體外RNA干擾抑制REG4基因表達(dá)對(duì)胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響.pdf

1、目的：再生基因4(REG4,Regenerating islet-derived family,member 4)是由17496個(gè)堿基對(duì)構(gòu)成的,包含6個(gè)外顯子和5個(gè)內(nèi)含子,定位于1p12-13.1。其編碼分泌型小蛋白R(shí)egⅣ,又稱為再生蛋白樣蛋白(reg-like protein,RELP)。已有研究表明,REG4在胃癌、結(jié)直腸癌及胰腺癌等多種胃腸道腫瘤中異常表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)的目的是研究體外RNA干擾抑制REG4基因表達(dá)對(duì)胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為

2、的影響。
　　方法：為了進(jìn)一步明確REG4表達(dá)水平與胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為之間的關(guān)系,我們針對(duì)REG4基因設(shè)計(jì)三條小干擾RNA片段（siRNA1、siRNA2、siRNA3）,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染高表達(dá)胃癌細(xì)胞株,獲得了在胃癌細(xì)胞系A(chǔ)GS中沉默REG4表達(dá)的細(xì)胞。系統(tǒng)分析了干擾胃泌素表達(dá)對(duì)細(xì)胞惡性增殖能力、凋亡率以及遷移和侵襲能力的影響。
　　結(jié)果：實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示siRNA2、siRNA3均有干擾效果,尤以siRNA3效果明顯。選用siRNA

3、3干擾AGS細(xì)胞株,MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)干擾REG4基因后,AGS細(xì)胞增殖受到明顯抑制(Ｐ＜0.05)；流式細(xì)胞儀檢測(cè)到干擾REG4基因后AGS細(xì)胞凋亡率明顯增加(Ｐ＜0.05)；劃痕實(shí)驗(yàn)表明干擾REG4的細(xì)胞向劃痕處遷移的速度減慢；Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn)表明干擾REG4的細(xì)胞穿過(guò)基質(zhì)膠的數(shù)量明顯減少(Ｐ＜0.05)。
　　結(jié)論：以上結(jié)果表明,REG4基因能夠促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖能力、抗凋亡能力以及遷移和侵襲能力,而干擾REG