簡介：點擊查看更多成人骨髓間充質(zhì)干細胞轉(zhuǎn)導(dǎo)WnT-3a后的生物學(xué)特性分析和Wnt信號通路的基因芯片分析.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院博士學(xué)位論文臍帶血干祖細胞的體外擴增及擴增后干祖細胞生物學(xué)特性的研究姓名翟瓊莉申請學(xué)位級別博士專業(yè)病理與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師韓忠朝邱錄貴200251薛士筍往矗立1苷要粒酶催化亞單位一一HTERTMRNA水平表達的變化，進一步評價了擴增后UCBHSPC的增殖和自我更新能力。／結(jié)果1本研究的培養(yǎng)體系可有效支持UCBACL33‘細胞的擴增。經(jīng)過兩周的培養(yǎng)，從較早期的ACL33CD34、ACL33CD34、HPPCFU、CFUGEMM、ACL33及CD34細胞群，到各系定向祖細胞CFUGM和BFUE均得到持續(xù)顯著的擴增；2在體外擴增中，發(fā)現(xiàn)ACI33抗原的消失早于CD34，從ACI33／CD34細胞亞群變化推測細胞的分化過程可能是由ACL33CD34一ACL33CD34一ACT33CD34一HCL33一CD34。這一動態(tài)增殖過程提示ACL33是比CD34更為早期的HSPC表面標志；3擴增后CD34細胞與原代CD34細胞的端粒酶活性相當或有所升高，提示本研究建立的體外培養(yǎng)體系可保持擴增后HSPC的增殖和自我更新潛能。擴增后HSPC在移植受體內(nèi)重建持久造血的潛能除與其增殖分化及自我更新潛能密切相關(guān)，還須具有完整的歸巢功能。由于缺乏合適的方法檢測人HSC的體內(nèi)造血潛能，體外擴增后HSPC的功能特性至今仍未完全明了。歸巢過程包括粘附和遷移，原代HSPC粘附和趨化方面的研究已有很多報道，但有關(guān)體外擴增對HSPC歸巢相關(guān)功能影響的體外研究還很少，對擴增后HSPC粘附和遷移功能的系統(tǒng)研究無疑將為進一步優(yōu)化UCBHSPC的體外擴增體系和擴增后基于該領(lǐng)域的研究現(xiàn)狀和第一部分的實驗結(jié)將CD34細胞從擴增產(chǎn)物中再次純化出來，從動態(tài)的角度觀察了擴增過程中UCBCD34細胞歸巢相關(guān)細胞粘附分子CAMS的表達、粘附功能、趨化功能和趨化因子受體CXCR4表達的變化，從而評價細胞因子介導(dǎo)的簽叢芷燮對UCBHSPC體外歸巢相關(guān)功能的影響。這也是本研究的創(chuàng)新之處和重點所在結(jié)果1幾種與歸巢密切相關(guān)的粘附分子如CD49D、CD49E、CDLLA和CD44在擴增后CD34細胞表面的表達水平與擴增前持平或有所上升，這對保持擴增后HSPC在移植受體內(nèi)的植活潛能具有特別重要的意義；2擴增培養(yǎng)的前10天，CD34細胞的SDF1誘導(dǎo)粘附率和自發(fā)粘附率均呈明顯上升趨勢，至14天時恢復(fù)至原有水平或略有降低，表明擴增后CD34

簡介：南華大學(xué)碩士學(xué)位論文CAVEOLIN1在胃癌組織中的表達及其對胃癌細胞生物學(xué)性狀的影響姓名羅紅梅申請學(xué)位級別碩士專業(yè)病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師唐圣松張蒙夏20040301羅紅梅南華大學(xué)同等學(xué)歷人員碩士學(xué)位論文CAVEOLIN一1在胃癌組織中的表達及其對胃癌細胞生物學(xué)性狀的影響研究生羅紅梅導(dǎo)師唐圣松教授張蒙夏副教授摘要研究背景CAVEOLIN．1是CAVEOLAE膜結(jié)構(gòu)的重要結(jié)構(gòu)蛋白，與膽固醇的轉(zhuǎn)運、細胞飲液作用、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等密切相關(guān)。CAVEOLIN1可通過其骨架區(qū)域抑制SRC家族酪氨酸激酶、EGFR、NEU及PKC等多種蛋白激酶的活性，CAVEOLIN．1也能抑制ERK的活性。由于這些信號分子是引起細胞轉(zhuǎn)化的重要因子，禹此CAVEOLIN1可能具有抑制轉(zhuǎn)化的活性。在脂肪細胞、內(nèi)皮細胞、成纖維細胞、平滑肌細胞等終末分化的細胞中，CAVEOLIN．1表達甚高，但在癌基因轉(zhuǎn)化的細胞、惡性腫瘤組織中不表達或表達甚低。研究證實編碼人CAVEOLIN1的基因位于一高度疑似腫瘤抑制基因位點7Q31．1，此位點在肝癌、卵巢癌、前列腺癌、子宮肌瘤、胃癌等多種腫瘤中缺失或斷裂。因此，推測CAVEOLIN．1可能是一候選抑癌基因。但上調(diào)EAVEOLIN1的表達是否能延緩癌細胞的增殖周期或促進癌細胞的分化至今仍不甚明了。尤其是CAVEOLIN1在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用及其機制不清。方法用免疫組織化學(xué)SABC法檢測43例胃癌存檔蠟塊組織及15例胃炎活檢標本及WESTERNBLOT對2例合法引產(chǎn)的胚胎胃、5例胃癌及其癌旁組織EAVEOLIN1蛋白的表達。用LIPOFECTIN將EAVEOLIN．1基因穩(wěn)定轉(zhuǎn)染胃癌細胞系建立穩(wěn)定表達CAVEOLIN．1的胃癌細胞系MGC903／CAV．1，并將空載體轉(zhuǎn)染MGCS03作為對照MGC803／PCINEO。采用免疫細胞化學(xué)及WESTEMBLOT檢測轉(zhuǎn)染及未轉(zhuǎn)染的MGC803細胞中CAVEOLIN。L的表達情況。運用顯微鏡觀察EAVEOLIN1對MCRCS03細胞分化的影響；應(yīng)用細胞計數(shù)、MTT法、流式細胞術(shù)等檢測CAVEOLIN．1對MGC903細胞存活率及增殖周期的影響，WESTERNBLOT檢測CAVEOLIN1對MGC803細胞中CYCLIND1及ERKL／2活性的影響。結(jié)果結(jié)果顯示EAVEOLINL在胃癌組織中的表達明顯低于正常胃組織，其表達水平與胃癌的分化程度、癌細胞浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)分化程度越高，CAVEOLIN一1表達越高，反之。則越低；浸潤越深表達越低；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，其表達明顯低于無轉(zhuǎn)

簡介：第一部分穿孔素和顆粒酶B與肝移植生物學(xué)排異的相關(guān)性研究研究穿孔素和顆粒酶B在肝移植生物學(xué)排異中的診斷意義結(jié)果發(fā)現(xiàn)肝移植急性生物學(xué)排異時穿孔素和顆粒酶B的表達明顯增多顆粒酶B與穿孔素對肝移植急性生物學(xué)排異的診斷準確率分別為9268％和8537％第二部分細胞因子基因多態(tài)性與肝移植急性生物學(xué)排異關(guān)系的研究第一節(jié)正常漢族人群細胞因子基因多態(tài)性分析提示中國不同的漢族正常人群細胞因子基因多態(tài)性分布可能不同第二節(jié)受體細胞因子基因多態(tài)性與肝移植急性生物學(xué)排異關(guān)系提示受體TNFΑ高表達受體IL10低表達、受體TNFΑ高表達受體TGFΒ1高表達可能是急性生物學(xué)排異反應(yīng)的危險因素第三節(jié)供體細胞因子基因多態(tài)性與肝移植急性生物學(xué)排異關(guān)系研究供體腫瘤壞死因子ΑTNFΑ、白介素10IL10、白細胞介素6IL6、轉(zhuǎn)化生長因子Β1TGFΒ1和干擾素ΓIFNΓ的基因調(diào)節(jié)區(qū)或啟動子區(qū)基因多態(tài)性分布與肝移植急性生物學(xué)排異的關(guān)系提示供體細胞因子TGFΒ1高表達基因型可能對肝移植急性生物學(xué)排異有保護作用第四節(jié)供受體細胞因子配對與肝移植急性生物學(xué)排異關(guān)系應(yīng)用上述方法研究供受體細胞因子配對與肝移植急性生物學(xué)排異關(guān)系結(jié)果顯示排異組中受體TGFΒ1高表達供體TGFΒ1低表達組合對其他表達形式的比例顯著高于非排異組說明受體TGFΒ1高表達供體TGFΒ1低表達可能為急性生物學(xué)排異反應(yīng)的危險因素

簡介：第三軍醫(yī)大學(xué)研究生學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明秉承學(xué)校嚴謹?shù)男ｏL和科研作風，本人申明所呈交的論文是我本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果據(jù)我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得我?；蚱渌逃龣C構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料，與我同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。申請學(xué)位論文與資料若有不實之處，本人承擔一切相關(guān)責任。論文作者簽名華址日期I廠IC第三軍醫(yī)大學(xué)研究生學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人完全了解第三軍醫(yī)大學(xué)有關(guān)保護知識產(chǎn)權(quán)的規(guī)定，即研究生在攻讀學(xué)位期間論文工作的知識產(chǎn)權(quán)單位屬第三軍醫(yī)大學(xué)。本人保證畢業(yè)離校后，發(fā)表論文或使用論文工作成果時署名單位為第三軍醫(yī)大學(xué)。學(xué)校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。學(xué)?？梢怨紝W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容保密內(nèi)容除外，可以采用影印、縮印或其他手段保存論文。論文作者簽名指導(dǎo)教師簽名日期第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文下15PPRNARNASIN甲MRTPCR碘化丙咬磷脂酸絲氨酸核糖核酸核糖核酸酶抑制劑每分鐘轉(zhuǎn)數(shù)逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)SABCSDSPAGESPFTBEPROPIDIUMIODIDEPHOSPHATIDYLSERINERIBONUCLEASEACIDRIBONUCLEASEINHIBATORROUNDPER而NUTEREVERSETRANSCRIPTIONPOLYMERASECHAINREACTIONSTREPTAVIDINBIOTINCOMPLEXSODIUMDODECYLSULFATEPOLYACRYAMIDEGELELECTROPHORESISSPECIFICPATHOGENFREETRISBORONATEEDTABUFFERTEMEDTRISTSGTUNELTETRAMETHYLETHYLENEDIAMINETRIHYDROXYMETHYLAMINOMETHANETUMORSUPPRESSORGENETERMINALDEOXYNUCLNEOTIDYTRANSFERASEMEDIATEDUTPNICKENDLABELLING△NP73WILDTYPENHTERMINALTRANSACTIVATIONDOMAINTRUNCATEDP73鏈霉生物素一親合素復(fù)合物十二烷基硫酸鈉聚丙烯胺凝膠電泳無特殊病原體TRIS硼酸乙二胺四乙酸緩沖液四甲基乙二胺三輕甲基氨基甲烷抑癌基因末端脫氧核昔酸轉(zhuǎn)移酶TDT介導(dǎo)的DUT缺口末端標記技術(shù)野生型P73基因N末端轉(zhuǎn)錄活化區(qū)丟失的異構(gòu)體

簡介：犬同等學(xué)力申請碩士學(xué)位論文2005屆硫氧還蛋白反義寡核菩酸對前列腺癌PC3細胞生物學(xué)特性的影響EFFECTSOFTHIOREDOXINASONTOBIOLOGICALCHARACTERISTCSOFPROSTATECANCERPC3CELLS研究生姓名一玉』整盎一一指導(dǎo)教師姓名一一JL至、主一々業(yè)名稱皇墨生研究方向直到墮垂IJ盎熊塹童論文提交日期2業(yè)5生璺旦一一硫氧還蛋白反義寡核苷酸對前列腺癌PC3細胞生物學(xué)特性的影響中文摘要結(jié)論應(yīng)用反義寡核苷酸封閉TRX基因表達能抑制前列腺癌細胞體外生長活性，誘導(dǎo)細胞凋亡，有望成為前列腺癌基因治療的有效策略。關(guān)鍵詞前列腺腫瘤癌；硫氧還蛋白；反義寡核苷酸I【作者王曉春指導(dǎo)老師單玉喜

簡介：點擊查看更多CD34+細胞生物學(xué)特性的實驗研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：分類號R7352密級公開UDC610編號201209003攻讀碩士學(xué)位研究生畢業(yè)論文體外體外RNARNA干擾抑制干擾抑制REG4REG4基因表達對胃癌細胞基因表達對胃癌細胞生物學(xué)行為的影響生物學(xué)行為的影響論文起止時間20101020123指導(dǎo)教師耿排力教授呂有勇教授永勝副教授陸東明教授劉彥平教授學(xué)生姓名胥瑾論文類型理論研究學(xué)科專業(yè)名稱免疫學(xué)研究方向腫瘤免疫腫瘤免疫學(xué)院系、部醫(yī)學(xué)院青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院2009級攻讀碩士學(xué)位研究生畢業(yè)論文第2頁共40頁英文縮略語表英文縮略語表縮略詞英文名稱中文名稱APAMMONIUMPERSULFATE過硫酸銨AMPAMPICILLIN氨芐青霉素BPBASEPAIR堿基對BSABOVINESERUMALBUMIN牛血清白蛋白BLASTBASICLOCALALIGNMENTSEARCHTOOL同源性比較搜索工具CLCONFIDENCEINTERVAL可信區(qū)間CDNACOMLEMENTARYDNA互補脫氧核糖核酸DEPCDIETHYLPYROCABONATE焦碳酸二乙脂DMSODIMETHYLSULFOXIDE二甲基亞砜DDTDITHIOTHRETUL二硫蘇糖醇DNTPDEOXYRIBONUCLEASE脫氧核苷三磷酸EBETHIDIUMBROE溴化乙錠ECLENCHANTEDCHEMILUMINESCENCE增強化學(xué)發(fā)光EDTAETHYLENEDIAMINETETRAACETICACID乙二酰四乙酸FBSFETALBOVINESERUM胎牛血清KDKILODALTON千道爾頓LBLURIABETANIMEDIUMLB培養(yǎng)基MINMINUTE（S）分鐘MRNAMESSENGERRNA信使核糖核酸MTTMETHYLTHIAZOLYLTETRAZOLIUM噻唑藍ODOPTICALDESITY光密度PAGEPOLYACRYLAEGELELECTROPHESIS聚丙烯酰胺凝膠電泳RMPREVOLUTIONSPERMINUTE每分鐘轉(zhuǎn)速SDSSODIUMDODECYLSULFATE十二烷基磺酸鈉RTPCRREVERSETRANIONPCR逆轉(zhuǎn)錄PCR

簡介：本實驗研究了丙型肝炎病毒HCV持續(xù)感染對體外培養(yǎng)人合體滋養(yǎng)層細胞生物學(xué)性狀的影響及其機理。主要內(nèi)容如下一、HCV持續(xù)感染對體外培養(yǎng)人胎盤合體滋養(yǎng)層細胞生物學(xué)性狀的影響。人晚期囊胚著床后，滋養(yǎng)層內(nèi)層分裂生長的細胞滋養(yǎng)層細胞迅速分化為合體滋養(yǎng)層細胞。合體滋養(yǎng)層細胞對受精卵的著床以及母體胎兒交互式血液循環(huán)的建立均有重要意義，其可侵入母體子宮蛻膜及子宮螺旋動脈，是胎盤形成的主要功能細胞。合體滋養(yǎng)層細胞是人體正常細胞中唯一具有侵襲能力的細胞，類似于腫瘤細胞。合體滋養(yǎng)層細胞也具有活躍的合成物質(zhì)的能力，其合成分泌的人絨毛膜促性腺激素HCG、人胎盤生乳素HPL等對妊娠的維持以及胎兒的發(fā)育均有十分重要的意義。因此，本實驗分別采用MATRIGEL人工重建基底膜侵襲實驗來研究HCV感染對體外培養(yǎng)人胎盤滋養(yǎng)層細胞侵襲能力的影響，并研究細胞感染HCV后粘附、移動能力以及激素合成分泌能力以HCG為檢測因子的改變。研究證實HCV持續(xù)感染可抑制體外培養(yǎng)人胎盤合體滋養(yǎng)層細胞包括侵襲能力和激素合成分泌能力在內(nèi)的多種生物學(xué)功能。二、HCV持續(xù)感染對體外培養(yǎng)人胎盤合體滋養(yǎng)層細胞MMP2和MMP9合成分泌的影響。合體滋養(yǎng)層細胞的侵襲能力是其侵入母體子宮蛻膜及子宮螺旋動脈，參與形成胎盤胎盤屏障的生物學(xué)基礎(chǔ)。研究表明，合體滋養(yǎng)層細胞的侵襲能力與金屬蛋白酶2MATRIXMETALLOPROTEINASE2，MMP2和金屬蛋白酶9MATRIXMETALLOPROTEINASE9，MMP9密切相關(guān)，合體滋養(yǎng)層細胞合成分泌MMP2和MMP9，降解細胞外基質(zhì)ECM，穿越ECM間隙，從而完成侵襲過程。在前一部分實驗的基礎(chǔ)上，本部分實驗通過ELISA、明膠酶譜分析以及RTPCR等方法研究HCV持續(xù)感染對合體滋養(yǎng)層細胞MMP2和MMP9合成分泌的影響，探討HCV感染抑制合體滋養(yǎng)層細咆侵襲能力的具體分子機制。研究結(jié)果表明HCV持續(xù)感染時體外培養(yǎng)人胎盤合體滋養(yǎng)層細胞MMP2和MMP9合成與侵襲、粘附、運動能力相關(guān)分泌能力下降，為非特異性。因而我們推測細胞激素合成分泌能力下降所致細胞分化成熟障礙是細胞侵襲能力以及侵襲相關(guān)的粘附、運動能力的下降的主要原因。

簡介：目的本研究通過體外模擬缺氧微環(huán)境，旨在研究缺氧條件對骨髓來源內(nèi)皮祖細胞BMEPCS形態(tài)學(xué)、抗凋亡能力、體外血管形成能力等生物學(xué)功能的影響方法1、無菌條件下分離68周齡180220G雄性WISTAR大鼠四肢長骨，PBSE沖洗骨髓腔至白色透亮，經(jīng)密度梯度離心法獲得大鼠骨髓來源單核細胞，接種在包被有大鼠玻連蛋白的10CM培養(yǎng)皿中，加入特定內(nèi)皮細胞生長培養(yǎng)基2。2、隨機分為常規(guī)培養(yǎng)組和缺氧培養(yǎng)組，常規(guī)培養(yǎng)組于常規(guī)37℃、5％CO2條件下培養(yǎng)7D缺氧培養(yǎng)72H、48H、24H組分別于常規(guī)37℃、5％CO2條件下培養(yǎng)4D、5D、6D后，缺氧1％O25％CO294％N2條件下繼續(xù)培養(yǎng)72H、48H、24H。3、細胞形態(tài)觀察、細胞表面標志物CD34CD133雙陽性標記檢測、DIL標記的乙?；兔芏戎鞍缀虵ITC標記的荊豆凝集素1共同染色，三種方法共同鑒定常規(guī)培養(yǎng)至第7天的BMEPCS細胞。4、分別觀察常規(guī)培養(yǎng)組、缺氧72H組、缺氧48H組、缺氧24H組細胞形態(tài)學(xué)變化，并對以上各組細胞進行內(nèi)皮分化功能檢測MATRIGELASSAY、抗凋亡檢測ANNEXINⅤPI，比較各組細胞生物學(xué)功能變化差異，明確缺氧條件對BMEPCS的功能影響。結(jié)果1、成功分離并獲得各組培養(yǎng)至第7天的大鼠骨髓來源內(nèi)皮祖細胞，BMEPCS細胞吞噬DIL標記的乙?；兔芏戎鞍缀虵ITC標記的荊豆凝集素1，雙熒光染色細胞陽性率為90％±4％，細胞表面標志物CD34CD133雙陽性率為86％±2％。2、隨著缺氧處理時間的延長，BMEPCS早期凋亡率明顯增加。與常規(guī)培養(yǎng)組089±020％相比，缺氧培養(yǎng)24H組早期凋亡率133±007％改變不明顯（P＞005），缺氧培養(yǎng)48H組325±012％、72H組748±153％，早期凋亡率明顯增加（P＜005）。3、隨著缺氧處理時間的延長，BMEPCS體外血管形成能力變化明顯。與常規(guī)培養(yǎng)組比較，缺氧培養(yǎng)24H組的體外血管形成能力增強P＜001，缺氧培養(yǎng)48H、72H組體外血管形成能力明顯下降P＜001與缺氧培養(yǎng)24H組比較，缺氧培養(yǎng)48H、72H組體外血管形成能力明顯下降（P＜005）。結(jié)論缺氧預(yù)處理BMEPCS24H，BMEPCS早期凋亡率增加不明顯，細胞體外血管形成能力明顯增強。

簡介：慢性骨疾病如骨質(zhì)疏松、成骨不全等是最為常見的骨代謝異常疾病也是導(dǎo)致骨折和骨缺損的主要原因之一并嚴重影響到牙齒、牙周組織以及頜骨的健康。骨代謝異常時可能會打破自體干細胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)態(tài)從而抑制干細胞的生物學(xué)特性和功能影響骨組織的再生與修復(fù)。骨髓間充質(zhì)干細胞BMSCS因其具有自我更新及多向分化潛能已成為骨再生的重要種子細胞對骨缺損有較好的修復(fù)能力。然而在慢性骨疾病環(huán)境下BMSCS會因不良的微環(huán)境和局部營養(yǎng)供給的影響而使其生物學(xué)活性和功能受到抑制影響骨修復(fù)能力。近年來發(fā)現(xiàn)的血管內(nèi)皮祖細胞EPCS被證實具有新生血管、促進局部營養(yǎng)支持和改善微環(huán)境的功能。因此我們希望可以利用EPCS來促進BMSCS的生物學(xué)活性和功能以提高BMSCS的骨再生能力。本實驗通過建立TRANSWELL間接共培養(yǎng)體系來探索EPCS是否具有提高大鼠BMSCSRBMSCS生物學(xué)特性的功能為進一步促進BMSCS的骨修復(fù)能力奠定理論基礎(chǔ)對開發(fā)治療骨質(zhì)疏松等新的治療策略具有重要意義。研究目的1探討間接共培養(yǎng)條件下EPCS對RBMSCS細胞轉(zhuǎn)歸的影響。2探討間接共培養(yǎng)條件下EPCS對RBMSCS干性的調(diào)控作用。3探討間接共培養(yǎng)條件下EPCS對RBMSCS增殖、凋亡、分化的調(diào)控作用。4探討EPCS對RBMSCS體內(nèi)骨修復(fù)能力的影響。研究方法1利用密度梯度離心法結(jié)合全骨髓貼壁法分離培養(yǎng)RBMSCS倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)流式細胞技術(shù)檢測細胞表面分子的表達克隆集落形成、MTT法檢測細胞增殖能力。成骨、成脂誘導(dǎo)檢測細胞多向分化能力。2采用密度梯度離心法分離出骨髓中單個核細胞利用條件培養(yǎng)基結(jié)合差速貼壁法進行培養(yǎng)和純化EPCS通過對原代細胞形態(tài)學(xué)特征的連續(xù)性觀察、細胞分子表型基因的表達檢測、體外小管形成實驗以及免疫組化和免疫雙熒光染色等方法對EPCS進行綜合鑒定。3建立EPCS、BMSCSTRANSWELL間接共培養(yǎng)體系RTPCR、流式細胞儀以及DIIACLDL熒光染色檢測BMSCS細胞的轉(zhuǎn)歸。4間接共培養(yǎng)后RTPCR檢測干性轉(zhuǎn)錄因子在RBMSCS中的表達情況REALTIMEPCR檢測其基因表達量的變化EDU熒光標記法、CFUF形成率及流式細胞儀檢測BMSCS增殖及凋亡情況ALP染色、酶活性定量檢測以及茜素紅染色觀察BMSCS堿性磷酸酶和鈣化結(jié)節(jié)的形成情況REALTIMEPCR和WESTERNBLOT檢測成骨標志性基因的表達量變化油紅O染色觀察EPCS對BMSCS成脂分化的影響REALTIMEPCR和WESTERNBLOT檢測成脂相關(guān)基因及蛋白的表達量變化。5建立大鼠牙槽骨缺損模型將經(jīng)EPCS作用過的RBMSCS復(fù)合生物支架材料移植入骨缺損區(qū)通過CMDIL熒光標記進行細胞體內(nèi)示蹤對術(shù)后的標本組織進行大體觀察MICROCT掃描、新骨骨密度檢測以及組織HE染色來檢測BMSCS的骨再生能力。實驗結(jié)果1體外分離培養(yǎng)的RBMSCS多呈長梭形、多角形可以形成單細胞克隆集落細胞增殖呈典型的S‖形表達間充質(zhì)細胞表面標志物而不表達造血系細胞的標志物并具有成骨、成脂分化的能力證明所培養(yǎng)的細胞是BMSCS。2經(jīng)過條件培養(yǎng)基結(jié)合差速貼壁法培養(yǎng)的單個核細胞在原代早期呈長梭形而晚期則轉(zhuǎn)變?yōu)殇伮肥癄?。細胞同時具有造血干細胞和內(nèi)皮細胞表面標志物的雙重表達體外可以形成類似微血管樣的結(jié)構(gòu)并且對單核細胞及內(nèi)皮細胞特異分子免疫組化及雙熒光染色呈陽性表達證實所分離培養(yǎng)的單個核細胞為EPCS。3與EPCS間接培養(yǎng)后的BMSCS其細胞形態(tài)及細胞表面分子的表達與對照組相比沒有明顯差別。因此在間接共培養(yǎng)條件下EPCS并未明顯改變BMSCS的細胞表型。4間接共培養(yǎng)后EPCS可以有效維護RBMSCS干性轉(zhuǎn)錄因子的基因表達量并增強BMSCS細胞DNA合成能力和細胞增殖能力但對BMSCS的凋亡沒有明顯調(diào)控作用。另外EPCS的間接刺激可以有效促進RBMSCS體外成骨及成脂分化能力。5EPCS于體外間接作用后可以增強BMSCS在體內(nèi)的骨修復(fù)能力。結(jié)論1間接共培養(yǎng)條件下EPCS不會改變BMSCS細胞表型特征。2間接共培養(yǎng)條件下EPCS能夠維持BMSCS的細胞干性并促進其體外增殖及分化能力但對BMSCS的細胞凋亡沒有影響。3經(jīng)EPCS間接刺激后的BMSCS其修復(fù)牙槽骨缺損的能力明顯提高。

簡介：分類號分類號R73733密級公開密級公開MIR455對宮頸癌宮頸癌SIHA細胞生物學(xué)特性細胞生物學(xué)特性的影響的影響及其機制及其機制EFFECTSANDMECHANISMSOFMIR455ONTHEBIOLOGICALPROPERTIESOFSIHACERVICALCANCERCELLS作者姓名張康作者姓名張康學(xué)科專業(yè)婦產(chǎn)科學(xué)學(xué)科專業(yè)婦產(chǎn)科學(xué)導(dǎo)師孟元光教授師孟元光教授指導(dǎo)教師指導(dǎo)教師韓為東研究員韓為東研究員答辯委員會主席答辯委員會主席論文答辯日期二論文答辯日期二〇一三年五月一三年五月二十三日二十三日院校地址北京市院校地址北京市海淀區(qū)海淀區(qū)復(fù)興路復(fù)興路28號郵政編碼郵政編碼100853目錄中英文縮略詞表中英文縮略詞表1中文摘要中文摘要2ABSTRACT4前言6第一部分第一部分MIR455在宮頸癌組織中的表達及在宮頸癌組織中的表達及SIHA細胞中表達水平的變化細胞中表達水平的變化10前言10材料與方法10結(jié)果與分析19討論21小結(jié)23第二部分第二部分MIR455對SIHA細胞增殖、凋亡、周期的影響細胞增殖、凋亡、周期的影響24材料與方法24結(jié)果與分析26討論29小結(jié)31第三部分第三部分MIR455靶基因的預(yù)測及驗證靶基因的預(yù)測及驗證32前言32材料與方法32實驗結(jié)果44討論47小結(jié)48全文總結(jié)全文總結(jié)49參考文獻參考文獻50綜述綜述54在讀期間發(fā)表論文在讀期間發(fā)表論文63致謝致謝64

簡介：創(chuàng)傷性腦損傷（TRAUMATICBRAININJURY，TBI）是一個世界性的公共衛(wèi)生問題。TBI不僅具有較高的患病率和致死率，而且是繼發(fā)性癲癇發(fā)病的一個重要原因，嚴重影響患者的生活質(zhì)量。在我國，TBI是40歲以下成年人創(chuàng)傷性死亡的主要原因。即使有幸存活下來一部分TBI也將造成嚴重的神經(jīng)功能缺失和行為能力的障礙，給家庭和社會造成極大的負擔。目前臨床主要采用對癥支持療法，另外采用積極的院前復(fù)蘇、快速分流、重癥監(jiān)護也有助于降低死亡率，但這些治療方法仍不能達到令人滿意的效果。TBI在病理生理學(xué)上可分為原發(fā)性腦損傷和繼發(fā)性腦損傷兩個階段。首先原發(fā)性的機械性創(chuàng)傷會對局部的神經(jīng)組織造成損害，而損傷本身隨后又會觸發(fā)一連串的級聯(lián)反應(yīng)，包括神經(jīng)組織缺血、繼發(fā)于彌漫性軸索損傷的WALLERIAN變性、興奮毒性、鈣穩(wěn)態(tài)失調(diào)、線粒體功能障礙和自由基介導(dǎo)的損傷等。繼發(fā)性的腦損傷常發(fā)生在頭部受傷后的數(shù)小時到數(shù)天的時間內(nèi)。而且TBI之后神經(jīng)元的喪失不僅僅發(fā)生在損傷局部而且可以彌散到其它腦區(qū)。局灶性損傷典型的特征是損傷區(qū)周圍的灰質(zhì)內(nèi)或灰白質(zhì)交界處的出血。這種局灶性的神經(jīng)元死亡有兩種機制，迅速的細胞壞死和進程較慢的細胞調(diào)亡。彌漫性損傷則主要發(fā)生在海馬區(qū)神經(jīng)元，海馬區(qū)的神經(jīng)元對TBI的反應(yīng)尤為敏感，在所有致命的TBI患者中有超過80％存在海馬區(qū)神經(jīng)元的大量喪失，即使在沒有顱高壓存在的情況下亦是如此。這造成的直接后果便是導(dǎo)致實驗動物或患者記憶和認知功能的損害。當前對TBI治療方法的研究主要基于以上對繼發(fā)性腦損傷的病理生理、分子和細胞機制的認識，包括占位性病變的早期發(fā)現(xiàn)和清除防止二次損傷，并嘗試通過藥物來減輕生化和細胞級聯(lián)反應(yīng)造成的損害。人們普遍認為，成年人在損傷后刺激中樞神經(jīng)系統(tǒng)再生將可能需要一個或多個以下的進程細胞更換、提供神經(jīng)營養(yǎng)因子、促進軸突導(dǎo)向和去除抑制軸突生長的因素、細胞內(nèi)信號傳導(dǎo)的調(diào)控、橋接和材料、和或調(diào)節(jié)的免疫反應(yīng)。自從20年前哺乳動物大腦的神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細胞具有自我更新的能力被證實以來，對中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷的研究熱點逐漸轉(zhuǎn)入對神經(jīng)生物學(xué)的研究，例如細胞替代療法已經(jīng)成為研究和商業(yè)活動的一大焦點。越來越多的證據(jù)表明，基于干細胞移植的治療方法可能是用于治療TBI后功能障礙的最有前途的治療策略之一。細胞替代療法以如下的治療理念為基礎(chǔ)，即創(chuàng)傷或疾病所引起的神經(jīng)功能缺失可以通過引入新的細胞來替代喪失的神經(jīng)元和膠質(zhì)細胞，或者所引進細胞通過神經(jīng)營養(yǎng)作用來增加受損的神經(jīng)細胞的存活、可塑性和功能的恢復(fù)來發(fā)揮作用。迄今為止各種類型的干細胞，包括胚胎干細胞，神經(jīng)干細胞和間充質(zhì)干細胞目前正在被用于移植研究來治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷。胚胎干細胞（EMBRYONICSTEMCELLS，ESC）移植對大鼠的腦損傷功能恢復(fù)有治療作用，但是移植后的腫瘤形成限制了它在人體當中的應(yīng)用。另外胚胎干細胞的應(yīng)用存在明顯道德倫理障礙和胎兒組織來源不足等問題。最新的研究顯示誘導(dǎo)多能干細胞INDUCEDPLURIPOTENTSTEMCELLS，IPS）具有ESC的全能性，但是它同樣存在體內(nèi)形成腫瘤的危險。神經(jīng)干細胞NEURALSTEMCELLS，NSC是一個用來移植治療腦損傷理想的種子細胞，它既可以分化成神經(jīng)細胞又可以分泌多種神經(jīng)營養(yǎng)因子，但是大量神經(jīng)干細胞的來源問題目前為止仍然限制了它的應(yīng)用。人間充質(zhì)干細胞MESENCHYMALSTEMCELLS，MSC被認為是一個很好作為腦損傷移植治療的備選細胞。在實驗和臨床研究中骨髓間充質(zhì)干細胞BONEMARROWMESENCHYMALSTEMCELLS，BMMSC是目前使用最廣泛的種子細胞。然而抽取骨髓是一個具有高度侵入性的過程中，存在疼痛和感染的風險，而且其分化的潛能和擴增能力都會隨著年齡的增加而降低。因此尋找BMMSC的替代細胞已經(jīng)成為一個研究方向。來自胎盤，胎膜，羊水或胎兒組織細胞在細胞數(shù)量、擴張潛力和分化能力上都較成體組織來源的間充質(zhì)干細胞更高。而且它們當中的一些細胞已經(jīng)被用來研究治療神經(jīng)退行性疾病和神經(jīng)創(chuàng)傷性疾病。盡管胎盤來源的某些間充質(zhì)干細胞已經(jīng)被用來研究其對實驗動物某些神經(jīng)系統(tǒng)疾病模型的治療作用，但是目前仍不清楚圍生期組織來源的各種細胞對神經(jīng)系統(tǒng)疾病的治療作用是否相同。在本研究中，我們將重點比較人羊膜來源間充質(zhì)干細胞（AMNIOTICMEMBRANEMESENCHYMALSTEMCELLS，AMMSC）和臍帶華通膠來源的間充質(zhì)干細胞UMBILICALCDWHARTONSJELLYMESENCHYMALSTEMCELLS，WJMSC的生物學(xué)特性，比較它們的形態(tài)、體外擴增能力、免疫表型、和多能性。鑒于神經(jīng)干細胞是用來移植治療TBI一個最理想的種子細胞，我們還比較了這兩種間充質(zhì)干細胞的體外神經(jīng)分化潛能，哪種細胞越容易的分化成神經(jīng)干細胞，它就越適合作為治療TBI的種子細胞。細胞移植治療TBI，除了細胞替代以外，移植細胞提供的旁分泌功能也起到一定的作用。MSC被移植到腦損傷區(qū)域后可以提高損傷局部的神經(jīng)營養(yǎng)因子濃度，這對受損細胞的存活和分化具有重要的意義。本實驗中我們使用人細胞因子抗體芯片檢測兩種來源間充質(zhì)干細胞的507個細胞因子的表達。同時在兩種間充質(zhì)干細胞的神經(jīng)干的誘導(dǎo)過程中，我們在體外檢測了對神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育和重建具有關(guān)鍵作用的5個神經(jīng)營養(yǎng)因子。它們是腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子BRAINDERIVEDNEUROTROPHICFACT，BDNF、神經(jīng)生長因子NERVEGROWTHFACT，NGF、神經(jīng)營養(yǎng)因子3（NEUROTROPHIN3，NT3）、膠質(zhì)細胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（GLIALCELLDERIVEDNEUROTROPHICFACT，GDNF）和睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子CILIARYNEUROTROPHICFACT，CNTF。這一結(jié)果將在一定程度上對于TBI損傷修復(fù)中種子細胞的選擇提供一定的參考，尤其是在神經(jīng)營養(yǎng)因子分泌方面。同時這也反映神經(jīng)干細胞誘導(dǎo)過程對不同細胞分泌神經(jīng)營養(yǎng)因子能力的影響。另一方面移植入體內(nèi)干細胞的存活能力也是干細胞移植治療需要考慮的重要方面。間充質(zhì)干細胞的移植治療效果往往被植入細胞的大量損失所限制，細胞的死亡是由于損傷部位的惡劣微環(huán)境所引發(fā)。本研究中我們通過過氧化氫和去血清培養(yǎng)兩種方式來模擬過氧化應(yīng)激和局部的缺血缺氧環(huán)境，并比較了兩種來源間充質(zhì)干細胞體外的抗凋亡能力。抗凋亡能力強的干細胞更適合體內(nèi)移植治療TBI。本研究包括三個部分第一部分AMMSC和WJMSC的分離、培養(yǎng)和鑒定。目的建立一種簡單有效的分離培養(yǎng)AMMSC和WJMSC的方法，觀察其形態(tài)，檢測其表面抗原標記的表達情況，觀察培養(yǎng)過程中核型的變化，比較兩種細胞體外增殖能力，觀察其表面的細微結(jié)構(gòu)，并檢測它們中胚層多向分化能力。方法對與羊膜細胞的分離我們采用24UML中性蛋白酶、10MGML膠原酶A和001MGML脫氧核糖核酸酶依次消化來分離對于華通膠細胞的分離我們采用Ⅱ型膠原酶和0125％胰酶EDTA依次消化的方法來分離。通過光學(xué)顯微鏡對細胞進行形態(tài)學(xué)觀察，并通過原子力顯微鏡ATOMICFCEMICROSCOPE，AFM對細胞表面的細微結(jié)構(gòu)進行掃描。運用流式細胞術(shù)對兩種分離得到的細胞的表面抗原進行檢測，并通過免疫細胞化學(xué)的方法對其表達神經(jīng)干細胞標志的情況進行檢測。通過測定體外累積群體倍增來對兩種細胞體外增殖能力進行比較，并對體外培養(yǎng)的細胞進行核型分析。我們對兩種MSC的中胚層多向分化能力進行的檢測，包括向骨細胞、脂肪細胞和軟骨細胞的分化能力。結(jié)果通過上述的方法我們成功的分離培養(yǎng)出AMMSC和WJMSC。兩種細胞都呈現(xiàn)成纖維細胞樣貼壁生長，相比之下WJMSC形態(tài)更加細長并具有更加強的折光性。對細胞表面抗原檢測，我們發(fā)現(xiàn)兩種細胞的表達情況相類似，它們表達間充質(zhì)干細胞的表面抗原CD13、CD29、CD44、CD73、CD90和CD105，不表達血液和內(nèi)皮系統(tǒng)的表面抗原（CD19、CD31、CD34和CD45），表達Ⅰ類抗原HLAABC但不表達Ⅱ類抗原HLADR。通過對兩種細胞向中胚層多向分化能力的檢測，發(fā)現(xiàn)兩種細胞都能夠向骨細胞、脂肪細胞和軟骨細胞方向分化。以上結(jié)果與國際細胞治療學(xué)會對間充質(zhì)干細胞的定義和標準相符合，這說明我們從上述組織中分離出的細胞符合間充質(zhì)干細胞的特性。免疫細胞化學(xué)檢測結(jié)果顯示兩種細胞都強烈表達波形蛋白10000±000％VS10000±000％，少量的AMMSC和WJMSC表達NESTIN2873±297％VS1922±296％T2265P0053、SOX22058±243％VS2111±251％T0154P0881和MUSASHI11017±310％VS1262±258％，T0609，P0559，兩組之間NESTIN在AMMSC中陽性率較高但差異無統(tǒng)計學(xué)意義。AFM掃描結(jié)果顯示，AMMSC具有更強的粘附能力，在細胞的生長過程中邊緣胞體有更長的偽足伸出，這提示其可能具有更強的遷移能力。體外擴增實驗結(jié)果顯示，WJMSC具有更高的體外增殖能力（F817948，P＜0001）。在細胞培養(yǎng)的各個階段我們都對細胞進行了核型分析，未發(fā)現(xiàn)體外培養(yǎng)對其正常核型的產(chǎn)生影響。結(jié)論我們成功分離出AMMSC和WJMSC，分離出的細胞符合MSC的標準，包括表面抗原的表達情況和中胚層多向分化的能力。AMMSC具有更強的粘附能力，并可能有更強的體內(nèi)遷移能力而WJMSC則具有更強的體外增殖能力。兩種細胞在體外培養(yǎng)條件下都能保持正常的二倍體核型。第二部分AMMSC和WJMSC向神經(jīng)干細胞分化能力的比較。目的建立一種誘導(dǎo)AMMSC和WJMSC分化為神經(jīng)干細胞的方法。通過這種方法我們想找到神經(jīng)干細胞的新的來源，另外我們比較兩種來源間充質(zhì)干細胞向神經(jīng)干細胞的分化能力。檢測在誘導(dǎo)過程中神經(jīng)營養(yǎng)因子表達量的變化情況。方法間充質(zhì)干細胞向神經(jīng)干細胞分化的方法如下AMMSC和WJMSC培養(yǎng)在神經(jīng)干細胞誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基含有KNOCKOUTTMDMEMF12基礎(chǔ)培養(yǎng)基、20NGML人上皮細胞生長因子HUMANEPIDERMALGROWTHFACT，EGF、20NGML人成纖維細胞細胞生長因子HUMANBETAFIBROBLASTICGROWTHFACT，BFGF、神經(jīng)干細胞添加劑STEMPRONSCSFM和GLUTAMAXTMⅠ添加劑1∶100同時含有1％的青鏈霉素，在37℃和5％CO2置于25CM2超低粘附力表面的培養(yǎng)瓶中。每3天更換一次新鮮培養(yǎng)基。誘導(dǎo)10天后，收集神經(jīng)球通過實時定量PCR和酶聯(lián)免疫吸ENZYMELINKEDIMMUNOADSDENTASSAY，ELISA附實驗來檢測神經(jīng)營養(yǎng)因子的表達水平。結(jié)果AMMSC和WJMSC可以被誘導(dǎo)成神經(jīng)球（一種神經(jīng)干細胞的生長方式），羊膜來源的神經(jīng)干細胞（AMNIONDERIVEDNEURALSTEMCELLS，AMNSC）和臍帶華通膠來源的神經(jīng)干細胞UMBILICALCDWARTONSJELLYDERIVEDNEURALSTEMCELLS，AMNSC。而且這種誘導(dǎo)得到的神經(jīng)球具有神經(jīng)干細胞的大部分特征。免疫細胞化學(xué)結(jié)果顯示AMMSC和WJMSC經(jīng)過誘導(dǎo)之后表達三種神經(jīng)干細胞的標志。經(jīng)過神經(jīng)干細胞誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)之后與未誘導(dǎo)的間充質(zhì)干細胞相比，神經(jīng)干細胞的標志表達明顯上調(diào)。細胞免疫化學(xué)具體結(jié)果如下AMNSC與AMMSC相比表現(xiàn)更強的NESTIN、SOX2和MUSASHI熒光信號NESTIN，9205±275％VS2873±297％P＜0001SOX27017±316％VS2058±243％P＜0001MUSASHIL，6694±362％VS1017±310％，P＜0001）WJNSC與WJMSC相比表現(xiàn)更強的NESTIN、SOX2和MUSASHI熒光信號（NESTIN，8357±260％VS1922±296％P＜0001SOX27117±363％VS2111±251％P＜0001MUSASHI6415±381％VS1262±258％，P＜0001）。有意思的是誘導(dǎo)后AMNSC與WJNSC相比表現(xiàn)更強的NESTIN熒光信號但SOX2和MUSASHI未見顯著差異NESTIN，921±282％VS836±2252％P00497SOX2702±326％VS712±354％，P0816MUSASHI1，670±367％VS640±389％，P0559）。實時定量PCR結(jié)果和WESTERNBLOT結(jié)果與免疫細胞化學(xué)結(jié)果一致。對兩種來源細胞的間充質(zhì)干細胞在誘導(dǎo)前后分泌神經(jīng)營養(yǎng)因子的能力的變化情況進行的檢測。我們檢測了BDNF、GDNF、NT3、CNTF和NGF。具體的ELISA結(jié)果如下AMMSC分泌因子的情況，BDNF，10951±1526PGML，GDNF3285±1421PGMLNT32743±1191PGMLCNTF3962±1356PGML和NGF2146±983PGML誘導(dǎo)之后AMNSC分泌因子情況，BDNF，47739±3995PGMLGDNF10101±1167PGMLNT320633±2636PGMLCNTF16048±2269PGML和NGF18523±2359PGM。WJMSC分泌因子情況，BDNF24169±2590PGMLGDNF1621±1001PGMLNT317235±2520PGML，CNTF3437±1142PGML和NGF10559±1824PGML誘導(dǎo)之后WJNSC分泌因子情況，BDNF，33366±3159PGML，GDNF9364±1917PGML，NT312246±2002PGML，CNTF23128±2207PGML和NGF3276±1017PGML。組間比較結(jié)果顯示誘導(dǎo)前WJMSC與AMMSC相比表達高的BDNFP0006、NT3P＜0001和NGFP0002。而有意思的是誘導(dǎo)后AMNSC卻比WJNSC表達更高的BDNFP0003、NT3P0015、CNTFP0014和NGFP0009。實時定量PCR的結(jié)果與上述的ELISA結(jié)果一致。結(jié)論成功的將AMMSC和WJMSC誘導(dǎo)為AMNSC和WJNSC。這些誘導(dǎo)得到的NSC與未誘導(dǎo)的間充質(zhì)干細胞相比表達更高的NSC標志。誘導(dǎo)之前WJMSC和AMMSC相比表達更多的BDNF、NT3和NGF，然而誘導(dǎo)之后AMNSC卻比WJNSC表達更高的BDNF、NT3、CNTF和NGF。由此可見來自新生兒附屬組織不同部位的間充質(zhì)干細胞對同一神經(jīng)干細胞誘導(dǎo)方法的反應(yīng)不完全相同，相比之下AMMSC對神經(jīng)干細胞誘導(dǎo)的反應(yīng)更有利于神經(jīng)營養(yǎng)因子的分泌。第三部分AMMSC和WJMSC體外細胞因子抗體芯片檢測和抗凋亡能力的檢測。目的運用人細胞因子抗體芯片對兩種來源間充質(zhì)干細胞分泌細胞因子的能力進行檢測。通過過氧化氫和去血清培養(yǎng)誘導(dǎo)AMMSC和WJMSC凋亡，并檢測其抗凋亡能力。方法使用人細胞因子抗體芯片HUMANL507ARRAY，RAYBIOTECHINC檢測兩種間充干細胞所分泌的507種細胞因子。我們用化學(xué)發(fā)光的方法來探測膜上的信號強度，信號的強度通過光密度計來進行定量。對于數(shù)值差別在兩倍以上的因子，我們對其進行統(tǒng)計學(xué)分析。我們選用陽性對照對來自各張膜的數(shù)值進行標準化。本實驗中采用2MMOLL的H2O2和去血清培養(yǎng)來誘導(dǎo)細胞凋亡。誘導(dǎo)凋亡的細胞以末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的脫氧尿苷三磷酸生物素缺口末端標記法TUNEL和ANNEXINV和PROPIDINE碘PI染色來進行測定。結(jié)果細胞因子抗體芯片的結(jié)果如下與WJMSC相比AMMSC中檢測到有23種細胞因子高表達差異倍數(shù)在兩倍以上而在WJMSC中有49種細胞因子相對AMMSC高表達差異倍數(shù)在兩倍以上。在AMMSC中高表達的23種細胞因子中，有4種因子差異有統(tǒng)計學(xué)意義而在WJMSC中兩倍以上高表達的49種因子，統(tǒng)計結(jié)果顯示差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義。在AMMSC中上調(diào)的4種因子為白細胞介素INTERLEUKIN，IL或者白細胞介素的受體。具體的細胞因子如下IL6T3546P0038IL13RALPHA2T3336P0045IL12P70T3743P0033IL22RT3187，P00498。H2O2誘導(dǎo)凋亡后，TUNEL法檢測AMMSC和WJMSC細胞凋亡率2794±231％VS3570±227％，T2401，P0043，ANNEXINVPI染色方法檢測細胞凋亡率3131±205％VS3952±265％，T2448，P0040去血清培養(yǎng)誘導(dǎo)凋亡后，ANNEXINVPI染色方法檢測細胞凋亡率（823±091％VS1171±113％，T2396，P0043）。結(jié)果顯示AMMSC無論在過氧化氫還是去血清培養(yǎng)誘導(dǎo)的細胞凋亡中都比WJMSC顯示更強的抗凋亡能力。結(jié)論與WJMSC相比AMMSC表達更多的細胞因子，這些細胞因子主要為細胞介素，它們可能與細胞的增殖和炎癥反應(yīng)有關(guān)。AMMSC比WJMSC具有更強的抗凋亡能力。

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簡介：分類號R392密級內(nèi)部2年學(xué)位類別科學(xué)學(xué)位囹?qū)I(yè)學(xué)位口學(xué)校代碼10062學(xué)號2011602067學(xué)科門類醫(yī)學(xué)又坪眚斜袁鼉秘纛撇L麓黼簍羹籟翟娃鼙麓黻囂器萋科碩士學(xué)位論文MSTER’SDISSERTATION論文題目ER亞型對MCF7的生物學(xué)特性及其分泌THL／TH2類細胞因子的影響TITLEEFFECTSOFESTROGENRECEPTORSUBUINTSONTHEBIOLOGICALBEHAVIORSANDTHL／TH2TYPECYTOKINESECRETIONOFMCF7一級學(xué)科基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)二級學(xué)科免疫學(xué)論文作者宋娟指導(dǎo)教師鄧為民教授導(dǎo)師組成員李宏釗副教授天津醫(yī)科大學(xué)研究生院二O一四年五月天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要目的以人乳腺癌細胞株MCF7作為親本細胞，采用SIRNA干擾技術(shù)構(gòu)建不同雌激素受體ER亞型ERCT／ERL3的穩(wěn)定表達株，探討不同ER亞型對MCF7的生物學(xué)特征及其分泌THL／TH2類細胞因子的影響。方法本實驗以ERA和E鄧穩(wěn)定表達的人乳腺癌細胞株MCF一7為親本細胞株。以PGENESIL1質(zhì)粒為載體，將針對ERA或ERL3的SIRNA經(jīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染導(dǎo)入MCF7，沉默ERA或ERL3基因，建立不同ER亞型的穩(wěn)定表達株，并命名為M／HKERA“19H／ERL3KGH，陰性對照、M／SIAERAL。W／ERPHIGH及M／SIL3ERAMGH／ERL310W。以此為基礎(chǔ)，做如下實驗1采用WESTERNBLOT技術(shù)檢測細胞的轉(zhuǎn)染效果。2采用MTT法檢測細胞增殖情況。3采用流式細胞術(shù)檢測細胞周期分布情況。4利用二步法IMPCR檢測凋亡抑制基因BCL2、BCLXL和XIAP的表達情況。5采用雙層軟瓊脂集落形成實驗檢測細胞體外成瘤能力。6采用細胞黏附實驗檢測細胞的黏附能力。7采用雙抗體夾心ELISA法檢測IFN，、／和IL4的分泌情況。勿士甲皇日7R1WESTERNBLOT檢測結(jié)果顯示，M／SIA和M／SILL細胞ERA或ERL3的最高干擾效率為777％和683％，而M／HK細胞ER表達水平?jīng)]有變化。說明成功構(gòu)建了ERA／ERP不同表達的人乳腺癌細胞株。2MTT分析結(jié)果顯示，經(jīng)24H、48H培養(yǎng)，M／SIA細胞O550008，060土0008和M／SIL3細胞O580008，0690001的增殖活性與M／HK細胞0560004，063士0002相比無顯著差異胗O05；經(jīng)72H、96H培養(yǎng)，M／SIA細胞071士0098，081士0087的增殖活性與M／HK細胞088士0145，107士0156相比降低PO01，M／SIL3細胞101士0086，123土0124的增殖活性增強P001。