簡(jiǎn)介：細(xì)胞生物學(xué)細(xì)胞生物學(xué)理論課教學(xué)大綱理論課教學(xué)大綱課程代碼課程代碼10271014課程名稱課程名稱細(xì)胞生物學(xué)課程英文名稱課程英文名稱CELLBIOLOGY課程類別課程類別學(xué)科基礎(chǔ)課程課程性質(zhì)課程性質(zhì)必修課授課對(duì)象授課對(duì)象醫(yī)學(xué)試驗(yàn)班（七年制）開(kāi)課學(xué)期開(kāi)課學(xué)期第5學(xué)期學(xué)時(shí)數(shù)學(xué)時(shí)數(shù)60（理論學(xué)時(shí)∕實(shí)驗(yàn)學(xué)時(shí)32∕28）學(xué)分學(xué)分3選用教材選用教材細(xì)胞生物學(xué)楊恬主編人民衛(wèi)生出版社2005年主要參考書(shū)主要參考書(shū)1MOLECULARCELLBIOLOGY5THEDITIONDARNELLJADDISONWESLEYPUBLCO20042ESSENTIALCELLBIOLOGY2NDEDITIONALBERTSBGARLPUBLISHING，INC20043CELLMOLECULARBIOLOGY3RDEDITIONGERALDKARPPUBLISHEDBYJOHNWILEYSONSINC20024醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)湯雪明主編科學(xué)出版社2003年5醫(yī)學(xué)細(xì)胞分子生物學(xué)宋今丹主編人民衛(wèi)生出版社2003年6分子細(xì)胞生物學(xué)韓貽仁主編科學(xué)出版社2002年7細(xì)胞生物學(xué)汪堃仁主編北京師范大學(xué)出版社2003年編寫(xiě)單位編寫(xiě)單位細(xì)胞生物學(xué)系執(zhí)筆人執(zhí)筆人劉睿智鄭賢紅編寫(xiě)日期編寫(xiě)日期2009年6月一、課程教學(xué)目標(biāo)一、課程教學(xué)目標(biāo)細(xì)胞生物學(xué)是一門(mén)新興的邊緣學(xué)科，其內(nèi)容是研究細(xì)胞結(jié)構(gòu)、功能以及各種生命現(xiàn)象的一門(mén)新興學(xué)科，是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的重要基礎(chǔ)性學(xué)科，與臨床醫(yī)學(xué)有密切聯(lián)系，決定了它在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的地位及今后的發(fā)展方向。因此，在醫(yī)學(xué)院校開(kāi)設(shè)細(xì)胞生物學(xué)，不僅使學(xué)生了解現(xiàn)代細(xì)胞生物學(xué)的基本內(nèi)容，掌握細(xì)胞生物學(xué)的基礎(chǔ)知識(shí)，而且還為臨床醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)課打下良好基礎(chǔ)。二、教學(xué)基本要求二、教學(xué)基本要求1、授課方式、授課方式4細(xì)胞外基質(zhì)及其與細(xì)胞的相互作用25細(xì)胞的內(nèi)膜系統(tǒng)36線粒體與細(xì)胞的能量轉(zhuǎn)換17細(xì)胞骨架與細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)28細(xì)胞核49細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)210細(xì)胞分裂與細(xì)胞周期411細(xì)胞分化412細(xì)胞衰老與細(xì)胞死亡213干細(xì)胞2合計(jì)32第一章第一章緒論（論（1學(xué)時(shí)）學(xué)時(shí)）【目的與要求目的與要求】1掌握細(xì)胞、細(xì)胞生物學(xué)的概念。2了解細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容及當(dāng)前細(xì)胞生物學(xué)研究的總趨勢(shì)與重點(diǎn)領(lǐng)域；了解細(xì)胞生物學(xué)的發(fā)展簡(jiǎn)史、與醫(yī)學(xué)的關(guān)系及研究進(jìn)展?！窘虒W(xué)內(nèi)容教學(xué)內(nèi)容】1細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容。2細(xì)胞生物學(xué)的發(fā)展簡(jiǎn)史。3細(xì)胞生物學(xué)的研究進(jìn)展。4細(xì)胞生物學(xué)與醫(yī)學(xué)科學(xué)。

簡(jiǎn)介：高中生物學(xué)教材涉及到的免疫細(xì)胞來(lái)源和作用的例解EDITEDBYMARTZEPINGOCTOBER120081免疫細(xì)胞的來(lái)源免疫細(xì)胞的來(lái)源造血干細(xì)胞造血干細(xì)胞免疫細(xì)胞一般分為淋巴細(xì)胞和吞噬細(xì)胞，它們都來(lái)自造血干細(xì)胞，造血干細(xì)胞是存在于造血組織中的一群原始造血細(xì)胞，一般分為3級(jí)，即多能干細(xì)胞、定向干細(xì)胞及其成熟的子代細(xì)胞。其中多能干細(xì)胞進(jìn)一步分化為淋巴系干細(xì)胞、髓系多能干細(xì)胞。11淋巴細(xì)胞的產(chǎn)生及發(fā)育淋巴系干細(xì)胞進(jìn)入胸腺在胸腺內(nèi)發(fā)育T細(xì)胞淋巴系干細(xì)胞進(jìn)入骨髓在骨髓內(nèi)發(fā)育B細(xì)胞111T細(xì)胞的產(chǎn)生及發(fā)育112B細(xì)胞的產(chǎn)生及發(fā)育例類別功能中性粒細(xì)胞吞噬作用嗜酸性粒細(xì)胞破壞抗原抗體復(fù)合體，參與脫敏反應(yīng)粒細(xì)胞嗜堿性粒細(xì)胞釋放組織胺和抗炎癥因子淋巴細(xì)胞特異免疫中起作用白細(xì)胞無(wú)粒細(xì)胞單核細(xì)胞巨噬作用3高中教材中與免疫有關(guān)的細(xì)胞比較表高中教材中與免疫有關(guān)的細(xì)胞比較表免疫細(xì)胞來(lái)源功能吞噬細(xì)胞造血干細(xì)胞處理呈遞抗原，吞噬抗原抗體復(fù)合體B細(xì)胞在骨髓發(fā)育的造血干細(xì)胞識(shí)別抗原，分化為漿細(xì)胞和記憶細(xì)胞漿細(xì)胞B細(xì)胞或記憶細(xì)胞分泌抗體T細(xì)胞在胸腺中發(fā)育的造血干細(xì)胞識(shí)別呈遞抗原，分化為效應(yīng)T細(xì)胞和記憶細(xì)胞效應(yīng)T細(xì)胞T細(xì)胞或記憶細(xì)胞與靶細(xì)胞結(jié)合發(fā)揮免疫效應(yīng)，分泌淋巴因子記憶細(xì)胞B細(xì)胞或T細(xì)胞識(shí)別抗原，分化為相應(yīng)的效應(yīng)細(xì)胞，發(fā)揮免疫效應(yīng)4拓展提升拓展提升1）T細(xì)胞接受吞噬細(xì)胞處理過(guò)的抗原而增殖分化為效應(yīng)T細(xì)胞。2）B細(xì)胞接受T細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)的抗原或直接受抗原刺激分化為漿細(xì)胞。3）在免疫反應(yīng)中能識(shí)別抗原的細(xì)胞有、、、、。（吞噬細(xì)胞、T細(xì)胞、B細(xì)胞、效應(yīng)T細(xì)胞、記憶細(xì)胞）4）受抗原刺激后的淋巴細(xì)胞（2004年廣西、廣東高考題）A細(xì)胞周期變長(zhǎng)，核糖體活動(dòng)增強(qiáng)B細(xì)胞周期變長(zhǎng)，核糖體活動(dòng)減弱C細(xì)胞周期變短，核糖體活動(dòng)減弱D細(xì)胞周期變短，核糖體活動(dòng)增強(qiáng)5）下列細(xì)胞不可能在淋巴液中出現(xiàn)的是A漿細(xì)胞BT細(xì)胞C紅細(xì)胞D吞噬細(xì)胞6）產(chǎn)生抗體的細(xì)胞是A吞噬細(xì)胞B靶細(xì)胞CT細(xì)胞D漿細(xì)胞7）在特異性免疫中發(fā)揮作用的主要細(xì)胞是A紅細(xì)胞B吞噬細(xì)胞C淋巴細(xì)胞D血小板

簡(jiǎn)介：802細(xì)胞與分子生物學(xué)考試大綱（2014版）細(xì)胞生物學(xué)部分胞生物學(xué)部分1細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容細(xì)胞生物學(xué)的主要研究?jī)?nèi)容，細(xì)胞學(xué)說(shuō)的創(chuàng)立及其內(nèi)容要點(diǎn)和意義，當(dāng)前細(xì)胞生物學(xué)研究的總趨勢(shì)與重點(diǎn)領(lǐng)域。2細(xì)胞的統(tǒng)一性與多樣性細(xì)胞的基本概念、原核細(xì)胞與古核細(xì)胞、真核細(xì)胞以及非細(xì)胞生命體的基本知識(shí)概要。3細(xì)胞生物學(xué)的研究方法細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察方法和相關(guān)儀器的原理和應(yīng)用范圍，細(xì)胞化學(xué)組成及其定位和動(dòng)態(tài)分析技術(shù)的原理和應(yīng)用范圍，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的相關(guān)概念和原理，用于細(xì)胞生物學(xué)研究的模式生物。4細(xì)胞質(zhì)膜生物膜結(jié)構(gòu)模型的基本要點(diǎn)，生物膜的基本組成成分及其特點(diǎn)和意義，生物膜的基本特征與功能，膜骨架的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和研究方法。5物質(zhì)的跨膜運(yùn)輸物質(zhì)的跨膜運(yùn)輸?shù)幕靖拍睢⒅饕绞?、運(yùn)輸?shù)幕具^(guò)程。6細(xì)胞的能量轉(zhuǎn)換線粒體的顯微形態(tài)特征和主要功能，超微結(jié)構(gòu)與功能定位及各部的結(jié)構(gòu)和化學(xué)的組成特點(diǎn)，內(nèi)膜進(jìn)行能量轉(zhuǎn)化氧化磷酸化的分子和超分子結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)與轉(zhuǎn)化機(jī)制，線粒體的半自性，線粒體的增殖和起源。7細(xì)胞內(nèi)膜系統(tǒng)細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)的不同概念和功能。內(nèi)膜系統(tǒng)的概念及其組成成員，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基復(fù)合體的形態(tài)結(jié)構(gòu)、標(biāo)志性酶以及功能。溶酶體與過(guò)氧化物酶體的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，功能。信號(hào)假說(shuō)與蛋白質(zhì)分選信號(hào)。蛋白質(zhì)分選的基本途徑與類型。膜泡運(yùn)輸。8細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞通訊與細(xì)胞識(shí)別的基本知識(shí)和基本概念，信號(hào)傳遞的類型及其作用機(jī)制包括胞內(nèi)受體介導(dǎo)的信號(hào)通路及信號(hào)分子和膜受體介導(dǎo)的信號(hào)通路及信號(hào)分子Ｇ蛋白偶聯(lián)的CAMP特性，細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制，植物細(xì)胞的凋亡，細(xì)胞凋亡與衰老。14細(xì)胞分化與基因表達(dá)調(diào)控細(xì)胞分化的基本概念、干細(xì)胞的基本概念和相關(guān)知識(shí)、癌細(xì)胞的基本特征及腫瘤的發(fā)生等。15細(xì)胞社會(huì)的聯(lián)系細(xì)胞連接、細(xì)胞黏著和細(xì)胞外基質(zhì)，細(xì)胞連接的方式、特點(diǎn)及生物學(xué)意義，細(xì)胞黏著的分子基礎(chǔ)，細(xì)胞外基質(zhì)的基本概念、組成、化學(xué)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和功能。分子生物學(xué)部分分子生物學(xué)部分分子生物學(xué)要求掌握DNA的結(jié)構(gòu)、DNA的復(fù)制、DNA的轉(zhuǎn)錄、蛋白質(zhì)的翻譯、原核生物的基因表達(dá)調(diào)控和真核生物的基因表達(dá)調(diào)控等的基本概念和基本理論，具體包括以下七個(gè)部分。1分子生物學(xué)的定義和研究?jī)?nèi)容要求分子生物學(xué)的定義、分子生物學(xué)研究的主要內(nèi)容、分子生物學(xué)的發(fā)展歷程和當(dāng)今分子生物學(xué)發(fā)展的趨勢(shì)。重點(diǎn)是理解并掌握分子生物學(xué)發(fā)展歷程中重要發(fā)現(xiàn)及其理論意義。2染色體、DNA和基因要求掌握經(jīng)典遺傳學(xué)、染色體、DNA和基因等的基礎(chǔ)知識(shí)，具體包括DNA的高級(jí)結(jié)構(gòu)，理解基因的內(nèi)涵以及染色體、DNA和基因三者之間的關(guān)系，掌握遺傳學(xué)的三大定律、DNA的一級(jí)和二級(jí)結(jié)構(gòu)、DNA的變性、復(fù)性和雜交等基本理論。3DNA的復(fù)制要求掌握DNA復(fù)制的基本特點(diǎn)、復(fù)制過(guò)程、復(fù)制調(diào)控和DNA修復(fù)等的基礎(chǔ)知識(shí)，具體包括DNA復(fù)制的主要方式，真核生物DNA的復(fù)制特點(diǎn)和DNA復(fù)制的調(diào)控，DNA的半保留復(fù)制，DNA的半不連續(xù)復(fù)制等的基本特征，原核生物DNA的復(fù)制過(guò)程和DNA的修復(fù)的基礎(chǔ)知識(shí)。4生物信息的傳遞（上）從DNA到RNA要求掌握轉(zhuǎn)錄的基本過(guò)程、與轉(zhuǎn)錄相關(guān)的酶學(xué)和蛋白質(zhì)、啟動(dòng)子的結(jié)構(gòu)特征、生物MRNA的特征以及終止和抗終止等的基礎(chǔ)知識(shí)，具體包括轉(zhuǎn)錄的基本過(guò)程，轉(zhuǎn)錄過(guò)程中終止和抗終止，I類和Ⅱ類內(nèi)含子的自我拼接等內(nèi)容，原核和真核生物啟動(dòng)子的結(jié)構(gòu)特征、內(nèi)含子與外顯子的內(nèi)涵等基本理論，原核和真核生物啟動(dòng)子的結(jié)構(gòu)特征，與轉(zhuǎn)錄相關(guān)的酶學(xué)和蛋

簡(jiǎn)介：第四節(jié)第四節(jié)單細(xì)胞生物單細(xì)胞生物【學(xué)習(xí)目標(biāo)學(xué)習(xí)目標(biāo)】1、理解單細(xì)胞生物是依靠一個(gè)細(xì)胞完成生命活動(dòng)的。2、通過(guò)對(duì)單細(xì)胞生物生命活動(dòng)的觀察，認(rèn)同細(xì)胞構(gòu)成生物體的觀點(diǎn)；3、了解單細(xì)胞生物和我們?nèi)祟惖年P(guān)系，培養(yǎng)珍惜生命，愛(ài)護(hù)生命的情感?！局攸c(diǎn)和難點(diǎn)重點(diǎn)和難點(diǎn)】重點(diǎn)觀察草履蟲(chóng)的生命活動(dòng)、了解草履蟲(chóng)運(yùn)動(dòng)、呼吸、消化等生理功能。難點(diǎn)利用事實(shí)說(shuō)明對(duì)于單細(xì)胞生物來(lái)說(shuō)，一個(gè)細(xì)胞就是一個(gè)完整獨(dú)立的生物體。【學(xué)習(xí)過(guò)程學(xué)習(xí)過(guò)程】一、課前自主學(xué)習(xí)（閱讀教材一、課前自主學(xué)習(xí)（閱讀教材P6568完成練習(xí)）完成練習(xí)）1、生物圈中有不少肉眼很難看見(jiàn)的生物，它們的身體只有，稱為生物。如、、等2、草履蟲(chóng)的整個(gè)身體就是一個(gè)，草履蟲(chóng)依靠進(jìn)行運(yùn)動(dòng)，食物從進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，在內(nèi)進(jìn)行消化，不能消化的食物殘?jiān)鼜呐懦?。通過(guò)和把體內(nèi)多余的水分和廢物收集起來(lái)，排出體外。（2）草履蟲(chóng)是動(dòng)物還是植物學(xué)習(xí)任務(wù)四學(xué)習(xí)任務(wù)四4、閱讀P68單細(xì)胞生物與人類的關(guān)系總結(jié)單細(xì)胞生物與人類存在哪些關(guān)系三、診斷評(píng)價(jià)三、診斷評(píng)價(jià)1下列生物中屬于單細(xì)胞生物的是A變形蟲(chóng)B大豆C螞蟻D蚯蚓2顯微鏡觀察草履蟲(chóng)時(shí)，經(jīng)常在臨時(shí)裝片的培養(yǎng)液中放一些棉絲，其作用是（）A限制草履蟲(chóng)運(yùn)動(dòng)B增加營(yíng)養(yǎng)C便于計(jì)數(shù)D增加溫度3草履蟲(chóng)的表膜不具有的功能是A保護(hù)B吸收氧氣C排出二氧化碳D消化4用顯微鏡觀察草履蟲(chóng)時(shí)，看到蟲(chóng)體內(nèi)的食物泡是A大小相等，數(shù)量?jī)蓚€(gè)B大小相等，數(shù)量多個(gè)C大小不等，數(shù)量?jī)蓚€(gè)D大小不等數(shù)量多個(gè)5右圖是草履蟲(chóng)結(jié)構(gòu)示意圖，請(qǐng)據(jù)圖回答下列問(wèn)題（1）顯微鏡下草履蟲(chóng)的形狀像一只_____________。（2）圖中的結(jié)構(gòu)____________具有運(yùn)動(dòng)作用，具有呼吸作

簡(jiǎn)介：細(xì)胞生物學(xué)細(xì)胞生物學(xué)理論教學(xué)大綱理論教學(xué)大綱課程代碼課程代碼10271016課程名稱課程名稱細(xì)胞生物學(xué)課程英文名稱課程英文名稱CELLBIOLOGY課程類別課程類別學(xué)科基礎(chǔ)課程課程性質(zhì)課程性質(zhì)必修課授課對(duì)象授課對(duì)象藥學(xué)開(kāi)設(shè)學(xué)期開(kāi)設(shè)學(xué)期第5學(xué)期學(xué)時(shí)數(shù)學(xué)時(shí)數(shù)40（理論學(xué)時(shí)40）學(xué)分?jǐn)?shù)學(xué)分?jǐn)?shù)25選用教材選用教材醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)陳譽(yù)華主編人民衛(wèi)生出版社2008年主要參考書(shū)主要參考書(shū)1MOLECULARCELLBIOLOGY5THEDITIONDARNELLJADDISONWESLEYPUBLCO20042ESSENTIALCELLBIOLOGY2NDEDITIONALBERTSBGARLPUBLISHING，INC20043CELLMOLECULARBIOLOGY3RDEDITIONGERALDKARPPUBLISHEDBYJOHNWILEYSONSINC20024醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)湯雪明主編科學(xué)出版社2003年5醫(yī)學(xué)細(xì)胞分子生物學(xué)宋今丹主編人民衛(wèi)生出版社2003年6分子細(xì)胞生物學(xué)韓貽仁主編科學(xué)出版社2002年7細(xì)胞生物學(xué)汪堃仁主編北京師范大學(xué)出版社2003年8醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)（第三版）宋今丹主編人民衛(wèi)生出版社2004年編寫(xiě)單位編寫(xiě)單位細(xì)胞生物學(xué)系執(zhí)筆人執(zhí)筆人劉睿智鄭賢紅編寫(xiě)日期編寫(xiě)日期2009年6月一、課程教學(xué)目標(biāo)一、課程教學(xué)目標(biāo)細(xì)胞生物學(xué)是一門(mén)新興的邊緣學(xué)科，其內(nèi)容是研究細(xì)胞結(jié)構(gòu)、功能以及各種生命現(xiàn)象的一門(mén)新興學(xué)科，是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的重要基礎(chǔ)性學(xué)科，與臨床醫(yī)學(xué)有密切聯(lián)系，決定了它在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的地位及今后的發(fā)展方向。因此，在醫(yī)學(xué)院校開(kāi)設(shè)細(xì)胞生物學(xué)，不僅使學(xué)生了解現(xiàn)代細(xì)胞生物學(xué)的基本內(nèi)容，掌握細(xì)胞生物學(xué)的基礎(chǔ)知識(shí)，而且還為臨床醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)課打下良好基礎(chǔ)。二、教學(xué)基本要求二、教學(xué)基本要求5細(xì)胞骨架與細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)26細(xì)胞核47細(xì)胞連接與細(xì)胞粘連28細(xì)胞外基質(zhì)及其與細(xì)胞的相互作用29細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)410細(xì)胞分裂與細(xì)胞周期411細(xì)胞分化412細(xì)胞衰老與細(xì)胞死亡413干細(xì)胞2合計(jì)40第一章第一章緒論（論（1學(xué)時(shí)）學(xué)時(shí)）【目的與要求目的與要求】1掌握細(xì)胞、細(xì)胞生物學(xué)的概念。2了解細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容及當(dāng)前細(xì)胞生物學(xué)研究的總趨勢(shì)與重點(diǎn)領(lǐng)域；了解細(xì)胞生物學(xué)的發(fā)展簡(jiǎn)史?！窘虒W(xué)內(nèi)容教學(xué)內(nèi)容】1細(xì)胞生物學(xué)。2細(xì)胞生物學(xué)是醫(yī)學(xué)的重要基礎(chǔ)。3細(xì)胞生物學(xué)發(fā)展經(jīng)歷的幾個(gè)主要階段?！局攸c(diǎn)與難點(diǎn)重點(diǎn)與難點(diǎn)】重點(diǎn)重點(diǎn)細(xì)胞生物學(xué)的概念。難點(diǎn)難點(diǎn)細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容及當(dāng)前細(xì)胞生物學(xué)研究的總趨勢(shì)與重點(diǎn)領(lǐng)域。第二章第二章細(xì)胞的概念與分子基礎(chǔ)（自學(xué)）細(xì)胞的概念與分子基礎(chǔ)（自學(xué)）【目的與要求目的與要求】1掌握原核細(xì)胞與真核細(xì)胞的異同。2了解細(xì)胞進(jìn)化的一般規(guī)律?！咀詫W(xué)內(nèi)容自學(xué)內(nèi)容】

簡(jiǎn)介：細(xì)胞生物學(xué)專業(yè)碩博連讀研究生培養(yǎng)方案一、培養(yǎng)目標(biāo)本專業(yè)培養(yǎng)德、智、體全面發(fā)展的細(xì)胞生物學(xué)與相關(guān)學(xué)科的高級(jí)專門(mén)人才。要求學(xué)生具有堅(jiān)定正確的政治方向，熱愛(ài)祖國(guó)，具有良好的科學(xué)道德與嚴(yán)謹(jǐn)學(xué)風(fēng)，遵紀(jì)守法，具有團(tuán)結(jié)合作、勇于追求真理和獻(xiàn)身于科學(xué)研究及教育事業(yè)的精神；掌握?qǐng)?jiān)實(shí)寬厚的細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ)理論和系統(tǒng)深入的專業(yè)知識(shí)，熟悉本學(xué)科的發(fā)展趨勢(shì)，了解本學(xué)科相關(guān)領(lǐng)域的前沿動(dòng)態(tài)，熟練地掌握科學(xué)研究的基本技能和方法，具有較強(qiáng)的獨(dú)立從事科學(xué)研究的能力，在有關(guān)領(lǐng)域中做出創(chuàng)造性的成果；能熟練地運(yùn)用至少一門(mén)外國(guó)語(yǔ)；具有健康的心理素質(zhì)和體魄。二、研究方向信號(hào)傳導(dǎo)；細(xì)胞免疫；腫瘤生物學(xué)治療；細(xì)胞凋亡；細(xì)胞周期；細(xì)胞分子生物學(xué)；細(xì)胞結(jié)構(gòu)與功能；細(xì)胞工程（生物技術(shù)和細(xì)胞培養(yǎng)）。三、學(xué)習(xí)年限按中山大學(xué)學(xué)位與研究生教育工作手冊(cè)及中山大學(xué)文件中大研院（2003）3號(hào)“中山大學(xué)碩博連讀研究生培養(yǎng)工作試行辦法的規(guī)定執(zhí)行。碩士學(xué)制三年。四、課程設(shè)置類別編號(hào)課程名稱開(kāi)課學(xué)期學(xué)時(shí)學(xué)分任課教師職稱考核方式0000002101第一外國(guó)語(yǔ)FIRSTFEIGNLANGUAGE11205外語(yǔ)學(xué)院考試公共課0000002103馬克思主義理論THEYOFMARXISM1，2724教育學(xué)院考試0710092101細(xì)胞分子生物學(xué)（二）MOLECULARBIOLOGYOFTHECELL1603歐陽(yáng)學(xué)智教授考試基礎(chǔ)課0710102102生化與分子生物學(xué)研究技術(shù)METHODSINBIOCHEMISTRYMOLECULARBIOLOGY3804屈良鵠教授考試0710091102細(xì)胞生物學(xué)專題TOPICSOFCELLBIOLOGY23804各導(dǎo)師考試0710102103細(xì)胞分子生物學(xué)研究技術(shù)METHODSINMOLECULARBIOLOGYOFTHECELL3804歐陽(yáng)學(xué)智教授考試必修課專業(yè)課3300002101生命科學(xué)進(jìn)展ADVANCEINLIFESCIENCE12804徐安龍教授等考試選修課公共課0000002210第二外國(guó)語(yǔ)SECONDFEIGNLANGUAGE3802外語(yǔ)學(xué)院考試0710102212分子生物學(xué)文獻(xiàn)LITERATURESINMOLECULARBIOLOGY1603張尚宏副教授考試0710102222生化與分子生物學(xué)儀器分析PRINCIPLEAPPLICATIONOFINSTRUMENTSINBIOCHEMISTRYMOLECULARBIOLOGY1603周惠教授考試0710092215高級(jí)細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)ADVANCEDEXPERIMENTINCELLBIOLOGY1，2804各導(dǎo)師安排考試0710102227基因工程與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)EXPERIMENTSINGENEENGINEERINGMOLECULARBIOLOGY1，2804周惠教授考試0710211102基因組學(xué)與生物信息學(xué)GENOMICSBIOINFMATICS2804徐安龍教授等考試0710092219胚胎發(fā)育與干細(xì)胞生物學(xué)DEVELOPMENTALBIOLOGYOFEMBRYOSTEMCELL1603劉林教授呂祁峰考試0710092220小鼠胚胎實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)MANIPULATINGTHEMOUSEEMBRYO2603劉林教授呂祁峰考試0710092221MAPK蛋白激酶信號(hào)傳導(dǎo)通路的研究方法RESEARCHMETHODSINMITOGENACTIVATEDPROTEINKINASEMAPKSIGNALINGPATHWAY24603李迎秋教授考試0710092222T淋巴細(xì)胞活化的研究進(jìn)展PROGRESSINRESEARCHOFTCELLACTIVATION23402李迎秋教授考試講座0710092221細(xì)胞與分子生物學(xué)前沿講座SEMINAROFCELLMOLECULARBIOLOGY14402導(dǎo)師組考查0710101204教學(xué)實(shí)踐TEACHINGPRACTICE402導(dǎo)師組考查實(shí)踐課五、考核按中山大學(xué)學(xué)位與研究生教育工作手冊(cè)及中山大學(xué)文件中大研院（2003）3號(hào)“中山大學(xué)碩博連讀研究生培養(yǎng)工作試行辦法的規(guī)定執(zhí)行。六、學(xué)位論文的工作及發(fā)表論文的要求按中山大學(xué)學(xué)位與研究生教育工作手冊(cè)及中山大學(xué)文件中大研院（2003）3號(hào)

簡(jiǎn)介：1細(xì)胞生物學(xué)講義課程學(xué)習(xí)1細(xì)胞概述目錄1細(xì)胞概述11細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)及細(xì)胞學(xué)說(shuō)的創(chuàng)立111細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)112細(xì)胞學(xué)說(shuō)CELLTHEY的創(chuàng)立113細(xì)胞學(xué)理論對(duì)細(xì)胞學(xué)發(fā)展的推動(dòng)作用114細(xì)胞生物學(xué)發(fā)展簡(jiǎn)史12細(xì)胞的基本功能和特性121細(xì)胞的基本功能122細(xì)胞結(jié)構(gòu)上的相似性123細(xì)胞的形態(tài)124細(xì)胞的大小及體積的恒定125細(xì)胞及細(xì)胞器的計(jì)量單位13細(xì)胞的分子基礎(chǔ)131水是細(xì)胞中最主要的物質(zhì)132無(wú)機(jī)鹽133小分子有機(jī)小分子134生物分子的功能分類135細(xì)胞結(jié)構(gòu)體系的組裝14細(xì)胞的類型和結(jié)構(gòu)體系141原核細(xì)胞142真核細(xì)胞的兩種主要類型動(dòng)物細(xì)胞和植物細(xì)胞143真核細(xì)胞的結(jié)構(gòu)體系144真核細(xì)胞與原核細(xì)胞的比較15病毒非細(xì)胞的生命體151病毒是比細(xì)胞更小的生命體152病毒的生活史16細(xì)胞生命的進(jìn)化161細(xì)胞生命的起源與進(jìn)化162真核細(xì)胞的起源163從單細(xì)胞向多細(xì)胞進(jìn)化17我國(guó)細(xì)胞生物學(xué)的發(fā)展戰(zhàn)略171細(xì)胞生物學(xué)的主要研究?jī)?nèi)容和發(fā)展方向172我國(guó)細(xì)胞生物學(xué)發(fā)展戰(zhàn)略學(xué)習(xí)指導(dǎo)課程學(xué)習(xí)1細(xì)胞概述111細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)1細(xì)胞概述所有的生物都是由細(xì)胞CELL構(gòu)成的。除了病毒、類病毒等是非細(xì)胞的生命體以外，其它生命有機(jī)體的結(jié)構(gòu)和功能單位都是細(xì)胞。細(xì)菌、酵母等微生物是以單細(xì)胞的形式存在，而高等動(dòng)、植物則是由多細(xì)胞構(gòu)成的，如人大約有31013個(gè)細(xì)胞，這些細(xì)胞組成不同的組織和器官。研究細(xì)胞及其生物學(xué)功能的科學(xué)稱為細(xì)胞生物學(xué)CELLBIOLOGY。11細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)及細(xì)胞學(xué)說(shuō)的創(chuàng)立第一個(gè)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的是英國(guó)學(xué)者胡克RBERTHOOKE，相隔170多年后，德國(guó)植物學(xué)家施來(lái)登MATHIASSCHLEIDEN和動(dòng)物學(xué)家施旺THEODSCHWANN創(chuàng)立了細(xì)胞學(xué)說(shuō)。111細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)得益于光學(xué)顯微鏡的研制和發(fā)展。第一臺(tái)顯微鏡是荷蘭眼鏡商詹森HANSJANSSEN在1604年發(fā)明的。■1665年，英國(guó)的物理學(xué)家胡克用自己設(shè)計(jì)并制造的顯微鏡觀察櫟樹(shù)軟木塞切片時(shí)發(fā)現(xiàn)其中有許多小室，狀如蜂窩，稱為“CELLA“，這是人類第一次發(fā)現(xiàn)細(xì)胞，不過(guò)，胡克發(fā)現(xiàn)的只是死的細(xì)胞壁圖11。胡克的發(fā)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞學(xué)的建立和發(fā)展具有開(kāi)創(chuàng)性的意義，其后，生物學(xué)家就用“CELL“一詞來(lái)描述生物體的基本結(jié)構(gòu)?！?674年，荷蘭布商列文虎克ANTONVANLEEUWENHOEK為了檢查布的質(zhì)量，親自磨制透鏡，裝配了高倍顯微鏡300倍左右，并觀察到了血細(xì)胞、池塘水滴中的原生動(dòng)物、人類和哺乳類動(dòng)物的精子，這是人類第一次觀察到完整的活細(xì)胞。列文虎克把他的觀察結(jié)果寫(xiě)信報(bào)告給了英國(guó)皇家學(xué)會(huì)，得到英國(guó)皇家學(xué)會(huì)的充分肯定，并很快成為世界知名人士。胡克和列文虎克發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的動(dòng)機(jī)是不同的，你對(duì)此有何感想圖11胡克所用的顯微鏡及觀察的櫟樹(shù)細(xì)胞壁課程學(xué)習(xí)1細(xì)胞概述112細(xì)胞學(xué)說(shuō)CELLTHEY的創(chuàng)立112細(xì)胞學(xué)說(shuō)CELLTHEY的創(chuàng)立■1838年，德國(guó)植物學(xué)家施來(lái)登MATHIASSCHLEIDEN提出盡管植物的不同組織在結(jié)構(gòu)上有著很大的差異，但是植物是由細(xì)胞構(gòu)成的，植物的胚是由單個(gè)細(xì)胞產(chǎn)生的。■1839年，德國(guó)動(dòng)物學(xué)家施旺THEODSCHWANN提出了細(xì)胞學(xué)說(shuō)的兩條最重要的基本原理∶①地球上的生物都是由細(xì)胞構(gòu)成的②所有的生活細(xì)胞在結(jié)構(gòu)上都是類似的。■1855年，德國(guó)醫(yī)生和病理學(xué)家魏爾肖RUDOLFVIRCHOW補(bǔ)充了細(xì)胞學(xué)說(shuō)的第三條原理所有的細(xì)胞都是來(lái)自于已有細(xì)胞的分裂，即細(xì)胞來(lái)自于細(xì)胞。細(xì)胞學(xué)說(shuō)的創(chuàng)立大大推進(jìn)了人類對(duì)生命自然界的認(rèn)識(shí)，有力地促進(jìn)了生命科學(xué)的進(jìn)步。恩格斯對(duì)細(xì)胞學(xué)說(shuō)給予極高的評(píng)價(jià)，把它與進(jìn)化論和能量守恒定律并列為19世紀(jì)的三大發(fā)明。為什么恩格斯對(duì)細(xì)胞學(xué)說(shuō)給予與此高的評(píng)價(jià)課程學(xué)習(xí)1細(xì)胞概述113細(xì)胞學(xué)理論對(duì)細(xì)胞學(xué)發(fā)展的推動(dòng)作用113細(xì)胞學(xué)理論對(duì)細(xì)胞學(xué)發(fā)展的推動(dòng)作用細(xì)胞科學(xué)是實(shí)驗(yàn)科學(xué)，而實(shí)驗(yàn)科學(xué)的發(fā)展既依賴于實(shí)3主要載體。為了保證遺傳信息的準(zhǔn)確傳遞，RNA被保留下來(lái)，專司遺傳信息的轉(zhuǎn)錄和指導(dǎo)蛋白質(zhì)的合成。所以，無(wú)論是原核生物還是真核生物都具有DNA和RNA。不過(guò)，少數(shù)原始生命形式的病毒，仍然保留RNA作為遺傳信息的載體。■細(xì)胞都具有核糖體所有類型的細(xì)胞，包括最簡(jiǎn)單的支原體都含有核糖體。真核細(xì)胞和原核細(xì)胞的核糖體不僅功能相同，在結(jié)構(gòu)上也十分相似，都是由大小兩個(gè)亞基組成的，只不過(guò)原核細(xì)胞的核糖體比真核細(xì)胞的核糖體稍小一些。課程學(xué)習(xí)1細(xì)胞概述123細(xì)胞的形態(tài)123細(xì)胞的形態(tài)細(xì)胞具有多種多樣的形態(tài)圖12，有球形、桿狀、星形、多角形、梭形、圓柱形等。多細(xì)胞生物體，依照細(xì)胞在各種組織和器官中所承擔(dān)的不同功能，分化形成了各種不同的形狀。這些不同的形狀一方面取決于對(duì)功能的適應(yīng)，另一方面亦受細(xì)胞的表面張力、胞質(zhì)的粘滯性、細(xì)胞膜的堅(jiān)韌程度，以及微管和微絲骨架等因素的影響。圖12不同的細(xì)胞形態(tài)舉例說(shuō)明細(xì)胞的形態(tài)與功能是相關(guān)的。課程學(xué)習(xí)1細(xì)胞概述124細(xì)胞的大小及體積的恒定124細(xì)胞的大小及體積的恒定細(xì)胞最為典型的特點(diǎn)是在一個(gè)極小的體積中形成極為復(fù)雜而又高度組織化的結(jié)構(gòu)。典型的原核細(xì)胞的平均大小在1～10ΜM之間，而真核細(xì)胞的直徑平均為3～30ΜM，一般為10～20ΜM圖13。圖13典型的原核、真核、病毒和分子的大小■細(xì)胞體積的守恒定律不同細(xì)胞的大小變化很大，如人的卵細(xì)胞的直徑只有01MM，而鴕鳥(niǎo)的卵細(xì)胞的直徑則有5CM。但是，同類型細(xì)胞的體積一般是相近的，不依生物個(gè)體的大小而增大或縮小。如人、牛、馬、鼠、象的腎細(xì)胞、肝細(xì)胞的大小基本相同。因此，器官的大小主要決定于細(xì)胞的數(shù)量，與細(xì)胞的數(shù)量成正比，而與細(xì)胞的大小無(wú)關(guān)，把這種現(xiàn)象稱之為“細(xì)胞體積的守恒定律“?！鱿拗萍?xì)胞體積大小的因素●體積同表面積的關(guān)系以球形細(xì)胞為例體內(nèi)的細(xì)胞并非都是球形，計(jì)算體積同表面積的關(guān)系圖14。結(jié)果表明，球形細(xì)胞增大，其體積增加的比例要比表面積增加得多。這樣，當(dāng)細(xì)胞增大到一定程度時(shí)，質(zhì)膜的表面積就不適應(yīng)細(xì)胞進(jìn)行內(nèi)外物質(zhì)的交換，細(xì)胞為了維持一個(gè)最佳的生存條件，必需維持最佳的表面積，從而限制了體積的無(wú)限增大。圖14細(xì)胞體積與表面積間的關(guān)系●細(xì)胞內(nèi)關(guān)鍵分子的濃度一些重要的分子在細(xì)胞內(nèi)的拷貝數(shù)是很少的，當(dāng)細(xì)胞體積增大時(shí)，這些分子的濃度就越來(lái)越稀釋，一些重要的生化反應(yīng)需要一定的濃度才能進(jìn)行，所以細(xì)胞內(nèi)分子濃度就成了限制細(xì)胞體積無(wú)限增大的另一個(gè)因素。真核細(xì)胞的體積一般是原核細(xì)胞的1000倍，真核細(xì)胞如何解決細(xì)胞內(nèi)重要分子的濃度問(wèn)題●酶蛋白質(zhì)種類的限制細(xì)胞不僅對(duì)體積的增大有限制，而且對(duì)體積的減少也有限制。一個(gè)生活細(xì)胞要維持正常的獨(dú)立生活功能，最低限度需要500～1000種不同類型的酶和蛋白質(zhì)，這是目前在支原體MYCOPLASMA中所發(fā)現(xiàn)的酶和蛋白質(zhì)的量。而支原體是目前所知最小原核細(xì)胞，很顯然，細(xì)胞體積最小化受制于維持細(xì)胞生命活動(dòng)所需的酶和蛋白質(zhì)種類的最低限度。課程學(xué)習(xí)1細(xì)胞概述125細(xì)胞及細(xì)胞器的計(jì)量單位125細(xì)胞及細(xì)胞器的計(jì)量單位有兩種計(jì)量細(xì)胞大小的單位，微米ΜM和納米NM。1ΜM等于106M，1NM等于109M。使用電子顯微鏡后又提出埃ANGSTROM，為超顯微結(jié)構(gòu)的計(jì)量單位，1埃01納米，但并不常用。較大的細(xì)胞器通常用ΜM表示，如細(xì)胞核的直徑大約是510ΜM，而線粒體的長(zhǎng)度大約是2ΜM。DNA的寬度為2NM圖15。圖15幾種細(xì)胞結(jié)構(gòu)的大小課程學(xué)習(xí)1細(xì)胞概述131水是細(xì)胞中最主要的物質(zhì)13細(xì)胞的分子基礎(chǔ)生命是物質(zhì)的，所有的細(xì)胞都是由水、蛋白質(zhì)、糖類、脂類、核酸、鹽類和各種微量的有機(jī)化合物所組成表11。蛋白質(zhì)、糖類、核酸和脂類等化合物也被稱為生物分子BIOMOLECULES。表11細(xì)菌細(xì)胞的化學(xué)組成化學(xué)成份占細(xì)胞的重量每種分子的類型數(shù)水701無(wú)機(jī)離子120糖及其前體1250氨基酸和前體04100核苷和前體4100脂肪酸和前體150其他的小分子02～300大分子蛋白質(zhì)、核酸和多糖26～3000131水是細(xì)胞中最主要的成份生命來(lái)自于水，細(xì)胞中水的含量最高，通常占細(xì)胞總量70～80圖16。細(xì)胞中的所有反應(yīng)都是在水中進(jìn)行的，所以水是細(xì)胞生命的活動(dòng)介質(zhì)。圖16細(xì)胞中各主要成份的相對(duì)含量相鄰水分子間的關(guān)系是靠氫鍵維系的（圖17）。相鄰水分子間的關(guān)系是靠氫鍵維系的圖17，這種

簡(jiǎn)介：1醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)專業(yè)攻讀碩士學(xué)位研究生培養(yǎng)方案醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)專業(yè)攻讀碩士學(xué)位研究生培養(yǎng)方案（專業(yè)代碼071009）一、培養(yǎng)目標(biāo)一、培養(yǎng)目標(biāo)1、培養(yǎng)德智體全面發(fā)展，在本專業(yè)具有堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)和系統(tǒng)的專業(yè)知識(shí)，熟悉科學(xué)研究的基本環(huán)節(jié)，能夠從事本專業(yè)教學(xué)和科學(xué)研究的高層次專門(mén)人才，并為進(jìn)一步深造打下基礎(chǔ)。2、具有嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)態(tài)度和敬業(yè)精神；注重知識(shí)、能力和綜合素質(zhì)的培養(yǎng)。3、掌握一門(mén)外語(yǔ)，有較強(qiáng)的聽(tīng)說(shuō)讀寫(xiě)能力并能熟練地閱讀本專業(yè)的外文資料。4、身心健康。二、研究方向二、研究方向1、脂肪細(xì)胞生長(zhǎng)與分化2、脂肪細(xì)胞的信號(hào)傳導(dǎo)與Ⅱ型糖尿病、肥胖癥的發(fā)病機(jī)制研究3、細(xì)胞周期有絲分裂的調(diào)控機(jī)制4、干細(xì)胞生物學(xué)與細(xì)胞的損傷和保護(hù)5、細(xì)胞神經(jīng)生物學(xué)以細(xì)胞體外培養(yǎng)為基本手段，從細(xì)胞的整體、超微結(jié)構(gòu)和分子水平來(lái)研究細(xì)胞的發(fā)育、分化、衰老、死亡及其與疾病的關(guān)系。探索前脂肪細(xì)胞生長(zhǎng)分化的分子機(jī)制，尋找與Ⅱ型糖尿病及肥胖癥相關(guān)聯(lián)的基因；以體外培養(yǎng)的人腫瘤細(xì)胞、正常細(xì)胞系為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，研究?xì)胞生長(zhǎng)、分裂周期及死亡調(diào)控的分子機(jī)制，探討腫瘤發(fā)生、發(fā)展機(jī)制及潛在的新型治療方法；神經(jīng)干細(xì)胞、造血干細(xì)胞的分化及細(xì)胞的損傷與保護(hù)。三、學(xué)制與學(xué)習(xí)年限三、學(xué)制與學(xué)習(xí)年限全日制碩士研究生的學(xué)制為3年。四、培養(yǎng)方式四、培養(yǎng)方式碩士研究生培養(yǎng)施行導(dǎo)師負(fù)責(zé)制，提倡實(shí)行導(dǎo)師負(fù)責(zé)和導(dǎo)師組指導(dǎo)相結(jié)合，導(dǎo)師組由本專業(yè)及相關(guān)專業(yè)35名具有講師以上職稱人員組成。鼓勵(lì)“三種經(jīng)歷”，即社會(huì)實(shí)踐經(jīng)歷、第二校園經(jīng)歷和海外經(jīng)歷。研究生在第二校園經(jīng)歷和海外經(jīng)歷中取得的學(xué)分，與培養(yǎng)計(jì)劃內(nèi)必修課內(nèi)容及要求基本相同的，經(jīng)導(dǎo)師認(rèn)定后，提交醫(yī)學(xué)院學(xué)位分委員會(huì)討論認(rèn)定，可以作為必修課成績(jī)，取得相應(yīng)學(xué)分，培養(yǎng)計(jì)劃以外的課程可作為選修課學(xué)分認(rèn)定。五、課程學(xué)習(xí)要求五、課程學(xué)習(xí)要求應(yīng)修總學(xué)分不少于30學(xué)分，其中必修不少于18分，選修不少于10分。學(xué)習(xí)時(shí)間由3健康狀況等?？己撕细裾哌M(jìn)入碩士論文研究與寫(xiě)作階段；考核不合格者，按學(xué)校有關(guān)規(guī)定處理。七、科學(xué)研究與學(xué)位論文七、科學(xué)研究與學(xué)位論文11科研時(shí)間科研時(shí)間碩士研究生從事科學(xué)研究或?qū)W位論文工作的時(shí)間不少于一年半。2、開(kāi)題報(bào)告、開(kāi)題報(bào)告開(kāi)題時(shí)間為第二學(xué)期。開(kāi)題前必須完成對(duì)不少于30篇相關(guān)文獻(xiàn)的綜述，由導(dǎo)師組3位及以上成員進(jìn)行審核，并給出評(píng)定、備案。開(kāi)題報(bào)告必須在本學(xué)科或相關(guān)學(xué)科范圍內(nèi)公開(kāi)進(jìn)行，由學(xué)科負(fù)責(zé)人或?qū)煟ㄖ笇?dǎo)小組負(fù)責(zé)人）組織3～5名相關(guān)學(xué)科專家對(duì)開(kāi)題報(bào)告進(jìn)行評(píng)議。開(kāi)題報(bào)告內(nèi)容包括選題的目的、依據(jù)，目前國(guó)內(nèi)外進(jìn)展的狀況，研究的基本內(nèi)容，采用的方法與手段，預(yù)期達(dá)到的水平，科研的條件，可能出現(xiàn)的問(wèn)題及解決的方法，進(jìn)度安排，與本課題有關(guān)的工作積累、已有的研究工作成績(jī)；經(jīng)費(fèi)預(yù)算等。開(kāi)題委員會(huì)專家對(duì)上述匯報(bào)給予評(píng)議，開(kāi)題報(bào)告要求有文字記錄備案。3、中期檢查、中期檢查研究生在開(kāi)題后的論文研究階段，必須向?qū)熃M（含相關(guān)專家）進(jìn)行至少2次以上論文中期報(bào)告，考核組在審核原始資料和聽(tīng)取匯報(bào)的基礎(chǔ)上給出評(píng)價(jià)，并對(duì)今后工作給予指導(dǎo)。中期檢查要求有文字記錄備案。4、預(yù)答辯、預(yù)答辯在提交學(xué)位論文答辯申請(qǐng)前1個(gè)月，由學(xué)院學(xué)位評(píng)定分委員會(huì)組織進(jìn)行公開(kāi)預(yù)答辯。預(yù)答辯委員會(huì)成員對(duì)碩士學(xué)位論文進(jìn)行嚴(yán)格、認(rèn)真的審查，詳細(xì)指出論文中存在的不足和問(wèn)題，提出改進(jìn)意見(jiàn)。預(yù)答辯所有要求（包括程序、時(shí)間）與正式答辯相同，有關(guān)預(yù)答辯工作按研究生院相關(guān)規(guī)定執(zhí)行。5、學(xué)術(shù)論文發(fā)表要求、學(xué)術(shù)論文發(fā)表要求碩士生在讀期間須作為第一作者（山東大學(xué)為第一作者單位）在核心A類刊物上發(fā)表學(xué)位論文研究相關(guān)論著（文章已被接受發(fā)表或清樣；文獻(xiàn)綜述和摘要等不計(jì)在內(nèi)）1篇及以上；或作為共同作者之一發(fā)表SCI論文1篇（學(xué)位申請(qǐng)者與論文第一作者為同一導(dǎo)師學(xué)生，且第一作者及申請(qǐng)學(xué)位研究生所在單位為山東大學(xué)，不含綜述），且完成獨(dú)立的學(xué)位論文（必須有獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，學(xué)位論文不得與他人重復(fù)），學(xué)位論文必須進(jìn)行匿名外審（2份），通過(guò)后可申請(qǐng)學(xué)位。提前畢業(yè)要求提前畢業(yè)要求碩士研究生以第一作者（山東大學(xué)為第一作者單位）在SCI收錄期刊上發(fā)表與學(xué)位

簡(jiǎn)介：DAPT及阿霉素對(duì)人乳腺癌MDAMB231細(xì)胞生物學(xué)活性的影響李志路，汪誠(chéng)，楊亭，陳宸，劉勝春400016重慶，重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院內(nèi)分泌乳腺外科［摘要］目的探討Γ分泌酶抑制劑DAPT及阿霉素對(duì)人乳腺癌MDAMB231細(xì)胞增殖、周期、凋亡的影響。方法常規(guī)培養(yǎng)MDAMB231細(xì)胞至對(duì)數(shù)期，隨機(jī)分為對(duì)照組、DAPT組、阿霉素組及聯(lián)合用藥組。藥物處理24H后，CCK8法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期分布和凋亡率，WESTERNBLOT檢測(cè)NOTCH1，CYCLIND1，PTEN和BAX蛋白的變化。結(jié)果DAPT對(duì)MDAMB231細(xì)胞的抑制呈劑量依賴性。與DAPT組或阿霉素組比較，聯(lián)合用藥組抑制作用更強(qiáng)，G1期和凋亡細(xì)胞比例更多P005，伴有NOTCH1和周期蛋白CYCLIND1表達(dá)下降，抑癌基因PTEN和促凋亡蛋白BAX表達(dá)上調(diào)P005。結(jié)論DAPT與阿霉素協(xié)同抑制人乳腺M(fèi)DAMB231細(xì)胞增殖，促進(jìn)細(xì)胞凋亡。［關(guān)鍵詞］DAPT；阿霉素；MDAMB231［中圖法分類號(hào)］R3943R7379R73023［文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼］ADAPTENHANCESSENSITIVITYOFMDAMB231CELLSTODOXUBICINLIZHILUWANGCHENGYANGTINGCHENCHENDEPARTMENTOFENDOCRINETHEFIRSTAFFILIATEDHOSPITALOFCHONGQINGMEDICALUNIVERSITYCHONGQING400016CHINA［ABSTRACT］OBJECTIVETODETERMINEDTHEEFFECTOFDAPTDOXUBICINONCELLVIABILITYCELLCYCLEAPOPTOSISOFHUMANTRIPLENEGATIVEBREASTCANCERMDAMB231CELLSMETHODSMDAMB231CELLSWERETREATEDWITHDAPTDOXUBICINCOMBINATIONOFBOTHTHEEFFECTOFDAPTDOXUBICINONCELLPROLIFERATIONINVITROWASTESTEDBYCCK8ASSAY24HLATERTHECELLAPOPTOSISCELLCYCLEWASDETECTEDBYFLOWCYTOMETRYTHEEXPRESSIONOFNOTCH1BAXCYCLIND1PTENPROTEINWASDETECTEDBYWESTERNBLOTRESULTSMDAMB231CELLSEXHIBITEDGREATERGROWTHINHIBITIONAPOPTOSISWITHCOMBINATIONTHERAPYTHANSINGLEAGENTDAPTFACSVANTAGESE購(gòu)自BD公司。12實(shí)驗(yàn)方法121MDAMB231細(xì)胞培養(yǎng)及藥物處理MDAMB231在含有10胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液中，放置于37C、含5CO2培養(yǎng)箱中。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的MDAMB231細(xì)胞，接種于96孔培養(yǎng)板上。DMSO溶解DAPT，對(duì)照組加入等體積DMSO，DAPT組加入10ΜMDAPT，阿霉素組加入10ΜGL阿霉素，聯(lián)合用藥組加入兩種藥物，DAPT先于阿霉素1H加入細(xì)胞中。培養(yǎng)液中DMSO終濃度小于01。每組設(shè)5個(gè)復(fù)孔，培養(yǎng)24H。每孔加入10ΜLCCK8溶液，2H后用酶標(biāo)儀檢測(cè)450NM處的吸光度A，細(xì)胞活性用藥組A值對(duì)照組A值100，加藥過(guò)程中避光操作。122流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期分布取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期MDAMB231細(xì)胞，接種于6孔培養(yǎng)板上，分組加藥方法同上。025胰酶消化細(xì)胞，PBS漂洗3次，75冰乙醇固定過(guò)夜，1000RMIN離心5MIN，棄乙醇，PBS漂洗3次，調(diào)整細(xì)胞濃度5105ML，加入1MLPI染液，4C孵育60MIN流式細(xì)胞儀檢測(cè)。123流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡細(xì)胞分組加藥同上，整細(xì)胞濃度5105ML，入5ΜLFITC標(biāo)記的ANNEXINV，30MIN后加入500ΜLBUFFER，混勻室溫避光反應(yīng)30MIN，流式細(xì)胞儀檢測(cè)。124細(xì)胞總蛋白提取細(xì)胞分組加藥同上，收集細(xì)胞沉淀。加入150250ΜL含有蛋白酶抑制劑COCKTAIL和PMSF的RIPA裂解液，吹打混勻，直至充分裂解，在12000G離心10MIN，吸取上清液。BCA法測(cè)定蛋白濃度，于80C保存?zhèn)溆?，所有操作均在冰上進(jìn)行。125WESTERNBLOT檢測(cè)細(xì)胞蛋白30ΜG蛋白加入上樣緩沖液100C煮沸10MIN，先以90V恒壓在5SDSPAGE濃縮膠中電泳，樣品進(jìn)入10SDSPAGE分離膠后再改為120V，至溴酚藍(lán)染料泳動(dòng)至距膠下緣1CM停止電泳。300MA恒流轉(zhuǎn)膜90MIN。將PVDF膜浸入5脫脂奶粉中封閉1H。加入11000一抗放置在脫色搖床上4C孵育過(guò)夜。洗膜后加入12000二抗，室溫孵育1H，洗膜后避光滴入超敏ECL化學(xué)發(fā)光液，室溫反應(yīng)2MIN后顯影。ΒACTIN作為內(nèi)參。13統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

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簡(jiǎn)介：水分,,生物體內(nèi)的水分含量,通常占生物體重量的50～90％成年人體內(nèi)水分含量58～67％；人體中水分含量隨年齡增大而減少；在體內(nèi)分布亦不均衡。植物體內(nèi)水分含量與分布也因植物種類、部位、發(fā)育狀況而異，變化很大,人體內(nèi)水的分布,含水量隨年齡、性別不同而有差異新生兒75～80％；成年男子60％；成年女子50～55％；老年人40～50％各組織器官的含水量（％）,飲料中所含成分（100G可食部計(jì)）,蔬菜、水果中的含水量（100G可食部計(jì)）,本章主要內(nèi)容,水和冰的物理特性及其在食品中的應(yīng)用水和冰的結(jié)構(gòu)水與溶質(zhì)的相互作用及水分的存在狀態(tài)水分活度與水分的吸著等溫線水分活度與食品穩(wěn)定性冰在食品穩(wěn)定中的作用,水與冰的物理特性,水的熔點(diǎn)、沸點(diǎn)較高介電常數(shù)、表面張力、熱容和相變熱高黏度低、密度與溫度密切相關(guān)水結(jié)冰時(shí)體積增加，表現(xiàn)出異常的膨脹特性導(dǎo)熱性通常用導(dǎo)熱率和熱擴(kuò)散系數(shù)表示；冰的導(dǎo)熱性優(yōu)于水,水的物理性質(zhì)在食品加工中的作用,水分子極性大，分子小，能使許多食品成分分子表面帶有水膜水是食品加工中優(yōu)良的熱介質(zhì)水的沸點(diǎn)高，且沸點(diǎn)隨壓力而變水的熱容大，載熱能力強(qiáng)（尤其水蒸氣）水的溶解能力強(qiáng),水分子的結(jié)構(gòu),,水分子的締合,水分子的締合,,水分子的締合,水締合體的氫鍵結(jié)合程度受多重因素影響其中重要的是溫度和其它溶質(zhì)的影響。溫度決定分子間距離配位數(shù),水和冰的結(jié)構(gòu),,冰的結(jié)構(gòu),,水和冰的結(jié)構(gòu),液態(tài)水的結(jié)構(gòu)和冰的結(jié)構(gòu)的區(qū)別在于它們的配位數(shù)和兩個(gè)水分子間的距離。水與冰結(jié)構(gòu)中水分子之間的配位數(shù)和距離,水與溶質(zhì)的相互作用,水與溶質(zhì)的相互作用水與離子和離子基團(tuán)的相互作用水與具有氫鍵鍵合能力的中性基團(tuán)的相互作用水與非極性物質(zhì)的相互作用食品中水分的存在狀態(tài),,水與離子和離子基團(tuán)的相互作用,離子或離子基團(tuán)通過(guò)自身的電荷與水分子偶極產(chǎn)生相互作用，稱為離子的水合作用。水合使離子轉(zhuǎn)變?yōu)樗想x子，離子的性質(zhì)就發(fā)生了一定變化。,水與離子和離子基團(tuán)的相互作用,水分子同NA的水和作用能約8368KJMOL1，是水分子之間氫鍵結(jié)合能的4倍。,水與離子和離子基團(tuán)的相互作用,離子結(jié)構(gòu)半徑大、電場(chǎng)強(qiáng)度弱的離子→與水作用力較弱→水化膜較薄半徑小、電場(chǎng)強(qiáng)度強(qiáng)的離子→與水作用力較強(qiáng)→水化膜較厚,水分子結(jié)構(gòu)半徑大、電場(chǎng)強(qiáng)度弱的離子→與水作用力較弱→破壞水的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)半徑小、電場(chǎng)強(qiáng)度強(qiáng)的離子→與水作用力較強(qiáng)→使水的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)更趨緊密,水與具有氫鍵鍵合能力的基團(tuán)的相互作用,水與溶質(zhì)之間的氫鍵鍵合比水與離子之間的相互作用弱，與水分子間的氫鍵相近。當(dāng)體系中添加具有氫鍵鍵合能力的溶質(zhì)時(shí)，每摩爾溶液中的氫鍵總數(shù)不會(huì)明顯的改變。如果與溶質(zhì)形成的氫鍵部位的分布和定向在幾何上與正常水的氫鍵部位是不相容的，具有結(jié)構(gòu)破壞效應(yīng)。,水與具有氫鍵鍵合能力的基團(tuán)的相互作用,生物大分子中有許多可與水分子形成氫鍵的基團(tuán)，水分子介入形成的氫鍵對(duì)生物大分子的結(jié)構(gòu)與功能及食品功能性都有重要的影響。在生物大分子的兩個(gè)部位或兩個(gè)大分子之間可形成有幾個(gè)水分子所構(gòu)成的“水橋”。,大分子中存在的“水橋”,,水與非極性基團(tuán)的相互作用,非極性基團(tuán)的物質(zhì)疏水物質(zhì)疏水基團(tuán)與鄰近的水分子僅產(chǎn)生微弱的相互作用相互排斥，鄰近疏水基團(tuán)的水比純水的結(jié)構(gòu)更為有序疏水水合作用。疏水水合產(chǎn)生兩個(gè)結(jié)果籠形水合物蛋白質(zhì)中的疏水相互作用,水與非極性物質(zhì)的相互作用,非極性物質(zhì)能和水形成籠形水合物水是這類化合物的“宿主”，它們靠氫鍵鍵合形成象籠一樣的結(jié)構(gòu)，通過(guò)物理方式將非極性物質(zhì)截留在籠中，被截留的物質(zhì)稱為“客體”。為使疏水水合這種作用的熱力學(xué)不利變化降到最小，疏水基團(tuán)盡可能相互聚集，使其同水分子接觸的機(jī)會(huì)降至最低限度疏水相互作用。,疏水水合作用的結(jié)果是促進(jìn)了非極性物質(zhì)之間的締合，從而減少水與非極物質(zhì)的界面面積，這是一個(gè)熱力學(xué)上有利的過(guò)程（△G0），此過(guò)程稱為疏水相互作用,,疏水相互作用示意圖,（A）,（B）,,B,A,疏水水合,疏水相互作用,疏水相互作用是蛋白質(zhì)折疊的主要驅(qū)動(dòng)力,,水與溶質(zhì)的相互作用,水溶質(zhì)的相互作用分類,食品中不同狀態(tài)水的性質(zhì)比較,食品中水分的存在狀態(tài),,,食品中水分的存在狀態(tài),,食品中水的存在形式,結(jié)合水一般包括化合水、鄰近水及幾乎全部多層水?；纤ńM成水、構(gòu)成水）與非水物質(zhì)結(jié)合最強(qiáng)的，并作為非水組份整體部分的水。鄰近水與非水組分的特異親水位置通過(guò)水－離子和水－偶極間的締合產(chǎn)生強(qiáng)烈的相互作用的水。多層水在鄰近水外層通過(guò)水－水和水－溶質(zhì)間的氫鍵與非水組份緊密結(jié)合的水。,食品中水的存在形式,游離水（體相水）占據(jù)著與非水組份相距很遠(yuǎn)位置的水；它們具有與稀溶液中的水相似的性質(zhì)。持水力（持水容量）通常用來(lái)描述分子（一般是指低濃度存在的大分子化合物）構(gòu)成的基體通過(guò)物理方式截留大量水，阻止水滲出的能力。持水力的變化對(duì)食品品質(zhì)影響極大,食品中水的存在形式,水分活度,水分活度的定義AW＝F／FO≈P/PO≈ERH/100水分活度是樣品固有的一種性質(zhì)；平衡相對(duì)濕度（ERH）是空氣與樣品中的水蒸汽達(dá)到平衡時(shí)大氣所具有的一種特性。水分活度隨溫度而變。一般溫度每變化10℃，AW變化003～02。水分活度與產(chǎn)品的種類（食品中的組分）有關(guān)。,水分活度與食品水分含量的關(guān)系,食品中水分活度與食品水分含量是兩個(gè)不同的概念。,AW07時(shí)若干食品中的含水量（G水/G干物質(zhì)）,水分活度,高于和低于凍結(jié)溫度的水活性的三個(gè)重要區(qū)別凍結(jié)溫度以上，AW是樣品組分和溫度的函數(shù)，前者是主要的因素；但在凍結(jié)溫度以下時(shí)，AW與樣品中的組分無(wú)關(guān)，只取決于溫度。凍結(jié)溫度以上和凍結(jié)溫度以下水分活度對(duì)食品穩(wěn)定性的影響是不同的。低于凍結(jié)溫度時(shí)的AW不能用來(lái)預(yù)測(cè)凍結(jié)溫度以上的同一食品的AW。,水分活度,水分活度的測(cè)定方法水分活度儀測(cè)定恒定相對(duì)濕度平衡室法化學(xué)法相對(duì)濕度傳感器測(cè)定法冰點(diǎn)測(cè)定法,水分吸著等溫線,水分吸著等溫線又稱水分吸附等溫線，指在恒定溫度下，食品水分含量（用每單位干物質(zhì)質(zhì)量中水的質(zhì)量表示）與水分活度的關(guān)系曲線圖，簡(jiǎn)稱MSI。,水分吸著等溫線,吸附等溫線的分區(qū),等溫線區(qū)Ⅰ中的水食品中吸附最牢固和最不容易移動(dòng)的水，靠水－離子或水－偶極相互作用吸附在極性部位。在區(qū)間Ⅰ的高水分末端位置的水相當(dāng)于食品的“BET單分子層”水含量，它相當(dāng)于與干物質(zhì)牢固結(jié)合的最大數(shù)量的水。,等溫線區(qū)Ⅱ中的水多分子層水，主要靠水－水和水－溶質(zhì)的氫鍵鍵合作用與鄰近的分子締合。向含有相當(dāng)于區(qū)間Ⅰ和區(qū)間Ⅱ邊界位置水含量的食品中增加水，所增加的水將會(huì)使溶解過(guò)程開(kāi)始，并且具有增塑劑和促進(jìn)基質(zhì)溶脹的作用。由于溶解作用的開(kāi)始，引起體系中反應(yīng)物移動(dòng)，使大多數(shù)反應(yīng)的速率加快。,吸附等溫線的分區(qū),吸附等溫線的分區(qū),等溫線區(qū)Ⅲ中的水是食品中結(jié)合最不牢固和最容易流動(dòng)的水，即游離水。在凝膠和細(xì)胞體系中，因?yàn)轶w相水以物理方式被截留，所以宏觀流動(dòng)性受到阻礙，但它與稀鹽溶液中水的性質(zhì)相似；這部分水既可以結(jié)冰也可以作為溶劑，并且還有利于化學(xué)反應(yīng)的進(jìn)行和微生物的生長(zhǎng)。,,水分吸著等溫線與溫度的關(guān)系一定的水分含量時(shí)，水活性隨溫度的上升而增大。,,滯后現(xiàn)象采用向干燥樣品中添加水（回吸作用）的方法繪制水分吸著等溫線和按除去水（解吸）過(guò)程繪制的等溫線并不重疊，這種不重疊性稱為滯后現(xiàn)象。,,滯后作用的大小、曲線的形狀和滯后回線的起始點(diǎn)和終止點(diǎn)都不相同，它們?nèi)Q于食品的性質(zhì)和食品除去或添加水份時(shí)所發(fā)生的物理變化，以及溫度、解吸速率和解吸時(shí)的脫水程度等多種因素。,水分活度與食品的穩(wěn)定性,,低于結(jié)冰溫度時(shí)冰對(duì)食品穩(wěn)定性的影響,食品中的水結(jié)冰時(shí)出現(xiàn)的兩個(gè)不利后果水結(jié)冰后，食品中非水組份的濃度將比冷凍前變大冷凍濃縮效應(yīng)水結(jié)冰后，體積比結(jié)冰前增加9％,冷凍對(duì)食品穩(wěn)定性的有利方面低溫下微生物的繁殖被抑制溫度降低，大部分化學(xué)反應(yīng)的反應(yīng)速率降低,冰的凍結(jié)規(guī)律,純水的凍結(jié)曲線,蔗糖溶液的凍結(jié)曲線,不同凍結(jié)速率的食品物料的凍結(jié)曲線,冰的凍結(jié)規(guī)律,過(guò)冷狀態(tài)、晶核食品中含有一定水溶性成分，使食品的結(jié)冰溫度（凍結(jié)點(diǎn)）降低；隨著凍結(jié)量的增加，凍結(jié)點(diǎn)持續(xù)下降到更低，直到食品內(nèi)溶液濃度增加到一定濃度后不再改變。低共熔點(diǎn)水和其溶解物開(kāi)始共同向固體轉(zhuǎn)化的溫度。約－55℃～－65℃－18℃食品中絕大部分水已凍結(jié)－1℃～－4℃完成大部分冰的形成過(guò)程,冰的凍結(jié)規(guī)律,冰有11種結(jié)構(gòu)，在常壓和0℃時(shí)，只有普通正六方晶系是穩(wěn)定的；冷凍食品中存在六方型、不規(guī)則樹(shù)枝狀、粗糙的球形和易消失的球晶四種主要冰晶體結(jié)構(gòu)。水凍結(jié)時(shí)，冰晶體的大小和結(jié)晶速度受溶質(zhì)、溫度、溫度降低速度等因素的影響冰晶的大小與晶核數(shù)目有關(guān)，形成的晶核越多則晶體越小。結(jié)晶溫度和結(jié)晶熱傳遞速度直接影響晶核數(shù)目的多少。溶質(zhì)的種類和數(shù)量也會(huì)影響冰晶體的數(shù)量、大小、結(jié)構(gòu)、位置和取向。,冷凍過(guò)程中溫度降低和溶質(zhì)濃縮對(duì)化學(xué)反應(yīng)速度的最終影響,,,,,冷凍過(guò)程中酶促反應(yīng)被加速的例子,討論題（速凍食品）,速凍加工過(guò)程中凍結(jié)前需進(jìn)行的處理凍結(jié)條件的要求及控制速凍食品的貯藏、運(yùn)輸及保存對(duì)貯藏、運(yùn)輸?shù)囊螅ɡ滏湹臏囟瓤刂疲┘彝ブ羞x擇和保存速凍食品的注意事項(xiàng)凍干食品工藝原理及食品特點(diǎn),提出做法闡明原理、依據(jù),

簡(jiǎn)介：細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn),海洋科學(xué)系劉均玲（13698999696）,實(shí)驗(yàn)一細(xì)胞膜的滲透性,一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求1掌握細(xì)胞膜通透性的實(shí)驗(yàn)方法。2觀察并掌握相對(duì)分子量、脂溶性大小、電解質(zhì)和非電解質(zhì)對(duì)細(xì)胞膜通透性的影響。,細(xì)胞膜在不斷變化的環(huán)境中必須保持自身的穩(wěn)定狀態(tài)才能生存。細(xì)胞膜允許一些物質(zhì)通透，又能降低甚至阻止另一些物質(zhì)的通透，所以細(xì)胞膜具有選擇通透性。,二、實(shí)驗(yàn)原理,未溶血,溶血,血紅蛋白從紅細(xì)胞中逸出的現(xiàn)象稱為溶血現(xiàn)象。滲入紅細(xì)胞的溶質(zhì)能提高紅細(xì)胞滲透壓，使水進(jìn)入紅細(xì)胞，引起溶血及細(xì)胞膜破裂。此時(shí)光線較容易通過(guò)溶液，使溶液呈現(xiàn)透明即溶血。,二、實(shí)驗(yàn)原理,二、實(shí)驗(yàn)原理,在不同相對(duì)分子量、脂溶性大小以及電解質(zhì)和非電解質(zhì)等各種溶液中，紅細(xì)胞質(zhì)膜對(duì)各種溶質(zhì)的滲透性不同。由于溶質(zhì)透入速度不同，溶血時(shí)間也不同。因此，通過(guò)觀察紅細(xì)胞溶血現(xiàn)象時(shí)間的不同來(lái)記錄滲入速度，從而測(cè)量各種物質(zhì)通透性的差別。,三、實(shí)驗(yàn)材料、儀器和主要試劑,1實(shí)驗(yàn)材料雞血。2實(shí)驗(yàn)器材小燒杯，試管，試管架，刻度吸管，注射器，秒表等。3試劑09生理鹽水；2種低滲溶液0017MOL/L氯化鈉和0032MOL/L葡萄糖；10種等滲溶液017MOL/L氯化鈉、032MOL/L葡萄糖、017MOL/L氯化銨、017MOL/L醋酸銨、017MOL/L硝酸鈉、012MOL/L草酸銨、012MOL/L硫酸鈉、032MOL/L甘油、032MOL/L乙醇、032MOL/L丙酮。,50兔紅細(xì)胞懸液的制備（制備流程如下）以無(wú)菌方法抽取雞靜脈血液（1ML兔血加09生理鹽水9ML）混勻，離心（3000RPM）5MIN棄上清取沉淀加09生理鹽水，離心（3000RPM）5MIN，重復(fù)3次棄上清取沉淀，用生理鹽水稀釋，制成50雞紅細(xì)胞懸液備用,,,,四、實(shí)驗(yàn)方法與步驟,,,,,,四、實(shí)驗(yàn)方法與步驟,溶血現(xiàn)象的觀察取試管2支，分別加入0017MOL/L氯化鈉和0032MOL/L葡萄糖低滲溶液3ML，再加入2滴制備好的50雞紅細(xì)胞懸液，注意觀察溶液顏色的變化，由不透明的紅色懸液變成透明的血紅蛋白溶液（紅細(xì)胞發(fā)生破裂，造成100紅細(xì)胞溶血，使光線比較容易透過(guò)溶液）。,四、實(shí)驗(yàn)方法與步驟,紅細(xì)胞的滲透性（1）取試管一支，加入017MOL/L氯化鈉溶液3ML，再加入2滴制備好的50雞紅細(xì)胞懸液，輕輕搖動(dòng)，混勻后靜置于溫室中，觀察試管中發(fā)生溶血的時(shí)間及其變化。注意是否有顏色變化是否有溶血現(xiàn)象為什么,四、實(shí)驗(yàn)方法與步驟,（2）分別在下列幾種等滲溶液中進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，步驟同（1）。032MOL/L葡萄糖017MOL/L氯化銨017MOL/L醋酸銨017MOL/L硝酸鈉012MOL/L草酸銨012MOL/L硫酸鈉032MOL/L甘油032MOL/L乙醇032MOL/L丙酮,五、注意事項(xiàng),試管中有紅細(xì)胞和測(cè)試溶液時(shí)，不應(yīng)強(qiáng)力搖晃，以免造成人為的紅細(xì)胞破裂。目測(cè)法判斷標(biāo)準(zhǔn)快速溶血＋＋＋；慢速溶血＋＋或＋；不溶血－。溶血現(xiàn)象可用一張有字的白紙來(lái)輔助識(shí)別，能夠清楚地透過(guò)溶液看到溶液后方紙上清晰的字跡時(shí)，為完全溶血。因相對(duì)分子質(zhì)量大小對(duì)膜通透性有影響，所以將溶血時(shí)間適當(dāng)?shù)匮娱L(zhǎng)至15MIN，15MIN時(shí)仍然不溶即判斷為不溶血。,,六、作業(yè),記錄觀察到的現(xiàn)象，并對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析和比較。,實(shí)驗(yàn)二雞血細(xì)胞的體外融合試驗(yàn),一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求,掌握PEG體外誘導(dǎo)細(xì)胞融合的原理和基本方法。掌握在光學(xué)顯微鏡下融合細(xì)胞的形態(tài)特征。,細(xì)胞融合是用人工的方法使兩個(gè)或以上的細(xì)胞融合成異核細(xì)胞。異核細(xì)胞可進(jìn)入有絲分裂，使來(lái)自兩個(gè)親本細(xì)胞的基因組合在一起，形成只含一個(gè)細(xì)胞核的雜種細(xì)胞。,二、實(shí)驗(yàn)原理,PEG溶液作為助融劑可改變各類細(xì)胞的膜結(jié)構(gòu)，使兩細(xì)胞接觸點(diǎn)處脂類分子發(fā)生疏散和重組，引起細(xì)胞融合。,二、實(shí)驗(yàn)原理,細(xì)胞融合的頻率和活力與所用PEG的分子質(zhì)量、濃度、作用時(shí)間以及細(xì)胞的生理狀態(tài)及密度等有關(guān)。本方法用分子質(zhì)量為400～6000的PEG溶液可引起細(xì)胞的聚集和粘連，產(chǎn)生高頻率的細(xì)胞融合。,二、實(shí)驗(yàn)原理,三、實(shí)驗(yàn)材料、儀器和試劑,1材料成年家雞。2主要儀器注射器、刻度離心管、離心機(jī)、血細(xì)胞計(jì)數(shù)板、水浴鍋、滴管、顯微鏡、燒杯、容量瓶、凹面載玻片、蓋玻片、酒精燈等。3主要試劑085NACL溶液、GKN液、50（W/V）PEG400溶液、HANKS液、05酚紅、JANUSGREEN染液等。,1雞血細(xì)胞懸液的制備從家雞的翼根靜脈采血制備抗凝全血。加入4倍體積的085NACL溶液，制成紅細(xì)胞儲(chǔ)備液，保存于4℃。取雞血細(xì)胞儲(chǔ)備液1ML，加入4ML085NACL溶液，混勻后，1200RPM離心5MIN，棄去上清液，再加入5ML085NACL溶液按上述條件離心一次。最后，棄去上清液，加入10ML的GKN溶液制成雞血細(xì)胞懸液。取05ML雞血細(xì)胞懸液，用GKN溶液稀釋至1X107個(gè)/ML，備用。,四、實(shí)驗(yàn)方法與步驟,2雞血細(xì)胞的收集吸取1ML雞血細(xì)胞懸液放入離心管中，加入4MLHANKS液混勻，1000RPM離心5MIN。棄去上清液，用手指輕彈離心管底部，使沉淀的血細(xì)胞團(tuán)塊松散。3PEG誘導(dǎo)細(xì)胞融合吸取05ML37℃的50PEG溶液，慢慢沿著離心管壁逐滴加入，邊加邊輕搖離心管，使PEG與細(xì)胞混勻，然后在37℃水浴中靜置2MIN。,四、實(shí)驗(yàn)方法與步驟,4終止PEG作用緩慢加入5MLHANKS液，輕輕吹打混勻，于37℃水浴中靜置5MIN。5細(xì)胞懸液的制備用吸管輕輕吹打細(xì)胞團(tuán)數(shù)次使細(xì)胞團(tuán)分散，1000RPM離心5MIN，使細(xì)胞完全沉降。棄去上清液，加HANKS液，再離心一次，棄多數(shù)上清，留少許溶液，混勻。,四、實(shí)驗(yàn)方法與步驟,,四、實(shí)驗(yàn)方法與步驟,6計(jì)算細(xì)胞融合率細(xì)胞融合率是指在顯微鏡的視野內(nèi)，已發(fā)生融合的細(xì)胞其細(xì)胞核總數(shù)與該視野內(nèi)所有細(xì)胞的細(xì)胞核總數(shù)之百分比。融合率視野內(nèi)融合細(xì)胞的核數(shù)/視野內(nèi)細(xì)胞的總核數(shù)100％,,7染色和鏡檢吸取細(xì)胞懸液，在凹面載玻片上滴一滴，加入JANUSGREEN染液混勻，染色3MIN后蓋上蓋玻片，在顯微鏡下觀察細(xì)胞融合情況（注意區(qū)分細(xì)胞融合與細(xì)胞重疊）。,四、實(shí)驗(yàn)方法與步驟,五、注意事項(xiàng),1高CA2濃度能夠提高細(xì)胞融合率。有些抗凝劑中含有和CA2結(jié)合的化合物，與血液中的CA2形成難解離的可溶性絡(luò)合物，導(dǎo)致血液中的CA2濃度降低，故起抗凝血作用，但同時(shí)會(huì)造成細(xì)胞的融合率較低。2必須嚴(yán)格控制PEG的作用時(shí)間，通常處理細(xì)胞1～2MIN。PEG和二甲基亞砜（DMSO）并用，可以提高細(xì)胞的融合率。3融合細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)就變成一個(gè)雜種細(xì)胞，它的染色體數(shù)不是兩核的倍數(shù)，因?yàn)橐恍┤旧w會(huì)逐漸消失。,六、作業(yè),繪細(xì)胞融合過(guò)程圖。,實(shí)驗(yàn)三石蠟切片法,一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?熟悉石蠟切片的制作過(guò)程。掌握HE染色的基本原理和染色方法。,二、實(shí)驗(yàn)原理,石蠟切片是最基本的切片技術(shù)，冰凍切片和超薄切片等都是在石蠟切片基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的。蘇木素與伊紅對(duì)比染色法（簡(jiǎn)稱HE對(duì)染法）是組織切片最常用的染色方法。這種方法適用范圍廣泛，對(duì)組織細(xì)胞的各種成分都可著色，便于全面觀察組織構(gòu)造，而且適用于各種固定液固定的材料，染色后不易褪色可長(zhǎng)期保存。經(jīng)過(guò)HE染色，細(xì)胞核被蘇木素染成藍(lán)紫色，細(xì)胞質(zhì)被伊紅染色呈粉紅色。,三、實(shí)驗(yàn)用品,1器材切片機(jī)、水浴鍋、染色缸、玻片、顯微鏡、試劑瓶、剪刀、鑷子、烘箱、離心管或青霉素瓶子。2試劑蘇木色精、伊紅、二甲苯、中性樹(shù)膠、酒精、石蠟、氨水、鹽酸、蛋清、甘油。3試驗(yàn)材料羅非魚(yú)肝臟組織,四、實(shí)驗(yàn)步驟,1、取材2、固定3、漂洗4、脫水5、透明6、透蠟7、包埋8、修塊9、切片10、染色,1取材到切片,取材固定（CANNOY’S），材料厚度2MM。100酒精100酒精二甲苯酒精（11）二甲苯二甲苯二甲苯石蠟（65℃11）石蠟（65℃）石蠟（65℃），以上處理各20MIN，最后一步石蠟也20MIN。包埋修塊切片貼片,2脫蠟與復(fù)水,二甲苯二甲苯二甲苯/無(wú)水乙醇1/1無(wú)水乙醇無(wú)水乙醇95乙醇80乙醇70乙醇50乙醇蒸餾水。以上處理各23MIN。,3染色與觀察,1蘇木色精（5MIN）水洗05鹽酸分色（數(shù)秒）水洗04氨水藍(lán)化水洗（5MIN）70酒精80酒精1伊紅（95酒精溶解）95酒精95酒精100酒精100酒精酒精/二甲苯二甲苯二甲苯中性樹(shù)膠封片。未注明時(shí)間的一律處理23MIN。,五、作業(yè),簡(jiǎn)述石蠟切片過(guò)程，繪制你所觀察到的細(xì)胞形態(tài)。提交一張你制作較好的玻片。,實(shí)驗(yàn)四植物細(xì)胞骨架的觀察,,一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?掌握考馬斯亮藍(lán)R250對(duì)植物細(xì)胞骨架染色的方法。通過(guò)對(duì)洋蔥內(nèi)皮細(xì)胞的處理，掌握植物細(xì)胞骨架的制備方法與顯微形態(tài)觀察。,二、實(shí)驗(yàn)原理,細(xì)胞骨架CYTOSKELETON，是細(xì)胞內(nèi)以蛋白質(zhì)纖維為主要成分的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，根據(jù)蛋白質(zhì)纖維的直徑、組成成分和組裝結(jié)構(gòu)的不同可分為微絲、微管和中等纖維。細(xì)胞骨架對(duì)于維持細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)及細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、物質(zhì)運(yùn)輸、能量轉(zhuǎn)換、信號(hào)傳導(dǎo)和細(xì)胞分裂等有重要的作用。本試驗(yàn)采用去垢劑TRITONX100的緩沖液處理植物材料時(shí)，可將細(xì)胞的膜結(jié)構(gòu)和大部分蛋白質(zhì)抽提掉，但細(xì)胞骨架系統(tǒng)的蛋白卻被保存下來(lái)，后者用考馬斯亮藍(lán)R250染色，在光學(xué)顯微鏡下可見(jiàn)一種網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。,三、實(shí)驗(yàn)用品,1試驗(yàn)材料洋蔥2器材顯微鏡、載玻片、滴管、擦鏡紙、PH計(jì)3試劑001MOL/L磷酸鹽緩沖生理鹽水PBS02MOL/LNA2HPO4NAH2PO4緩沖液（PB，PH73）50ML、015MOL/LNACL、加雙蒸餾水加至1000MLPB02MOL/LNA2HPO477ML02MOL/LNAH2PO423ML,M緩沖液咪唑PH6750MMOL/LKCL50MMOL/LMGC1205MMOL/LEGTA1MMOL/LEDTA01MMOL/L巰基乙醇1MMOL/L甘油4MMOL/L用1MOL/LHCL調(diào)PH至72。,,1的TRITONX100/M緩沖液02考馬斯亮藍(lán)R250染液甲醇465ML冰醋酸7ML蒸餾水465ML3戊二醛PB溶液（PH73）,四、實(shí)驗(yàn)步驟,取洋蔥內(nèi)皮1CM左右置于含PBS液的載玻片上濕潤(rùn)后，吸去PBS加2滴1TRITONX100/M緩沖液，5MIN吸去緩沖液，加3戊二醛PB溶液，固定30MIN加PBS洗2次，共3MIN加02考馬斯亮藍(lán)R250染色30MIN用PBS洗2次，共2MIN，吸干鏡檢并繪圖,,,,,,,,,五、注意事項(xiàng),用去垢劑TRITONX100的緩沖液處理材料時(shí)，應(yīng)控制在30MIN左右。每一次加液或染色后，應(yīng)用PBS洗2次，并用濾紙吸干。,六、作業(yè),畫(huà)出實(shí)驗(yàn)所觀察到的細(xì)胞骨架圖，并注明放大倍數(shù)。為什么用TRITONX100的緩沖液處理材料,現(xiàn)在請(qǐng)開(kāi)始實(shí)驗(yàn)謝謝,

簡(jiǎn)介：細(xì)胞微生物學(xué)研究方法,前言,人們僅確知一小部分細(xì)菌可導(dǎo)致人類疾病。這些細(xì)菌一般可分為兩類致病菌和條件致病菌。醫(yī)療手段不斷提高，抗生素的研制也在不斷發(fā)展，但由各種病原體所導(dǎo)致的疾病仍有很高的發(fā)病率和致死率。越來(lái)越多耐藥性病原體的出現(xiàn)可能使我們很快進(jìn)入一個(gè)“后抗生素期”。更好地理解病原體的毒力機(jī)制和疾病中病原宿主相互作用可為治療疾病確立新的靶。我們應(yīng)該發(fā)展更多的新的分子生物學(xué)技術(shù)來(lái)研究細(xì)菌的各個(gè)組分，確定細(xì)菌的毒力因子。,KOCH’SPOSTULATES,1890年,KOCH要想確定一種疾病是由于某種微生物的感染所引起，必須滿足4項(xiàng)條件一、每一例病人體內(nèi)都可以分離到該病菌。二、該病菌可以在體外培養(yǎng)數(shù)代。三、培養(yǎng)了數(shù)代的細(xì)菌可以使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物引發(fā)同樣的疾病。四、被接種的動(dòng)物中可以分離到同樣的病菌。,MOLECULARKOCH‘SPOSTULATES,基因可以在有確定毒力表型的菌株中發(fā)現(xiàn)；基因突變后表型喪失；再導(dǎo)入該基因?qū)⒃谕蛔冎曛兄亟ㄔ摫硇汀?STANLEYFALKOWMOLECULARKOCH‘SPOSTULATESAPPLIEDTOMICROBIALPATHOGENICITYREVINFECTDIS198810S2S2746,常用的體外微生物實(shí)驗(yàn)技術(shù)常用的體內(nèi)微生物實(shí)驗(yàn)技術(shù),DNA突變重組差異表達(dá)研究技術(shù)MICROARRAY基因芯片,常用的體外微生物實(shí)驗(yàn)技術(shù),突變分析,突變MUTATION細(xì)菌的基因結(jié)構(gòu)發(fā)生偶然的改變。細(xì)菌的自然突變率與其生物的自然突變相同，每106～108次細(xì)胞分裂發(fā)生一次。細(xì)菌每20～30分鐘分裂一代，故突變株相對(duì)較多。細(xì)菌中點(diǎn)突變較多見(jiàn)。當(dāng)突變發(fā)生在DNA一對(duì)或少數(shù)幾對(duì)堿基引起改變時(shí)，稱為點(diǎn)突變。,突變分析,1定向突變（DIRECTEDMUTATION）是用于評(píng)價(jià)特異細(xì)菌基因產(chǎn)物毒力分布的最廣泛技術(shù)。在一種稱為“反向遺傳學(xué)”的技術(shù)中，編碼假定毒力因子的基因被插入滅活或基因替代所破壞，然后比較同源突變株與親代株的毒力。這一技術(shù)需要將DNA介導(dǎo)入病原體內(nèi)，還需要合適的選擇性標(biāo)記以及同源重組的天然能力。,在定向突變中，抗生素耐受標(biāo)記或其他選擇性標(biāo)記連于靶基因克隆復(fù)制物的編碼序列內(nèi)，這就破壞了基因的正常轉(zhuǎn)錄和翻譯，并為選擇重組子提供了標(biāo)記。接著，重組子被介導(dǎo)入靶病原體，并與細(xì)菌染色體的同源區(qū)進(jìn)行重組。如果耐受標(biāo)記兩側(cè)是染色體特異序列，就會(huì)發(fā)生雙重交叉（DOUBLECROSSOVER），標(biāo)記基因整合入染色體序列，而載體序列不整合。,定向突變,蔗糖敏感標(biāo)記在HPYLORIVACA基因中導(dǎo)入突變的方法,PCRHPYLORIFLAA啟動(dòng)子區(qū)、無(wú)啟動(dòng)子的SACB基因，卡那霉素耐受基因（KAN）,構(gòu)建KANSACBCASSETTE,插入PEK，得到PENKSF,195KB的VACA基因（ECORⅠKPNⅠ）克隆入PBLUESCRIPTKS載體，構(gòu)建PEK,與細(xì)菌染色體的同源區(qū)進(jìn)行雙交換重組,突變的VACA菌株,定向突變,隨機(jī)突變,傳統(tǒng)的方法使用UV或化學(xué)試劑在細(xì)菌基因組內(nèi)造成核苷酸的改變，導(dǎo)致基因表達(dá)的變化。缺點(diǎn)沒(méi)有合適的方法來(lái)篩選減毒株和突變的基因細(xì)菌轉(zhuǎn)座子TRANSPOSON轉(zhuǎn)座子是存在于染色體DNA上可自主復(fù)制和位移的基本單位，常通過(guò)產(chǎn)生插入突變影響基因的調(diào)控與表達(dá)，導(dǎo)致細(xì)菌生物學(xué)性狀或毒力等的改變。轉(zhuǎn)座子誘變技術(shù)已被廣泛用于細(xì)菌分子遺傳學(xué)研究，包括3個(gè)步驟將轉(zhuǎn)座子插入靶基因；篩選感興趣的突變體，并證實(shí)該突變是由轉(zhuǎn)座子插入引起的；確定并克隆靶基因。優(yōu)點(diǎn)不需要鑒定待測(cè)基因的產(chǎn)物，只要轉(zhuǎn)座基因插入可引起表型發(fā)生變化的基因均可用此法分離鑒定。,二、差異表達(dá)研究,分離微生物差異表達(dá)基因MRNA差異顯示技術(shù)差減雜交和抑制差減雜交CDNA代表性差異分析基因鑒定集成法,二、差異表達(dá)研究,1MRNA差異顯示技術(shù)DDPCRMRNADIFFERENTIALDISPLAYREVERSETRANSCRIPTIONPCR是建立在基因差別表達(dá)的基礎(chǔ)上，通過(guò)比較不同的個(gè)體之間MRNA的差異，應(yīng)用反轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)而發(fā)展起來(lái)的一種分離未知基因的方法。缺點(diǎn)重復(fù)性差、假陽(yáng)性高、差異片段短小等。,2、差減雜交和抑制差減雜交,差減雜交SUBTRACTIVEHYBRIDIZATION，SH）STRAUS等于1990年首次用于微生物研究野生株酵母與變異株酵母進(jìn)行消減雜交。抑制差減雜交（SUPPRESSIONSUBTRACTIVEHYBRIDIZATION,SSH）1996年DIATCHENKO在SH基礎(chǔ)上進(jìn)一步改善。,差減雜交的原理,提取待比較的兩種基因組DNA,待于尋找差異DNA的稱為實(shí)驗(yàn)株（TESTER）,,另一方作參考，稱為驅(qū)動(dòng)株（DRIVER）,,,在雜交前連接接頭和TESTERDNA，并用生物素標(biāo)記DRIVERDNA。,保證TESTERDNA序列較短,雜交,雜交后，含有DRIVERDNA的雜合子可通過(guò)鏈親和素的吸附作用而移去,接頭序列為引物，用PCR擴(kuò)增剩余的序列，也就是僅存在于TESTERDNA中的序列,重復(fù)一次,將PCR序列克隆入載體中，產(chǎn)生差減文庫(kù),抑制差減雜交技術(shù)（SSH）,將TESTERDNA分為兩部分，各自在5’端接上不同的接頭,,DRIVERDNA雜交的序列應(yīng)均被清除，只留下TESTER特異的單鏈序列,用與接頭序列結(jié)合的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增抑制效應(yīng)兩端含有相同接頭的序列由于形成二級(jí)結(jié)構(gòu)阻止了引物的退火，只有兩端含有不同接頭的E分子得以擴(kuò)增。,單鏈TESTERDNA,雙鏈TESTERDNA,TESTERDNA和DRIVERDNA形成的異源雙鏈分子,DRIVERDNA單鏈及自身退火的雙鏈分子,第二輪雜交。將兩份雜交產(chǎn)物混合并進(jìn)行第二次雜交，產(chǎn)生第5種新的雙鏈分子E，它的兩個(gè)5’端連有兩個(gè)不同的接頭，兩條鏈均為T(mén)ESTERDNA特異鏈,將PCR序列克隆入載體中，產(chǎn)生差減文庫(kù),SH在微生物研究中的應(yīng)用,檢測(cè)毒力島，尋找毒力有關(guān)基因。檢測(cè)不同菌株表達(dá)的不同；同一株菌在不同條件下表達(dá)的不同。檢測(cè)有毒株與無(wú)毒株的基因差異，研究毒力的改變?nèi)琊じ叫?、侵襲性。2000年用SH方法檢測(cè)有毒株TB和無(wú)毒株TB表達(dá)的不同，或高表達(dá)的基因。發(fā)現(xiàn)了DEVR和DEVS與毒力有關(guān)。B組鏈球菌主要分為III1,2,3株，其中III3最易感染新生兒，說(shuō)明毒力最強(qiáng)，用SH將它與III－2、1進(jìn)行雜交，發(fā)現(xiàn)9個(gè)短特異序列，可能與毒力有關(guān)。,SH技術(shù)的缺陷,表達(dá)量很低的差異MRNA也很難被擴(kuò)增。所以一些量少的基因不作為SH的檢測(cè)對(duì)象，如轉(zhuǎn)錄因子，細(xì)胞因子，受體等。要檢測(cè)出表達(dá)量的不同要高于5倍才行。一些重要的差異基因可能會(huì)漏過(guò)。SH主要檢測(cè)在GC％豐富的菌中GC％含量低的區(qū)域。SH無(wú)法將兩個(gè)菌的不同基因都測(cè)出，得到的產(chǎn)物不全是差異基因。要考慮用其他技術(shù)補(bǔ)充。,3、CDNA代表性差異分析CDNARDACDNAREPRESENTATIONDIFFERENCEANALYSIS,綜合了差減雜交和差別顯示兩項(xiàng)技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)，并充分利用PCR反應(yīng)的特性，達(dá)到特異性擴(kuò)增目的基因的目的。原理每次對(duì)兩個(gè)CDNA代表群進(jìn)行差減雜交前都更換特定的接頭和引物,利用PCR以指數(shù)形式擴(kuò)增雙鏈模板（帶有特定接頭的TESTERDNA），而僅以線性形式擴(kuò)增單鏈模板這一特性，從而使得只有差異表達(dá)的基因片段得到高度富集。,CDNARDA,4、基因鑒定集成法IPGICDNAREPRESENTATIONDIFFERENCEANALYSIS,是對(duì)以往各種相關(guān)技術(shù)的一種有效的綜合。在目前表達(dá)序列標(biāo)簽EXPRESSEDSEQUENCETAGS,ESTS計(jì)劃發(fā)展的基礎(chǔ)上，總結(jié)了現(xiàn)有的各種基因差別表達(dá)分析技術(shù)的優(yōu)缺點(diǎn)，將DDPCR、SSH、SAGE和基因數(shù)據(jù)庫(kù)技術(shù)進(jìn)行了有機(jī)結(jié)合。特點(diǎn)TESTER有兩種不同的接頭，在差減雜交中只有代表稀有拷貝基因且兩端帶不同接頭的CDNA片段才能以指數(shù)擴(kuò)增，使得目的序列得以高度富集；只回收3’CDNA，從而最大限度地利用ESTS數(shù)據(jù)庫(kù)。,三、基因芯片,基因芯片是指通過(guò)微加工技術(shù)將大量的DNA以預(yù)先設(shè)計(jì)的排列方式有序地固定在載體表面，形成儲(chǔ)存有大量信息的DNA陣列。檢測(cè)時(shí)，首先用不同條件下培養(yǎng)的細(xì)菌的RNA為模板，以放射性同位素或熒光標(biāo)記的DNTP為底物反轉(zhuǎn)錄合成CDNA。再用所得CDNA與DNA芯片進(jìn)行雜交，然后通過(guò)計(jì)算機(jī)對(duì)結(jié)果進(jìn)行判讀和處理，這樣就可以找到條件變化時(shí)基因表達(dá)的情況。,基因芯片應(yīng)用,微生物比較基因組學(xué)研究微生物基因表達(dá)譜研究微生物檢測(cè)鑒定研究,MICROARRAY特點(diǎn),規(guī)?；瘷z測(cè)PCR基礎(chǔ)的MICROARRAY不能檢測(cè)到點(diǎn)突變和嵌合基因存在一定假陽(yáng)性率和假陰性率，需用其他方式驗(yàn)證,,問(wèn)號(hào)鉤體基因組DNA芯片的組成,鉤體賴株在GENBANK中共注釋了4727個(gè)基因，鉤體DNA芯片上共包含了3528個(gè)ORFS，每個(gè)ORF在芯片上有三個(gè)重復(fù)。每張芯片還包含了相應(yīng)的陽(yáng)性對(duì)照點(diǎn)（鉤端螺旋體代謝相關(guān)基因）及陰性對(duì)照點(diǎn)（棉花和人的基因）。,STMIVETDFIIVEATGAMBIT,常用的體內(nèi)微生物實(shí)驗(yàn)技術(shù),體內(nèi)誘導(dǎo)基因INVIVOINDUCEDGEN，IVIGENE,僅在微生物進(jìn)入宿主體內(nèi)后才被誘導(dǎo)表達(dá)在體外生長(zhǎng)時(shí)不表達(dá)的獨(dú)特基因。往往能增強(qiáng)其在宿主體內(nèi)的生存能力，致病性甚至決定著細(xì)菌毒力強(qiáng)弱，極有可能是病原菌在宿主體內(nèi)生長(zhǎng)、繁殖及致病的關(guān)鍵基因，也是潛在的抗生素作用靶點(diǎn)、診斷抗原以及疫苗候選者，具有重要的研究?jī)r(jià)值。隨著分子生物學(xué)技術(shù)及分子遺傳學(xué)研究手段的發(fā)展，依賴動(dòng)物模型的IVET、DFI、STM以及不依賴感染動(dòng)物模型的IVIAT等研究方法的發(fā)明及成功運(yùn)用使得針對(duì)微生物IVIGENE的研究成為可能。,是一種基于轉(zhuǎn)座子的突變技術(shù)。是由HOLDEN及其同事于1995年在研究傷寒鼠沙門(mén)氏菌時(shí)建立起來(lái)的，用來(lái)鑒定能使病原體在宿主體內(nèi)成功存活和繁殖的決定性基因。在病原體的基因組中隨機(jī)插入特異性信號(hào)標(biāo)簽，與病原體致病有關(guān)的毒力基因中由于插入轉(zhuǎn)座子而失活，無(wú)法在宿主體內(nèi)生存、繁殖。通過(guò)突變體庫(kù)感染宿主，然后對(duì)未存活的突變體進(jìn)行負(fù)篩選就可篩選出毒力基因失活的突變體菌株。,信號(hào)標(biāo)簽誘變（STM）SIGNATURETAGGEDMUTAGENESIS,STM技術(shù)TAGS的構(gòu)建可變區(qū)40BP，由4個(gè)堿基隨機(jī)排列而成，理論上可形成1012種不同DNA片段。,,STM的特點(diǎn),通過(guò)聯(lián)合轉(zhuǎn)座子插入誘變技術(shù)和體內(nèi)負(fù)篩選原則使篩選策略由原來(lái)針對(duì)單個(gè)突變株的逐一鑒定轉(zhuǎn)變?yōu)獒槍?duì)復(fù)雜突變體群的系統(tǒng)篩選，篩選過(guò)程更為快捷與系統(tǒng)；特異性DNA序列對(duì)突變體的逐一標(biāo)記也能輕易地鑒定出被突變的基因，將工作量和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用量降到最低。,STM的局限性,一是插入性誘變實(shí)驗(yàn)存在的共同局限性，如插入事件存在隨機(jī)性，使得某些較小基因片段400BPS的插入性轉(zhuǎn)座誘變較難實(shí)現(xiàn)；某些基因區(qū)域本身為體內(nèi)轉(zhuǎn)座或重組的熱區(qū)或冷區(qū)也影響著轉(zhuǎn)座誘變作用的成功率；需要建立能方便地從其感染器官組織中回收尚且存活的細(xì)菌突變株的合適動(dòng)物模型等。另一方面的局限性則為STM技術(shù)所特有，包括標(biāo)簽信號(hào)衰減的影響；眾多突變體株同時(shí)收集并實(shí)驗(yàn)可能導(dǎo)致其中某些單一信號(hào)的削弱，從而影響結(jié)果可靠性；另外，由于多個(gè)突變株同時(shí)存在并共同作用，突變株之間的缺陷代償可能導(dǎo)致某些突變基因不能被篩選與鑒定，出現(xiàn)假陰性結(jié)果等。,體內(nèi)表達(dá)技術(shù)INVIVOEXPRESSIONTECHNOLOGY，IVET,利用病原基因組隨機(jī)片段與缺乏啟動(dòng)子的報(bào)告基因構(gòu)建融合載體（啟動(dòng)子誘捕文庫(kù)），在動(dòng)物體內(nèi)重組到細(xì)菌基因組中而使報(bào)告基因表達(dá)，篩選病原菌感染過(guò)程中表達(dá)基因的方法。采用常規(guī)的分子生物學(xué)技術(shù)即能進(jìn)行篩選，不需要昂貴的儀器設(shè)備，優(yōu)勢(shì)明顯；不需要對(duì)目標(biāo)病原菌的基因組特性進(jìn)行深入詳細(xì)的認(rèn)識(shí)即可對(duì)細(xì)菌在宿主環(huán)境條件下的基因表達(dá)情況進(jìn)行分析研究。,EXAMPLE鼠傷寒沙門(mén)菌PURA缺陷型模型PURA基因作為可選擇的報(bào)告基因；LACZ基因（編碼Β半乳糖苷酶）供體外選擇。,差異熒光誘導(dǎo)（DFI）,以GFP為報(bào)告基因來(lái)監(jiān)測(cè)啟動(dòng)子活性。將GFP編碼基因置于目標(biāo)病原菌啟動(dòng)子文庫(kù)的下游，采用熒光激活細(xì)胞分選術(shù)對(duì)包含有啟動(dòng)子GFP融合活性的菌落與不能表達(dá)GFP的菌落進(jìn)行分離，通過(guò)對(duì)體內(nèi)及體外環(huán)境中熒光細(xì)胞的連續(xù)分離與比較以確定僅在體內(nèi)環(huán)境中存在的細(xì)胞及相應(yīng)的突變基因。,GFP基因編碼一種水母蛋白綠色熒光蛋白（GFP），在受到藍(lán)光激發(fā)后會(huì)發(fā)出綠色熒光。GFP的一個(gè)重要特征是它的熒光信號(hào)能通過(guò)FACS來(lái)檢測(cè)，這意味著含有與GFP基因融合的啟動(dòng)子庫(kù)的細(xì)菌可自動(dòng)篩選出活化的啟動(dòng)子，這樣成千上萬(wàn)的啟動(dòng)子可在數(shù)分鐘內(nèi)被分離。FACS還能分選表達(dá)GFP的細(xì)菌粘附或內(nèi)在化的真核細(xì)胞，使檢測(cè)由于和宿主細(xì)胞相互作用而激活的細(xì)菌基因成為可能。,將熒光激活細(xì)胞分選術(shù)和基因組學(xué)研究進(jìn)行整合，對(duì)微生物基因表達(dá)情況進(jìn)行高通量的半自動(dòng)篩選，操作簡(jiǎn)單、迅速、實(shí)驗(yàn)重復(fù)性高；具有熒光性質(zhì)穩(wěn)定，無(wú)細(xì)胞毒性，不干擾細(xì)菌在宿主體內(nèi)的侵襲、擴(kuò)散和增值過(guò)程，可直接用于活細(xì)胞測(cè)定等優(yōu)點(diǎn)。GFP的運(yùn)用使研究者能對(duì)基因的表達(dá)情況及單細(xì)胞水平的啟動(dòng)子活性進(jìn)行客觀觀察與分析，并可通過(guò)簡(jiǎn)單改變熒光閾值來(lái)調(diào)節(jié)選擇敏感性。,DFI的特性,不能檢測(cè)需要轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)的基因；需要構(gòu)建和分析目標(biāo)基因突變株以評(píng)估靶基因在天然感染中的作用；細(xì)菌的聚集與粘附可能影響流式細(xì)胞分類與檢測(cè)分析；研究環(huán)境的PH變化、氧氣供給情況以及缺乏信號(hào)放大效應(yīng)等也會(huì)影響GFP的使用；由于熒光為非線性信號(hào)，每次實(shí)驗(yàn)時(shí)都需要對(duì)信號(hào)的線性范圍進(jìn)行檢測(cè)和校準(zhǔn)以確保準(zhǔn)確量化基因的表達(dá)情況；采用細(xì)胞模型，不適用于動(dòng)物模型的篩選，因此篩選結(jié)果不夠全面，不能反映致病菌感染的全部環(huán)節(jié)。,DFI的缺陷,體內(nèi)誘導(dǎo)抗原技術(shù)IVIAT（INVIVOINDUCEDANTIGENTECHNOLOGY）,直接從“蛋白”角度入手篩選毒力基因HANDFIELD及其合作者于2000年在研究口腔病原菌時(shí)設(shè)計(jì)提出，通過(guò)對(duì)表達(dá)文庫(kù)進(jìn)行免疫篩選得到病原菌的體內(nèi)誘生基因。作為一種簡(jiǎn)單有效的篩選技術(shù)，IVIAT已被成功用于多種病原微生物IVIGENE的研究中，如豬鏈球菌、炭疽桿菌、傷寒沙門(mén)氏菌以及白色念珠菌等等。,體內(nèi)誘導(dǎo)的抗原技術(shù),取感染過(guò)所研究病原體的多個(gè)病人的血清，用體外生長(zhǎng)的該病原細(xì)胞將相應(yīng)抗體全部吸收，只留下僅在體內(nèi)表達(dá)的抗原的相應(yīng)抗體。,在合適的宿主中建立該抗原DNA的表達(dá)庫(kù),用吸收后血清探測(cè)這些克隆,有反應(yīng)的克隆即產(chǎn)生自然感染而非體外培養(yǎng)過(guò)程中表達(dá)的抗原，通過(guò)純化、測(cè)序，即可鑒定體內(nèi)誘導(dǎo)的抗原基因。,將這些抗原純化，用于證實(shí)IVI抗原確由病原體在感染過(guò)程中表達(dá)。,IVIAT的特點(diǎn),IVIAT不依賴于動(dòng)物模型，而是以急性感染患者的恢復(fù)期血清為探針篩選病原菌的IVIGENE，應(yīng)用范圍廣泛，可真實(shí)全面地反映病原菌與人類感染宿主之間的相互作用。僅使用簡(jiǎn)單的免疫學(xué)和常規(guī)基因組克隆技術(shù)即可快速及時(shí)對(duì)病原菌基因組進(jìn)行系統(tǒng)篩選，不需要對(duì)目的病原菌基本遺傳學(xué)背景進(jìn)行詳細(xì)了解，尤其適用于一些新現(xiàn)病原菌的致病性研究。所需生物學(xué)材料極少，僅需采集受染患者的恢復(fù)期血清或少量含有病原菌的受染組織或體液成分即可進(jìn)行，血清庫(kù)的建立使研究人員可以最大程度獲得病原菌不同途徑感染和感染不同階段的抗原。,IVIAT的缺陷,僅適用于可培養(yǎng)病原微生物；具抗體反應(yīng)依賴性；對(duì)于一些不具免疫原性或某些細(xì)菌在體內(nèi)體外生存都必需的毒力基因表達(dá)產(chǎn)物不能很好鑒別；不能自動(dòng)化操作；會(huì)受到免疫交叉反應(yīng)的影響而造成假陽(yáng)性，因此IVIAT的陽(yáng)性菌落需要經(jīng)過(guò)多次重復(fù)篩選，還需用陰性感染血清為對(duì)照以確保免疫反應(yīng)的特異性。,4種細(xì)菌毒力基因篩選技術(shù)方法的比較,體外轉(zhuǎn)座進(jìn)行基因組分析和作圖GAMBITGENOMICANALYSISANDMAPPINGBYINVITROTRANSPOSITION,鑒定基因組已經(jīng)被測(cè)序的微生物中對(duì)于病原菌的生長(zhǎng)體內(nèi)/體外是必需的基本基因。,ASTRATEGYFORPRODUCINGCHROMOSOMALMUTATIONSBYUSINGINVITROTRANSPOSONMUTAGENESIS,ASPECIFICREGIONOFTHECHROMOSOMEISAMPLIFIEDBYEXTENDEDLENGTHPCR,ANDSUBJECTEDTOINVITROTRANSPOSONMUTAGENESISTHERESULTANTPOOLOFMUTAGENIZEDDNAISTHENTRANSFORMEDINTOBACTERIA,WHICHARETHENGROWNUNDERSELECTIVECONDITIONSEGONDEFINEDMEDIUMORINANANIMALPCRISTHENPERFORMEDONTHEPOSTSELECTIONPOOLUSINGATRANSPOSONSPECIFICPRIMERANDAPRIMERTOAKNOWNLOCATIONONTHECHROMOSOMESUBSEQUENTANALYSISOFTHEPCRPRODUCTSALLOWSDETERMINATIONOFWHICHGENESINTHATREGIONOFTHECHROMOSOMEAREREQUIREDFORSURVIVALUNDERTHOSESELECTIVECONDITIONS,BGENETICFOOTPRINTINGFORDETECTIONOFESSENTIALGENES,GAMBIT提供了一種有力的手段在那些比體外豐富培養(yǎng)基環(huán)境要嚴(yán)格得多的環(huán)境下鑒定病原生長(zhǎng)或生存的必須基因，目前已經(jīng)被成功運(yùn)用于鑒定流感嗜血桿菌、釀酒酵母、肺炎鏈球菌等病原的基本基因。GAMBIT雖然是應(yīng)用在基因組水平的分析，它仍然可以針對(duì)某段感興趣的特別的特定DNA元件或染色體區(qū)域進(jìn)行操作，例如噬菌體和毒力島等。,GAMBIT的特點(diǎn),噬菌體展示技術(shù)PHAGEDISPLAYTECHNIQUES,PDT）,噬菌體（BACTERIOPHAGE）是感染細(xì)菌、真菌、放線菌或螺旋體等微生物的病毒的總稱，部分能引起宿主菌的裂解，具有基因和結(jié)構(gòu)單一性的特點(diǎn)。PDT是一種將外源肽或蛋白質(zhì)與特定噬菌體衣殼蛋白融合并展示于噬菌體表面的技術(shù)。它將外源基因插入到噬菌體展示載體的信號(hào)肽基因和衣殼蛋白編碼基因之間，從而使外源基因編碼的多肽或蛋白質(zhì)與外殼蛋白以融合蛋白質(zhì)形式展示在噬菌體表面，被展示的外源肽或蛋白質(zhì)可保持相對(duì)獨(dú)立的空間結(jié)構(gòu)和生物活性，以利于靶分子的識(shí)別和結(jié)合。探測(cè)蛋白空間結(jié)構(gòu)、探索受體與配體之間相互作用結(jié)合位點(diǎn)、確定抗原表位、尋找高親和力和生物活性的配體分子。,PDT原理,主要包括三方面內(nèi)容通過(guò)DNA重組的方法插入外源基因，形成的融合蛋白表達(dá)在噬菌體顆粒的表面，同時(shí)保持外源蛋白的天然構(gòu)象，不影響噬菌體的生活周期，也能被相應(yīng)的抗體或受體所識(shí)別；篩選目的噬菌體，利用固定于固相支持物的靶分子，采用適當(dāng)?shù)奶韵捶椒?，洗去非特異結(jié)合的噬菌體，篩選出融合噬菌體；外源多肽或蛋白質(zhì)表達(dá)在噬菌體的表面，而其編碼基因作為病毒基因組中的一部分可通過(guò)分泌型噬菌體的單鏈DNA測(cè)序推導(dǎo)出來(lái)。,PDT,PDT局限性,在噬菌體展示過(guò)程中必須經(jīng)過(guò)細(xì)菌轉(zhuǎn)化、噬菌體包裝，有的展示系統(tǒng)還要經(jīng)過(guò)跨膜分泌過(guò)程，大大限制了所建庫(kù)的容量和分子多樣性。不是所有的序列都能在噬菌體中獲得很好的表達(dá)，因?yàn)橛行┑鞍踪|(zhì)功能的實(shí)現(xiàn)需要折疊、轉(zhuǎn)運(yùn)、膜插入和絡(luò)合，導(dǎo)致在體內(nèi)篩選時(shí)需外加選擇壓力。噬菌體展示文庫(kù)一旦建成，很難再進(jìn)行有效的體外突變和重組，進(jìn)而限制了文庫(kù)中分子遺傳的多樣性。由于噬菌體展示系統(tǒng)依賴于細(xì)胞內(nèi)基因的表達(dá)，所以，一些對(duì)細(xì)胞有毒性的分子如生物毒素分子，很難得到有效表達(dá)和展示。,

簡(jiǎn)介：醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)介,醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)是一門(mén)實(shí)驗(yàn)性較強(qiáng)的學(xué)科，它的任何一項(xiàng)新成果取得都離不開(kāi)實(shí)驗(yàn)。在21世紀(jì)生命科學(xué)領(lǐng)域中，更加顯示出細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)的重要性和引導(dǎo)科學(xué)發(fā)展前沿性。在醫(yī)學(xué)理論研究及臨床實(shí)踐研究中也起著極大的作用，尤其是目前醫(yī)學(xué)面臨的惡性腫瘤等重大醫(yī)學(xué)問(wèn)題，最終解決也要依賴細(xì)胞生物學(xué)研究的突破。,醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)介,對(duì)細(xì)胞生物學(xué)教學(xué)來(lái)說(shuō)，實(shí)驗(yàn)課程是一個(gè)非常重要組成部分，學(xué)生的基本技能，動(dòng)手能力，創(chuàng)新和探索意識(shí)都要通過(guò)實(shí)驗(yàn)課來(lái)實(shí)現(xiàn)，尤其培養(yǎng)學(xué)生的綜合科研素質(zhì)顯得更為重要。本實(shí)驗(yàn)方法在當(dāng)前是常用而先進(jìn)（或改良優(yōu)化）的方法。實(shí)驗(yàn)包括了實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、原理、方法、結(jié)果與分析、作業(yè)等。,實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目設(shè)置與內(nèi)容提要,實(shí)驗(yàn)一光學(xué)顯微鏡的使用與細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察,一、目的要求1掌握光鏡的正確使用；2掌握光鏡下各種不同細(xì)胞的形態(tài)、大小及基本結(jié)構(gòu)，了解細(xì)胞形態(tài)、大小與功能的關(guān)系；3初步掌握臨時(shí)制片和顯微鏡下的繪圖方法。,二、實(shí)驗(yàn)原理,細(xì)胞是生物體的基本結(jié)構(gòu)和功能單位。它們的形態(tài)多種多樣，并且其形態(tài)與功能是相適應(yīng)的。細(xì)胞的大小差別很大，典型的原核細(xì)胞直徑平均在01～10ΜM之間，而真核細(xì)胞的直徑平均為3～30ΜM；一般來(lái)說(shuō)，動(dòng)植物細(xì)胞比細(xì)菌大10倍。同類型細(xì)胞的體積一般是相近的，不依生物個(gè)體的大小而增大或縮小。如人、牛、馬、鼠、象的腎細(xì)胞、肝細(xì)胞的大小基本相同。器官的大小主要決定于細(xì)胞的數(shù)量，與其成正比，而與細(xì)胞的大小無(wú)關(guān)，把這種現(xiàn)象為“細(xì)胞體積的守恒定律”,二、實(shí)驗(yàn)原理,細(xì)胞是生物體的基本結(jié)構(gòu)單位。構(gòu)成生物機(jī)體的細(xì)胞是多種多樣的。要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行研究，首先要從其形態(tài)結(jié)構(gòu)人手。所以，要借助顯微鏡的成像及放大原理，在顯微鏡下，才能觀察到細(xì)胞的基本形態(tài)結(jié)構(gòu)。正確使用顯微鏡（低倍鏡→高倍鏡→油鏡）。,不同的細(xì)胞形態(tài),人類紅細(xì)胞,神經(jīng)細(xì)胞,植物細(xì)胞的形態(tài)與大小,典型植物細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu),,,不同類型細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)存在很大的差異,不同類型細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)存在很大的差異,,,典型的原核、真核、病毒和分子的大小,三、實(shí)驗(yàn)材料和用品,實(shí)驗(yàn)材料人口腔上皮細(xì)胞、洋蔥鱗莖表皮細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)試劑1碘液、9生理鹽水。實(shí)驗(yàn)用品光學(xué)顯微鏡、載玻片、蓋玻片、吸管、擦鏡紙、吸水紙、紗布。,四、實(shí)驗(yàn)步驟,1人口腔粘膜上皮細(xì)胞臨時(shí)標(biāo)本的制備和觀察蓋玻片/載玻片的揩擦→涂片→標(biāo)本的觀察2洋蔥鱗莖表皮細(xì)胞臨時(shí)標(biāo)本的制備和觀察蓋玻片/載玻片的揩擦→標(biāo)本的制備→標(biāo)本的觀察,五、作業(yè),繪口腔上皮細(xì)胞、洋蔥鱗莖表皮細(xì)胞圖并注明各部分的結(jié)構(gòu)名稱。,

簡(jiǎn)介：發(fā)酵工程實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)THEEXPERIMENTALGUIDEFERMENTATIONENGINEERING,湖北理工學(xué)院化學(xué)與化工學(xué)院HTTP//CMEHBPUEDUCN/,啤酒發(fā)酵實(shí)驗(yàn),PART1麥芽汁糖度的測(cè)定及滅菌分裝,糖度的測(cè)定,麥芽汁的稀釋,具體工作,PART2啤酒酵母的擴(kuò)大培養(yǎng)和主發(fā)酵,主發(fā)酵,PART3酒精度、實(shí)際濃度的測(cè)定,實(shí)驗(yàn)步驟,PART4啤酒后發(fā)酵及品質(zhì)評(píng)價(jià),后發(fā)酵,品酒,THANKYOU,