì)胞生物學(xué)性狀的影響引言38材料與方法材料與方法38結(jié)果41討論48結(jié)論52參考文獻(xiàn)參考文獻(xiàn)53致謝58綜述59

簡介：分類號(hào)R5582密級(jí)公開UDC610編號(hào)201310055攻讀攻讀臨床醫(yī)學(xué)臨床醫(yī)學(xué)碩士學(xué)位研究生畢業(yè)論文碩士學(xué)位研究生畢業(yè)論文ILIL2727在多發(fā)性骨髓瘤患者體內(nèi)表達(dá)及在多發(fā)性骨髓瘤患者體內(nèi)表達(dá)及其對(duì)骨髓瘤細(xì)胞株生物學(xué)活性的影響對(duì)骨髓瘤細(xì)胞株生物學(xué)活性的影響EXPRESSIONOFIL27INMULTIPLEMYELOMATHEEFFECTSOFIL27ONMYELOMACELLLINES論文起止時(shí)間201206201304指導(dǎo)教師馮建明教授李占全教授崔森教授學(xué)生姓名夏天論文類型應(yīng)用研究學(xué)科專業(yè)名稱內(nèi)科學(xué)（血液病學(xué)）研究方向臨床醫(yī)療技能訓(xùn)練與研究學(xué)院系、部醫(yī)學(xué)院青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院2010級(jí)攻讀臨床醫(yī)學(xué)碩士學(xué)位研究生畢業(yè)論文第1頁（共71頁）中文摘要中文摘要背景背景多發(fā)性骨髓瘤（MULTIPLEMYELOMAMM）是一種惡性漿細(xì)胞疾病，主要表現(xiàn)為惡性漿細(xì)胞增生、單克隆免疫球蛋白增高及相關(guān)器官功能損害。既往研究表明，IL6細(xì)胞因子家族對(duì)MM的發(fā)生、發(fā)展起到關(guān)鍵性作用。GP130是IL6細(xì)胞因子家族受體系統(tǒng)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)鏈，GPL30激活是骨髓瘤細(xì)胞異常增殖的最重要信號(hào)。IL27是近年發(fā)現(xiàn)的一種新的IL6IL12細(xì)胞因子家族成員，具有復(fù)雜的生物學(xué)功能，在抗感染免疫、抗腫瘤免疫和自身免疫病中發(fā)揮著重要的作用。IL27作為IL6IL12家族的成員，亦是通過GPL30傳遞信號(hào)。IL27與IL6共享GP130，難道也在MM發(fā)生發(fā)展中起著促進(jìn)作用，抑或表現(xiàn)出相反的作用。截止目前，尚無關(guān)于IL27在MM患者體內(nèi)表達(dá)分泌情況及IL27對(duì)骨髓瘤細(xì)胞生物學(xué)效應(yīng)的報(bào)道。目的目的檢測(cè)IL27在MM患者體內(nèi)表達(dá)及對(duì)骨髓瘤細(xì)胞株生物學(xué)活性的影響。方法方法（1）ELISA方法檢測(cè)MM患者血漿中IL27及IL6水平；（2）ELISA方法檢測(cè)骨髓瘤細(xì)胞株U266、RPMI8226培養(yǎng)上清中IL27水平；（3）采用FICOLL密度梯度離心法分離外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMNCS）；（4）REALTIMEPCR方法檢測(cè)MM患者PBMNCS中IL27MRNA表達(dá)水平；（5）流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)U266、RPMI8226細(xì)胞表面IL27受體（WSX1TCCR和GP130）的表達(dá)水平；（6）MTT法及流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定RHIL27對(duì)U266、RPMI8226細(xì)胞增殖和凋亡的影響；（7）ELISA方法檢測(cè)RHIL27刺激前后U266、RPMI8226細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL6和VEGF水平。結(jié)果結(jié)果（1）MM患者血漿IL27水平為（6182801）PGML，明顯高于正常對(duì)照組（829441）PGML（P005）；MM患者血漿IL6水平為（4562124）PGML，明顯高于較正常對(duì)照組（227018）PGML（P005）。（2）U266、RPMI8226細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL27水平分別為（5006572）PGML和（335474188）PGML。（3）RTPCR結(jié)果證實(shí)MM患者PBMNCS中IL27MRNA較正常對(duì)照組明顯升高（P005）。（4）流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)IL27受體（WSX1TCCR和GP130）在U266、RPMI8226細(xì)胞表面具有很高的陽性表達(dá)率。（5）MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，RHIL27可顯著抑制U266、RPMI8226細(xì)胞增殖，呈現(xiàn)時(shí)間和劑量依賴性；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)100NGMLIL27處理U266、RPMI8226細(xì)胞72H后細(xì)胞凋亡率

簡介：CXCR4CDL84分子屬趨化因子家族，人CXCR4基因由由FENG等人于1996年發(fā)現(xiàn)并命名為FUSIN后來又被稱為LESTR或HUMSTR，人CXCR4基因位于染色體2Q21區(qū)，編碼由352個(gè)氨基酸組成的蛋白質(zhì)，是高度保守的7次跨膜受體。CXCR4通過與其唯一的配體SDF一1Q構(gòu)成SDF1?。疌XCR4反應(yīng)軸而發(fā)揮生物學(xué)功能。CXCR4分子具有廣泛的表達(dá)譜，主要表達(dá)在外周血的CD2610WCD45RACD45ROT淋巴細(xì)胞，B淋巴細(xì)胞，樹突狀細(xì)胞，內(nèi)皮細(xì)胞和巨核細(xì)胞表面。CXCR4分子在免疫細(xì)胞、造血細(xì)胞的遷移和歸巢中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用，而且參予神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育、血管發(fā)生、組織損傷修復(fù)和再生等。近年來許多研究發(fā)現(xiàn)大多腫瘤細(xì)胞也表達(dá)CXCR4，且腫瘤細(xì)胞表達(dá)CXCR4與其向組織侵潤和轉(zhuǎn)移相關(guān)。隨著CXCR4分子的生物學(xué)功能和信號(hào)傳導(dǎo)的分子機(jī)制的進(jìn)一步研究，使其成為一個(gè)理想的生物干預(yù)靶分子，針對(duì)CXCR4分子的阻斷劑將有更廣闊的臨床應(yīng)用前景。因此，CXCR4轉(zhuǎn)基因細(xì)胞的構(gòu)建、CXCR4分子拮抗劑的研制及其在SDF。1Q／CXCR4信號(hào)傳導(dǎo)中的阻斷作用的研究將為腫瘤的治療提供有力的途徑。1人CXCR4基因的克隆及轉(zhuǎn)基因細(xì)胞的構(gòu)建本研究通過RTPCR方法，從人外周血單個(gè)核細(xì)胞PBMC的總RNA中擴(kuò)增出編碼人CXCR4全長的CDNA片段，通過基因克隆技術(shù)，將其插入逆轉(zhuǎn)錄病毒載體PEGZTERM。進(jìn)一步采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)將重組表達(dá)載體與輔助病毒載體共轉(zhuǎn)染包裝細(xì)胞293T，用其培養(yǎng)上清感染L929細(xì)胞72H后，經(jīng)ZEOCIN篩選出穩(wěn)定表達(dá)CXCR4分子的L929細(xì)胞株L929／CXCR4。經(jīng)體外長期傳代和液氮反復(fù)凍存和復(fù)蘇，轉(zhuǎn)基因細(xì)胞生長良好，并穩(wěn)定表達(dá)CXCR4。構(gòu)建的L929／CXCR4轉(zhuǎn)基因細(xì)胞能在SDF1Q作用下介導(dǎo)遷移。2分泌鼠抗人CXCR4單抗的雜交瘤細(xì)胞株的制備利用上述構(gòu)建的轉(zhuǎn)基因細(xì)胞L929／CXCR4為免疫原，免疫BALB／C小鼠，采用B淋巴細(xì)胞融合技術(shù)，將反復(fù)免疫后的小鼠的脾臟細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞SP2／0進(jìn)行細(xì)胞融合，以此轉(zhuǎn)基因細(xì)胞作為陽性篩選細(xì)胞，以轉(zhuǎn)空質(zhì)粒的對(duì)照細(xì)胞L929／MOCK作為陰性對(duì)照細(xì)胞，通過間接免疫熒光標(biāo)記法對(duì)雜交瘤細(xì)胞株進(jìn)行篩選，并經(jīng)多次克隆化培養(yǎng)，最終獲得L株持續(xù)、穩(wěn)定分泌鼠抗人CXCR4單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株32F7。經(jīng)快速定性試紙法分析鑒定，32F7的重鏈為IG2A；輕鏈為K。經(jīng)體外連續(xù)傳代40代培養(yǎng)，液氮凍存半年后復(fù)蘇，仍生長良好，穩(wěn)定分泌抗體。細(xì)胞染色體的核型分析表明所得到的細(xì)胞株是一個(gè)雜交瘤細(xì)胞株。進(jìn)而采用本室建立的腹水誘生和純化方案，腹水形成陽性率為95％以上，腹水的產(chǎn)量平均約為5OMI／只小鼠。經(jīng)PROTEING親和層析柱分離純化，腹水型單抗純化后蛋白含量在2MG／ML左右。純化后單抗的效價(jià)為11000以上，抗體蛋白用于間接免疫熒光分析的用量為1O20PG／L106細(xì)胞。3鼠抗人CXCR4單克隆抗體的體外生物學(xué)特性研究以L929／CXCR4為競(jìng)爭(zhēng)靶細(xì)胞，經(jīng)間接免疫熒光標(biāo)記的競(jìng)爭(zhēng)抑制試驗(yàn)，結(jié)果顯示，32F7與商品化的抗體12G5識(shí)別CXCR4分子的抗原位點(diǎn)完全不同。另外，經(jīng)間接免疫熒光標(biāo)記顯示，32F7能特異性識(shí)別T細(xì)胞，B細(xì)胞，NK細(xì)胞，DC，以及許多腫瘤細(xì)胞表面的CXCR4分子。且免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)表明32F7可以識(shí)別一些組織表達(dá)的CXCR4分子。經(jīng)過板孔遷移實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，所制備得到的抗人32F7抗體能較好的阻斷SDF1Q／CXCR4軸在T細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞遷移中的作用，由此表明32F7單抗是有阻斷SDF1Q／CXCR4相互作用的阻斷性單克隆抗體。本實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)32F7單抗在阻斷SDF1Q／CXCR4信號(hào)后可阻滯RAII細(xì)胞進(jìn)入生長增殖周期，從而抑制了B淋巴瘤細(xì)胞的體外增殖，而且隨著抗體濃度的增加該效果更為明顯。綜上所述，本研究成功克隆了人CXCR4基因、構(gòu)建了轉(zhuǎn)CXCR4的轉(zhuǎn)基因細(xì)胞并研制了L株能穩(wěn)定分泌特異性鼠抗人CXCR4功能性單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，為深入探討SDF1Q／CXCR4信號(hào)通路奠定了良好的物質(zhì)基礎(chǔ)，并且有潛在的應(yīng)用價(jià)值。

簡介：蘇州大學(xué)碩士學(xué)位論文WT1基因異構(gòu)體對(duì)白血病細(xì)胞生物學(xué)行為影響的研究姓名沈慧玲申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)內(nèi)科血液學(xué)指導(dǎo)教師陳子興20040401WTI基因異構(gòu)體對(duì)白血病細(xì)胞生物學(xué)行為影響的研究R；『L文提要PO005。甲基纖維素集落形成試驗(yàn)中NBDWTA克隆形成率明顯下降，集落形成抑制率為469％。在三氧化二砷AS203終濃度02UM作用后集落形成抑制更加明顯。細(xì)胞周期動(dòng)力學(xué)檢測(cè)提示，NB4／WTA組S期細(xì)胞比例升高。④細(xì)胞受全反式維甲酸ATRA終濃度05UM誘導(dǎo)細(xì)胞分化48JJ時(shí)，細(xì)胞形態(tài)檢測(cè)提示，NB刪TA細(xì)胞出現(xiàn)部分分化，而對(duì)照組細(xì)胞分化更為明顯。流式細(xì)胞儀檢測(cè)NBRWTA細(xì)胞CDLLB相對(duì)熒光強(qiáng)度463163低于對(duì)照組815184，被ATRA終濃度O5UM作用24小時(shí)后CDLLB相對(duì)熒光強(qiáng)度3142565與對(duì)照組7195936相比降低更為明顯，有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P001。NB4／WTA細(xì)胞NBT還原能力較對(duì)照組下降，當(dāng)采用ATRA終濃度059M處理細(xì)胞13天后，兩組細(xì)胞之間的NBT還原能力的差異更加明顯。⑤MTT實(shí)驗(yàn)顯示，NB4／WTA細(xì)胞對(duì)AS203的IC50值較對(duì)照組明顯降低，分別為081410132年1114390215，有顯著性差異P002。經(jīng)ASZ03終濃度08UM作用484時(shí)，NBDWTA細(xì)胞ANNEXINV結(jié)合力較對(duì)照組細(xì)胞升高，出現(xiàn)更為典型的凋亡形態(tài)學(xué)改變，DNA凝膠電泳可見更明顯的DNA梯形帶。⑥RTPCR檢查提示，NB4／WTA細(xì)胞PML／RARA、RBAP46、P21、CMYC基因的表達(dá)較對(duì)照組升高，BCL2表達(dá)下降，P53、VEGF、CYCLINDL、CYCLIND2、BCLXL基因表達(dá)無明顯改變。⑦通過表達(dá)譜芯片篩選，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)導(dǎo)WTL基因異構(gòu)體WTA后，NB4細(xì)胞中共89條與細(xì)胞周期相關(guān)基因、細(xì)胞凋亡相關(guān)基因、癌基因以及細(xì)胞信號(hào)和傳遞蛋白等基因表達(dá)出現(xiàn)變化。RTPCR驗(yàn)證了與細(xì)胞周期相關(guān)的CYCLINAL基因表達(dá)上調(diào)，CDK7基因表達(dá)下調(diào)。結(jié)論①WTL基因異構(gòu)體能夠通過電穿孔的方法成功轉(zhuǎn)染懸浮培養(yǎng)的白血病細(xì)胞NB。，并建立單克隆化的永久表達(dá)細(xì)胞株。②增加外源性WTL基因異構(gòu)體WTA的表達(dá)從而將WTL基因異構(gòu)體表達(dá)的比例由17AA／KTS優(yōu)勢(shì)型轉(zhuǎn)變?yōu)?7AA／一KTS優(yōu)勢(shì)型能抑制白血病細(xì)胞株NB。的增殖，使其克隆形成能力明顯下降。同時(shí)也能部分抑制ATRA對(duì)NB。細(xì)胞的誘導(dǎo)分化作用，使NB4細(xì)胞對(duì)AS203引起的凋亡更為敏感。這些改變可能與PML／RARⅡ、P2L、CMYC等基因的表達(dá)上調(diào)，BCL2基因的表達(dá)下調(diào)有關(guān)。③WTL基因異構(gòu)體WTA表達(dá)比例增加能引起NB4細(xì)胞基因表達(dá)譜的改變，這些基因的改變可能對(duì)白血病細(xì)胞增殖、分化和凋亡等生物學(xué)行為產(chǎn)生了一定的影響。關(guān)鍵詞WTL基因；異構(gòu)體；NBT細(xì)胞；電穿孔增殖；分化凋亡基因芯片Ⅱ作者沈慧玲指導(dǎo)教師陳子興教授

簡介：HBVHEPATITISBVIRUSHBV感染易引起慢性肝炎部分最后轉(zhuǎn)化成肝癌。最近研究表明內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激ENDOPLASMICRETICULUMSTRESSERSTRESS參與了腫瘤的發(fā)生和發(fā)展但作用機(jī)制仍不明確。HBV是嗜肝DNA病毒家族的溶原性病毒其基因組呈松弛環(huán)狀雙鏈結(jié)構(gòu)含4個(gè)開放讀碼框架OPENREADINGFRAMEF其中X區(qū)編碼產(chǎn)物HEPATITISBVIRUSXPROTEINHBX蛋白是一種多功能的調(diào)節(jié)蛋白在胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、病毒復(fù)制轉(zhuǎn)錄、細(xì)胞增殖與凋亡、細(xì)胞周期進(jìn)程、蛋白降解和肝細(xì)胞的遺傳穩(wěn)定性等方面均有確切作用。鑒于HBX蛋白在慢性肝臟疾病發(fā)生發(fā)展中也發(fā)揮重要的作用因此最近相關(guān)方面的研究很多。ER應(yīng)激是真核細(xì)胞的一種保護(hù)性應(yīng)激反應(yīng)它是通過激活未折疊蛋白反應(yīng)UNFOLDEDPROTEINRESPONSEUPR通路以此來減少細(xì)胞內(nèi)蛋白的異常聚集起到細(xì)胞保護(hù)作用。研究表明它與很多因素所致疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。MANFMESENCEPHALICASTROCYTEDERIVEDNEUROTROPHICFACTMANF基因是我們從30000個(gè)基因中篩選出來的并對(duì)ER應(yīng)激最敏感的基因它是一種分泌性蛋白ER應(yīng)激能誘導(dǎo)其表達(dá)上調(diào)。我們推測(cè)MANF很可能在肝炎到肝癌的轉(zhuǎn)變中起著重要的作用本文將對(duì)此進(jìn)行相關(guān)的研究。目的建立穩(wěn)定表達(dá)乙型肝炎病毒X蛋白HBX的HEPG2穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系并檢測(cè)HBX蛋白過度表達(dá)對(duì)HEPG2細(xì)胞生物學(xué)活性的影響同時(shí)對(duì)ER應(yīng)激最敏感的基因MANF在肝癌發(fā)生發(fā)展中所起的相關(guān)作用進(jìn)行研究。方法采用RTPCR法從HEPG2215細(xì)胞株中克隆HBX基因編碼區(qū)片段構(gòu)建PCDNA31HBX真核表達(dá)質(zhì)粒利用脂質(zhì)體將PCDNA31HBX轉(zhuǎn)染人HEPG2細(xì)胞系通過G418篩選后經(jīng)WESTERNBLOT法對(duì)HBX的表達(dá)進(jìn)行驗(yàn)證。用MTT法檢測(cè)穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞的增殖活性用PCR法檢測(cè)HBX過表達(dá)引起ER應(yīng)激相關(guān)基因表達(dá)的變化選擇其中變化明顯的MANF基因并將其用SIRNA敲低用MTT法檢測(cè)瞬轉(zhuǎn)細(xì)胞的增殖活性用TRANSWELL遷移實(shí)驗(yàn)和TRANSWELL侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)瞬轉(zhuǎn)細(xì)胞的遷移和侵襲能力的變化。結(jié)果1建立穩(wěn)定表達(dá)PCDNA31HBX蛋白的細(xì)胞系11PCR擴(kuò)增HBX基因采用RTPCR法從HEPG2215細(xì)胞株中克隆HBX基因編碼區(qū)片段將擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1％的瓊脂糖凝膠電泳后約在500BP處可見明顯的擴(kuò)增產(chǎn)物條帶擴(kuò)增的片段大小和理論預(yù)測(cè)值相符。12重組質(zhì)粒陽性克隆的篩選及鑒定將上述得到的PCR產(chǎn)物進(jìn)行膠回收然后與PCDNA31載體分別進(jìn)行雙酶切限制酶為ECI和HINDⅢ。酶切后將膠回收產(chǎn)物連接到PCDNA31載體上連接后的產(chǎn)物在DH5Α感受態(tài)細(xì)胞中進(jìn)行轉(zhuǎn)化篩選單克隆提取質(zhì)粒后再使用ECI和HINDⅢ酶切鑒定在465BP處有明顯的條帶與基因PCR產(chǎn)物的大小一致。并將該質(zhì)粒送到公司測(cè)序測(cè)得的序列在基因數(shù)據(jù)庫里用BLAST對(duì)比檢測(cè)結(jié)果與預(yù)期序列一致提示重組表達(dá)質(zhì)粒PCDNA31HBX構(gòu)建成功。13WESTERNBLOT檢測(cè)穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞內(nèi)HBX蛋白的表達(dá)將構(gòu)建的PCDNA31HBX轉(zhuǎn)染HEPG2細(xì)胞用G41805ΜLML維持篩選以建立穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。提取蛋白質(zhì)進(jìn)行免疫印跡檢測(cè)檢測(cè)到HBX蛋白表達(dá)的細(xì)胞表示穩(wěn)轉(zhuǎn)成功。2HBX對(duì)HEPG2細(xì)胞具有促增殖作用MTT法檢測(cè)各組細(xì)胞OD值發(fā)現(xiàn)過表達(dá)PCDNA31HBX后的HEPG2細(xì)胞增殖能力明顯增加表明HBX可能對(duì)HEPG2細(xì)胞具有促增殖作用。3攜帶HBV全基因組的HEPG2215細(xì)胞增殖活性的檢測(cè)MTT法檢測(cè)HEPG2和HEPG2215細(xì)胞時(shí)發(fā)現(xiàn)HEPG2215細(xì)胞的增殖活性與HEPG2無顯著性差異。可能是因?yàn)镠EPG2215中轉(zhuǎn)染的是HBV的全基因組其對(duì)細(xì)胞的增殖調(diào)節(jié)比較復(fù)雜表現(xiàn)出來的是綜合結(jié)果。至于真正的原因還需要進(jìn)一步的研究。4HBX蛋白對(duì)ER應(yīng)激相關(guān)基因表達(dá)的影響選取ER應(yīng)激相關(guān)基因檢測(cè)其在過表達(dá)HBX蛋白的HEPG2細(xì)胞中的表達(dá)情況結(jié)果發(fā)現(xiàn)PERK、BIP、MANF、ATF6和XBP1在穩(wěn)轉(zhuǎn)HBX蛋白的HEPG2細(xì)胞中表達(dá)升高而IRE1、CHOP和EIF2則表達(dá)降低。這些結(jié)果提示HBX蛋白能引起ER應(yīng)激相關(guān)基因表達(dá)變化。考慮到MANF對(duì)HBX蛋白的反應(yīng)比較敏感接下來的實(shí)驗(yàn)重點(diǎn)研究MANF在肝炎到肝癌發(fā)展過程中的作用。5MANF對(duì)肝癌細(xì)胞生長和遷移的抑制作用51過表達(dá)MANF對(duì)肝癌細(xì)胞增殖活性的影響我們前期的研究發(fā)現(xiàn)在HBV感染的肝硬化中MANF表達(dá)增加而在HBV陽性的肝癌組織中MANF的表達(dá)反而降低。前面的研究結(jié)果也顯示HBX可以上調(diào)MANF的表達(dá)。上述結(jié)果提示MANF在HBV感染的肝癌中發(fā)揮一定的作用。為了澄清MANF對(duì)肝癌細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的影響我們首先將MANFFLAG質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到肝癌細(xì)胞中用MTT法檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞活性的變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)過表達(dá)MANF對(duì)不同類型的肝癌細(xì)胞影響不同過表達(dá)MANF可抑制SMMC7721、HEPG2、HEPG2215細(xì)胞及穩(wěn)轉(zhuǎn)HBX細(xì)胞的增殖52MANFSIRNA的驗(yàn)證將MANFSIRNA轉(zhuǎn)染到HEPG2細(xì)胞中同時(shí)與未轉(zhuǎn)染的HEPG2細(xì)胞和轉(zhuǎn)染空載體的HEPG2細(xì)胞進(jìn)行比較其中轉(zhuǎn)染MANFSIRNA的HEPG2細(xì)胞MANF表達(dá)量明顯降低說明MANFSIRNA能有效地抑制內(nèi)源性MANF的表達(dá)。53沉默MANF引起肝癌細(xì)胞增殖活性增加將MANFSIRNA轉(zhuǎn)染到SMMC7721細(xì)胞中同時(shí)轉(zhuǎn)染空載體作為對(duì)照。轉(zhuǎn)染后36H用MTT法檢測(cè)細(xì)胞的增殖活性。除此之外還檢測(cè)HEPG2215HEPG2HEPG2HBX等肝癌細(xì)胞系。結(jié)果發(fā)現(xiàn)與轉(zhuǎn)染空載體的SMMC7721細(xì)胞比較轉(zhuǎn)染MANFSIRNA的細(xì)胞增殖活性明顯增加P54沉默MANF對(duì)肝癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力的影響將MANFSIRNA轉(zhuǎn)染到肝癌細(xì)胞中觀察相關(guān)特性變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)敲低MANF可促進(jìn)SMMC7721、HEPG2215及表達(dá)HBX的HEPG2細(xì)胞的增殖。TRANSWELL實(shí)驗(yàn)也證實(shí)了轉(zhuǎn)染MANFSIRNA可提高肝癌細(xì)胞的遷移率和侵襲率提示MANF對(duì)肝癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲有抑制作用。結(jié)論HBX可以引起HEPG2細(xì)胞增值活性提高HBX可以差異性調(diào)節(jié)ER相關(guān)基因MANF對(duì)肝癌細(xì)胞生長、遷移和侵襲起抑制作用。

簡介：面部色素沉著是由各種內(nèi)、外因素引起的以面部色素形成過多為表現(xiàn)的病理性變化臨床上常見于黃褐斑、雀斑和黑變病等多種疾病由于多方面因素的限制目前尚缺乏安全有效的美白劑治療經(jīng)臨床觀察紅景天外用制劑具有治療黃褐斑的作用我們基于這個(gè)事實(shí)從細(xì)胞分子生物學(xué)角度研究紅景天在皮膚美白功能方面的藥物作用機(jī)理第一部分我們以黑素細(xì)胞為受試細(xì)胞檢測(cè)紅景天甙對(duì)細(xì)胞的增殖、酪氨酸酶的活性及黑素合成的抑制作用結(jié)果表明紅景天甙對(duì)黑素細(xì)胞具有低細(xì)胞毒性較強(qiáng)的細(xì)胞酪氨酸酶及黑素合成抑制作用同時(shí)結(jié)果還表明紅景天甙對(duì)酪氨酸酶活性抑制的機(jī)制不是競(jìng)爭(zhēng)性抑制而是通過其它的途徑抑制了酪氨酸酶的活性論文第二部分應(yīng)用半定量RTPCR及WESTERBLOT方法檢測(cè)紅景天甙對(duì)酪氨酸酶MRNA轉(zhuǎn)錄和相應(yīng)蛋白表達(dá)的調(diào)節(jié)作用結(jié)果表明一定濃度的紅景天甙可以下調(diào)黑素細(xì)胞酪氨酸酶MRNA和蛋白的表達(dá)初步推斷紅景天甙可能是通過調(diào)節(jié)酪氨酸酶MRNA和蛋白的表達(dá)實(shí)現(xiàn)對(duì)黑素細(xì)胞黑素合成的抑制第三部分建立紫外線照射致色素沉著細(xì)胞模型檢測(cè)紅景天甙對(duì)紫外線照射致色素沉著的影響試驗(yàn)結(jié)果顯示紅景天甙對(duì)中波紫外線誘導(dǎo)黑素細(xì)胞黑素合成有明顯的抑制作用論文最后我們建立了紫外線照射誘導(dǎo)豚鼠背部皮膚色素沉著模型通過體表療效評(píng)估、皮膚色素值測(cè)定以及組織病理染色觀察表明紅景天外用制劑對(duì)豚鼠皮膚無明顯刺激反應(yīng)對(duì)UVB誘導(dǎo)豚鼠皮膚黑素沉著有抑制作用進(jìn)一步表明紅景天治療色素沉著性疾病的安全性與有效性

簡介：點(diǎn)擊查看更多人臍血造血細(xì)胞生物學(xué)特性的研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：點(diǎn)擊查看更多高轉(zhuǎn)移人成骨肉瘤細(xì)胞株的篩選及其生物學(xué)特性的觀察.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：目的1、液氮深低溫保存人羊膜上皮細(xì)胞（HUMANAMNIOTICEPITHELIALCELLS，HAECS）是否會(huì)對(duì)其干細(xì)胞活性產(chǎn)生影響，相關(guān)報(bào)道較少見。本研究從細(xì)胞形態(tài)學(xué)、細(xì)胞生長狀況、細(xì)胞表面干細(xì)胞標(biāo)志物及干細(xì)胞基因表達(dá)、細(xì)胞體外成骨細(xì)胞、成脂肪細(xì)胞多向誘導(dǎo)分化四個(gè)方面，來觀察HAECS凍存前后的生物學(xué)活性和干細(xì)胞特性，以研究液氮深低溫保存HAECS的可靠性。2、膿毒血癥仍然是導(dǎo)致急性肺損傷（ACUTELUNGINJURY，ALI）最常見的原因，目前尚缺乏十分有效的治療手段。本研究通過檢測(cè)肺組織病理學(xué)切片、肺組織和血清中細(xì)胞因子的變化，來觀察HAECS對(duì)內(nèi)毒素性肺損傷的干預(yù)作用及其可能機(jī)制，以探討人羊膜上皮細(xì)胞治療急性肺損傷的可行性。方法1、取健康產(chǎn)婦足月剖宮產(chǎn)后胎盤的羊膜組織，采用多次胰酶消化法獲取HAECS，培養(yǎng)過程中經(jīng)多次差別消化法逐步純化HAECS。調(diào)整純化的第2代（P2）細(xì)胞密度至5106ML，向細(xì)胞中緩慢加入新鮮配制的二甲基亞砜（DMSO）凍存液。將凍存管置于程序降溫儀中，待溫度降至100℃后迅速移入液氮罐中保存。1個(gè)月后對(duì)細(xì)胞進(jìn)行復(fù)蘇培養(yǎng)，觀察凍存前后HAECS的形態(tài)變化及增殖情況；并用流式細(xì)胞分析儀檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)記物（CD29、CD73、CD166、CD44、CD90、HLAABC、CD34）；用RTPCR法檢測(cè)OCT4及NANOG干細(xì)胞基因表達(dá)；同時(shí)在體外誘導(dǎo)HAECS向脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞分化。數(shù)據(jù)采用SPSS190統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量數(shù)據(jù)資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（XS）表示，采用獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)法分析兩組間的差異。2、向新生SD大鼠腹腔內(nèi)注射大腸桿菌內(nèi)毒素溶液20ΜLG5MGKG，制備脂多糖致急性肺損傷的動(dòng)物模型。造模后2H經(jīng)氣管滴入CMDIL熒光標(biāo)記好的P2代HAECS。動(dòng)物隨機(jī)分組如下（A）正常組（N5）；（B）模型組（LPS）（N5）腹腔內(nèi)注射LPS5MGKG；（C）細(xì)胞組（N5）腹腔內(nèi)注射LPS5MGKG氣管內(nèi)滴注HAECS（5105個(gè)CELLS40ΜL）；（D）對(duì)照組（N5）腹腔內(nèi)注射LPS5MGKG氣管內(nèi)滴注40ΜLPBS液。分別在輸注細(xì)胞24H、72H后，處死動(dòng)物收取標(biāo)本，每組每個(gè)時(shí)間點(diǎn)各5只大鼠。取肺組織標(biāo)本固定，HE染色后觀察肺損傷程度，測(cè)量肺損傷病理評(píng)分、肺泡間隔的厚度，測(cè)量肺干濕比（DW）。用ELISA免疫吸附法檢測(cè)肺組織丙二醛（MDA）濃度和超氧化物歧化酶（SOD）活性、同時(shí)檢測(cè)血清中白介素10（IL10）和白介素6（IL6）的濃度。數(shù)據(jù)采用SPSS190統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量數(shù)據(jù)資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（XS）表示，用單因素方差分析法分析組間差異。結(jié)果1、HAECS凍存前后的形態(tài)學(xué)無明顯改變，均呈鋪路石樣膜狀生長。與凍存前細(xì)胞相比，凍存后HAECS傳代時(shí)所需的消化時(shí)間有所縮短（P2、凍存后HAECS仍可以表達(dá)干細(xì)胞表面標(biāo)記，CD73、CD29、CD166陽性率達(dá)90％以上，中度表達(dá)CD90、CD44，低表達(dá)I類白細(xì)胞抗原HLAABC，不表達(dá)造血干細(xì)胞標(biāo)志CD34。RTPCR法檢測(cè)OCT4及NANOG基因表達(dá)均呈陽性。體外誘導(dǎo)后，凍存前后的HAECS均可向成骨細(xì)胞、成脂肪細(xì)胞分化。3、腹腔內(nèi)注射LPS后，肺組織可見不同程度充血、血管內(nèi)皮損傷出血，部分肺泡萎陷不張，部分肺泡間隔增厚、破壞。模型組與正常組相比，肺損傷病理評(píng)分、肺泡間隔的厚度均有顯著增加（P005）。模型組血清中促炎癥因子IL6水平逐漸升高，抗炎因子IL10的水平逐漸減低，與正常組相比，IL6水平24H為125±001（P0762），72H為161±029（P0006）；IL10的水平24H為1368±114（P0219），72H為1249±040（P0005），兩種因子在血清中的濃度變化72H時(shí)差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4、輸入HAECS細(xì)胞后，細(xì)胞組與對(duì)照組相比，24H和72H時(shí)肺損傷評(píng)分、肺泡間隔厚度均有顯著降低（P結(jié)論1、凍存后的HAECS除細(xì)胞貼壁性有所下降外，細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞生長周期、細(xì)胞表面干細(xì)胞標(biāo)記及其多向分化的潛能均沒有改變，說明液氮深低溫保存不影響HAECS的生物學(xué)特性，可以成為保存HAECS的一個(gè)可靠方法。2、氣管內(nèi)輸入HAECS后，肺組織損傷評(píng)分減少、肺泡間隔的厚度縮小，肺水腫減輕，說明可以HAECS可以減少炎性細(xì)胞的浸潤，減輕肺泡滲出，對(duì)內(nèi)毒素導(dǎo)致的ALI具有修復(fù)作用。3、HAECS能夠通過減輕局部氧化應(yīng)激反應(yīng)，調(diào)節(jié)促炎因子和抗炎因子的平衡，減輕炎癥反應(yīng)，保護(hù)受損組織，促進(jìn)組織恢復(fù)。

簡介：學(xué)位論文EG5、PCNA在人膀胱癌組織的表達(dá)及其對(duì)膀胱癌細(xì)胞在人膀胱癌組織的表達(dá)及其對(duì)膀胱癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響生物學(xué)行為的影響THEEXPRESSIONOFEG5ANDPCNAINHUMANBLADDERCARCINOMAANDITSEFFECTONTHEBIOLOGICALBEHAVIOROFBLADDERTUMORCELLS陳杰勛陳杰勛2014年05月分類號(hào)密級(jí)UDC編號(hào)指導(dǎo)教師姓名于德新教授申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)名稱外科學(xué)（泌尿外）提交論文日期201403論文答辯日期201405學(xué)位授予單位和日期安徽醫(yī)科大學(xué)答辯委員會(huì)主席李慶文評(píng)閱人郭劍明、梁朝朝