簡(jiǎn)介:,,2024/2/29,臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ),第六章其他體液檢驗(yàn),第一節(jié)腦脊液檢查,概述腦脊液(CEREBROSPINALFLUID,CSF)存在于各腦室、蛛網(wǎng)膜下腔和脊髓中央管內(nèi)無色透明液體的細(xì)胞外液主要由腦室脈絡(luò)叢主動(dòng)分泌和超濾作用形成。正常成人腦脊液的產(chǎn)生和重吸收保持動(dòng)態(tài)平衡,總量維持在120ML~180ML左右,約占體液總量的15。,,腦脊液循環(huán),第一節(jié)腦脊液檢查,腦脊液生理功能①保護(hù)腦和脊髓免受外力震蕩損傷。②調(diào)節(jié)顱內(nèi)壓力變化。③供給腦、脊髓營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),運(yùn)走代謝產(chǎn)物。④調(diào)節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)堿儲(chǔ)量、維持正常PH。⑤轉(zhuǎn)運(yùn)生物胺類物質(zhì),參與神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)節(jié)。,第一節(jié)腦脊液檢查,,腦脊液與臨床疾病腦脊液中含有一定的細(xì)胞和化學(xué)成分,腦脊液的性狀和壓力受多種因素的影響。中樞神經(jīng)系統(tǒng)任何部位發(fā)生器質(zhì)性病變時(shí),如感染、腫瘤、外傷、水腫和阻塞等均可引起腦脊液的性狀和化學(xué)成分發(fā)生改變。檢測(cè)腦脊液中各項(xiàng)指標(biāo)的變化,對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的診斷和鑒別診斷、治療效果觀察和預(yù)后判斷均具有重要價(jià)值。,第一節(jié)腦脊液檢查,,第一節(jié)腦脊液檢查,,1,一、標(biāo)本采集與處理,,2,二、一般性狀檢查,,3,三、顯微鏡檢查,,4,四、化學(xué)檢查,一、標(biāo)本采集與處理,,(一)標(biāo)本采集與運(yùn)送腦脊液標(biāo)本由臨床醫(yī)師通過腰椎穿刺的方式采集,必要時(shí)可從小腦延髓池或側(cè)腦室穿刺采集。穿刺時(shí)應(yīng)盡量避免混入血液。穿刺后將腦脊液標(biāo)本分別收集于3個(gè)無菌容器中,每管1ML~3ML,第1管用于細(xì)菌學(xué)檢查,第2管用于化學(xué)和免疫學(xué)檢查,第3管用于一般性狀和顯微鏡檢查。腦脊液標(biāo)本采集后應(yīng)立即由專人或?qū)S玫奈锪飨到y(tǒng)運(yùn)送到實(shí)驗(yàn)室。為保證標(biāo)本輸送途中的安全性,應(yīng)采用封閉的容器轉(zhuǎn)運(yùn),避免過度震蕩。如發(fā)生標(biāo)本溢灑,應(yīng)立即采用02過氧乙酸或含2000MG/L有效氯的消毒液或75乙醇溶液消毒污染區(qū)域。,一、標(biāo)本采集與處理,,(二)標(biāo)本接收與拒收實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)對(duì)送達(dá)實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)本進(jìn)行核對(duì)和查驗(yàn),對(duì)標(biāo)本容器標(biāo)識(shí)清晰、無明顯外溢情況、標(biāo)本量符合檢驗(yàn)項(xiàng)目要求的腦脊液標(biāo)本予以接收。標(biāo)本接收后應(yīng)盡快檢驗(yàn),一般不超過1小時(shí)。如不能及時(shí)檢驗(yàn),則將標(biāo)本保存于2℃~8℃環(huán)境中,并保證在4小時(shí)內(nèi)完成檢驗(yàn)。標(biāo)本久置可造成細(xì)胞變形或破壞,葡萄糖等物質(zhì)分解,細(xì)菌溶解,從而影響檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。如標(biāo)本存在信息不全、唯一性標(biāo)識(shí)不清、標(biāo)本外溢明顯或量不足、或者存在其他影響檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性的因素時(shí)應(yīng)予以拒收,記錄并及時(shí)將標(biāo)本不合格的情況反饋給送檢科室。,一、標(biāo)本采集與處理,,(三)檢驗(yàn)后標(biāo)本處理腦脊液內(nèi)可能含有各種病原微生物,必須視為有潛在感染性的物質(zhì)。標(biāo)本的采集、運(yùn)送、接收、檢驗(yàn)及檢驗(yàn)后處理等過程要符合實(shí)驗(yàn)室生物安全原則,實(shí)驗(yàn)過程中注意個(gè)人生物安全防護(hù),檢驗(yàn)后的標(biāo)本及容器、檢測(cè)過程中接觸標(biāo)本的材料皆應(yīng)按病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例及醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)醫(yī)療廢物管理辦法的相關(guān)規(guī)定處理。,二、一般性狀檢查,,(一)顏色通過肉眼觀察腦脊液的顏色。1參考區(qū)間無色或淡黃色。2臨床意義中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)生感染、出血、腫瘤時(shí),腦脊液的顏色可出現(xiàn)不同程度的改變。(1)紅色腦脊液中混有血液時(shí),因紅細(xì)胞量的多少和出血時(shí)間的不同,可使標(biāo)本呈紅色、紅褐色、淡紅色等。如標(biāo)本為血性,需區(qū)別穿刺性損傷(新鮮出血)或腦及蛛網(wǎng)膜下腔出血(陳舊性出血)。,二、一般性狀檢查,,,腦脊液新鮮出血和陳舊性出血的鑒別,二、一般性狀檢查,(2)黃色腦脊液呈淡黃色稱為腦脊液黃變癥,常見于腦及蛛網(wǎng)膜下腔的陳舊性出血。蛛網(wǎng)膜下腔梗阻所致腦脊液滯留時(shí),或疾病引起腦脊液內(nèi)蛋白質(zhì)含量>15G/L時(shí)也可呈黃色,顏色的深淺與蛋白質(zhì)含量成正比;當(dāng)血清膽紅素>171ΜMOL/L或腦脊液中膽紅素>86ΜMOL/L時(shí),腦脊液可呈黃色;標(biāo)本采集后未及時(shí)檢測(cè),由于紅細(xì)胞破壞,血紅蛋白降解常呈淡黃色;進(jìn)食大量的黃色素、類胡蘿卜素或腦脊液中含有黑色素時(shí)腦脊液也可呈黃色。,,二、一般性狀檢查,(3)乳白色由于白(膿)細(xì)胞增多所致,常見于各種化膿性細(xì)菌引起的化膿性腦膜炎。(4)綠色見于銅綠假單胞菌、肺炎鏈球菌或甲型鏈球菌引起的腦膜炎等。(5)褐色或黑色常見于腦膜黑色素瘤。,二、一般性狀檢查,(二)透明度1.參考區(qū)間清澈透明。2.臨床意義腦脊液中白細(xì)胞超過200106/L或紅細(xì)胞超過400106/L時(shí)可致輕微混濁。細(xì)菌、真菌或蛋白質(zhì)含量增加也可引起渾濁。化膿性腦膜炎腦脊液可呈膿性灰白色渾濁或米湯樣渾濁;結(jié)核性腦膜炎腦脊液可呈毛玻璃樣微渾;病毒性腦炎、神經(jīng)梅毒等疾病的腦脊液可呈透明外觀。健康人腦脊液可因穿刺損傷帶入紅細(xì)胞而呈輕度渾濁。,二、一般性狀檢查,(三)凝固性1.結(jié)果報(bào)告腦脊液的凝固性可按“無凝塊”、“有凝塊”、“有薄膜”、“膠凍狀”等描述。2.參考區(qū)間無凝塊、無沉淀,放置12小時(shí)~24小時(shí)后不形成薄膜。3.臨床意義當(dāng)腦脊液內(nèi)的蛋白質(zhì)(特別是纖維蛋白原)含量增高超過10G/L時(shí),可出現(xiàn)薄膜、凝塊或沉淀。化膿性腦膜炎患者的腦脊液一般在1小時(shí)~2小時(shí)內(nèi)形成薄膜、凝塊或沉淀;結(jié)核性腦膜炎的腦脊液放置12小時(shí)~24小時(shí)后形成薄膜或纖細(xì)凝塊;蛛網(wǎng)膜下腔梗阻的腦脊液由于蛋白質(zhì)含量明顯增高,可呈黃色膠凍狀。腦脊液同時(shí)出現(xiàn)膠樣凝固、黃變癥和蛋白質(zhì)細(xì)胞分離現(xiàn)象(蛋白質(zhì)明顯增高,細(xì)胞數(shù)正?;蜉p度增高),稱為FROINNONNE綜合征,此為蛛網(wǎng)膜下腔梗阻腦脊液的特征。神經(jīng)梅毒及脊髓灰質(zhì)炎腦脊液中可出現(xiàn)絮狀小凝塊。,,三、顯微鏡檢查,(一)細(xì)胞總數(shù)計(jì)數(shù)1.簡(jiǎn)要操作(1)直接計(jì)數(shù)法腦脊液混勻→充池→低倍鏡計(jì)數(shù)→計(jì)算。因腦脊液中細(xì)胞數(shù)量少,因此,需計(jì)數(shù)2個(gè)計(jì)數(shù)池內(nèi)四角和中央大方格共10個(gè)大方格內(nèi)的細(xì)胞數(shù)。(2)稀釋計(jì)數(shù)法渾濁或血性的腦脊液,可用生理鹽水或紅細(xì)胞稀釋液稀釋后再充池計(jì)數(shù),計(jì)算時(shí)乘以稀釋倍數(shù)后再換算成每升腦脊液中的細(xì)胞總數(shù)。,,三、顯微鏡檢查,2.質(zhì)量保證(1)為避免腦脊液標(biāo)本凝固,應(yīng)盡快送檢、盡快檢驗(yàn)。遇高球蛋白標(biāo)本時(shí),可用EDTA鹽抗凝。(2)腦脊液細(xì)胞計(jì)數(shù)應(yīng)在標(biāo)本采集后1小時(shí)內(nèi)完成,以免放置過久,細(xì)胞變形、破壞或腦脊液凝固,導(dǎo)致計(jì)數(shù)不準(zhǔn)確。(3)穿刺損傷導(dǎo)致的血性腦脊液,計(jì)數(shù)細(xì)胞總數(shù)無意義。(4)計(jì)數(shù)時(shí)注意新型隱球菌與白細(xì)胞、紅細(xì)胞區(qū)別。新型隱球菌不溶于乙酸,加優(yōu)質(zhì)墨汁后可見不著色的莢膜。紅細(xì)胞加酸后溶解;白細(xì)胞加酸后細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)更加明顯。(5)細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí),如發(fā)現(xiàn)較多皺縮或腫脹的紅細(xì)胞,應(yīng)在報(bào)告中予以描述,以幫助臨床鑒別陳舊性或新鮮性出血。,,三、顯微鏡檢查,3.方法學(xué)評(píng)價(jià)直接計(jì)數(shù)法操作簡(jiǎn)便、省時(shí),適用于細(xì)胞總數(shù)不多的腦脊液標(biāo)本。稀釋計(jì)數(shù)法適用于渾濁的腦脊液標(biāo)本,但操作相對(duì)煩瑣,存在稀釋誤差。4.參考區(qū)間正常人腦脊液無紅細(xì)胞;僅有少量白細(xì)胞。5.臨床意義見白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)。,,三、顯微鏡檢查,(二)白細(xì)胞計(jì)數(shù)1.簡(jiǎn)要操作(1)直接計(jì)數(shù)法適用于非血性的腦脊液標(biāo)本。用微量吸管吸取冰乙酸后再全部吹出,使微量吸管內(nèi)壁黏附少量冰乙酸,再吸入混勻的腦脊液標(biāo)本,數(shù)分鐘后混勻充入血細(xì)胞計(jì)數(shù)板內(nèi)計(jì)數(shù)。(2)稀釋計(jì)數(shù)法適用于渾濁或血性的腦脊液標(biāo)本。用白細(xì)胞稀釋液稀釋腦脊液,充池計(jì)數(shù)白細(xì)胞。,,三、顯微鏡檢查,2.質(zhì)量保證(1)直接計(jì)數(shù)時(shí)吸管內(nèi)的冰乙酸要盡量除去,否則結(jié)果偏低。(2)為了排除因出血而帶來的白細(xì)胞數(shù)影響,可用下式進(jìn)行校正WBC校正=WBC未校正-,,,三、顯微鏡檢查,3.方法學(xué)評(píng)價(jià)直接計(jì)數(shù)法操作簡(jiǎn)便、省時(shí),但未考慮吸管內(nèi)壁黏附的冰乙酸體積。如黏附的冰乙酸量較大,可使結(jié)果偏低。如黏附的冰乙酸量太少,可能有一部分紅細(xì)胞不能破壞也影響結(jié)果準(zhǔn)確性。直接計(jì)數(shù)法適用于細(xì)胞總數(shù)不多的腦脊液標(biāo)本。稀釋計(jì)數(shù)法紅細(xì)胞破壞完全,結(jié)果相對(duì)準(zhǔn)確,但操作相對(duì)繁雜。4.參考區(qū)間①成人(0~8)106/L。②兒童(0~15)106/L;新生兒(0~30)106/L。5.臨床意義見白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)。,,三、顯微鏡檢查,(三)白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)1.直接分類法白細(xì)胞直接計(jì)數(shù)后,在高倍鏡下根據(jù)細(xì)胞核形態(tài)分別計(jì)數(shù)多個(gè)核細(xì)胞(粒細(xì)胞)和單個(gè)核細(xì)胞(淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞和間皮細(xì)胞),共計(jì)數(shù)100個(gè)有核細(xì)胞,并以百分?jǐn)?shù)表示多個(gè)核細(xì)胞和單個(gè)核細(xì)胞所占的比例。2.染色分類法取離心后的腦脊液沉淀物涂片,瑞氏或瑞吉復(fù)合染色,分類方法與血液白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)方法相同。如有內(nèi)皮細(xì)胞,需要另作描述并報(bào)告。,,三、顯微鏡檢查,3.質(zhì)量保證(1)標(biāo)本若標(biāo)本陳舊、細(xì)胞變形時(shí),白細(xì)胞直接分類法誤差較大,應(yīng)改用涂片染色。(2)涂片固定時(shí)間不能太長(zhǎng),溫度不能過高,以免細(xì)胞皺縮難以分類;細(xì)胞涂片要均勻集中,以利于觀察。(3)染色分類法標(biāo)本離心時(shí)速度不宜太快、時(shí)間不宜過長(zhǎng),以減少細(xì)胞的破壞和變形。(4)染色分類時(shí),如見內(nèi)皮細(xì)胞、室管膜細(xì)胞應(yīng)計(jì)入分類百分比中;若見腫瘤細(xì)胞,則另行描述報(bào)告。(5)若白細(xì)胞總數(shù)少于100個(gè),則直接寫出單個(gè)核細(xì)胞和多個(gè)核細(xì)胞各自的具體數(shù)字。,,三、顯微鏡檢查,4.方法學(xué)評(píng)價(jià)直接分類法簡(jiǎn)便、快速,但較難觀察清楚細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu),準(zhǔn)確性較差。尤其是陳舊性標(biāo)本,細(xì)胞形態(tài)改變大,僅憑高倍鏡分類困難,誤差較大。染色分類法細(xì)胞識(shí)別率高,結(jié)果準(zhǔn)確可靠,可以發(fā)現(xiàn)異常細(xì)胞(如腫瘤細(xì)胞),為首選方法;但操作較復(fù)雜、費(fèi)時(shí)。近年來出現(xiàn)使用高檔血液分析儀或體液細(xì)胞分析儀對(duì)腦脊液標(biāo)本進(jìn)行白細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類計(jì)數(shù)。雖然該類儀器精密度高,快速、可自動(dòng)化,但影響因素較多,對(duì)異常細(xì)胞無法識(shí)別,如儀器出現(xiàn)報(bào)警信息,必須用顯微鏡計(jì)數(shù)法進(jìn)行復(fù)核。,,三、顯微鏡檢查,5.參考區(qū)間(1)直接分類法多為淋巴細(xì)胞及單核細(xì)胞(7∶3),偶見內(nèi)皮細(xì)胞。(2)染色分類法①成人淋巴細(xì)胞40~80,單核細(xì)胞15~45,中性粒細(xì)胞0~6。②新生兒淋巴細(xì)胞5~35,單核細(xì)胞50~90,中性粒細(xì)胞0~8。,,三、顯微鏡檢查,6.臨床意義中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變時(shí)腦脊液細(xì)胞數(shù)可增多,其增多的程度及細(xì)胞種類與病變的性質(zhì)有關(guān)。中樞神經(jīng)系統(tǒng)病毒感染、結(jié)核性或真菌性腦膜炎時(shí),細(xì)胞輕到中度增加,常以淋巴細(xì)胞為主;細(xì)菌感染所致化膿性腦膜炎時(shí),細(xì)胞數(shù)顯著增加,以中性粒細(xì)胞為主;腦寄生蟲病時(shí),可見嗜酸性粒細(xì)胞增多;腦室或蛛網(wǎng)膜下腔出血時(shí),腦脊液內(nèi)可見大量紅細(xì)胞。,,三、顯微鏡檢查,,,中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變時(shí)腦脊液細(xì)胞分類計(jì)數(shù)的變化,結(jié)核性腦膜炎增殖期,化膿性腦膜炎增殖期,三、顯微鏡檢查,(四)病原生物學(xué)檢查腦脊液病原生物學(xué)檢查的內(nèi)容一般包括細(xì)菌檢查、真菌檢查和寄生蟲檢查,常用的檢查方法如下。,,腦脊液病原生物學(xué)檢查的方法及評(píng)價(jià),四、化學(xué)檢查,(一)蛋白質(zhì)健康人的腦脊液只含少量蛋白質(zhì),約為血漿蛋白含量的1,主要為清蛋白。腦脊液蛋白質(zhì)檢查對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病診斷、鑒別診斷和療效觀察具有重要意義。腦脊液蛋白質(zhì)檢查有定性試驗(yàn)和定量測(cè)定兩大類方法。,,四、化學(xué)檢查,1.潘氏試驗(yàn)(PANDYTEST)(1)試劑飽和苯酚溶液,由苯酚和水組成。(2)原理腦脊液中的蛋白質(zhì)與苯酚結(jié)合,形成不溶性蛋白鹽而出現(xiàn)白色混濁或沉淀。(3)簡(jiǎn)要操作取試劑2ML于試管中→垂直滴加腦脊液1滴~2滴→立即在黑色背景下觀察結(jié)果,若出現(xiàn)白色混濁或沉淀即為陽性。,,四、化學(xué)檢查,2.硫酸銨試驗(yàn)包括羅瓊試驗(yàn)(ROSSJONESTEST)和諾愛試驗(yàn)(NONNEAPELTTEST)。主要是利用半飽和硫酸銨沉淀球蛋白,出現(xiàn)白色混濁或沉淀。3.腦脊液蛋白質(zhì)定量測(cè)定主要有磺基水楊酸硫酸鈉比濁法、鄰苯三酚紅鉬絡(luò)合顯色法和雙縮脲法等方法。目前臨床常用的方法是鄰苯三酚紅鉬絡(luò)合顯色法。鄰苯三酚紅能與腦脊液中的蛋白質(zhì)結(jié)合成紅色的鄰苯三酚紅鉬酸鹽蛋白復(fù)合物,在600NM波長(zhǎng)下比色,吸光度大小與標(biāo)本中蛋白質(zhì)含量成正比。,,四、化學(xué)檢查,4.質(zhì)量保證(1)標(biāo)本標(biāo)本渾濁或含有大量細(xì)胞時(shí),須離心沉淀,吸取上清液進(jìn)行檢測(cè),否則可引起潘氏試驗(yàn)假陽性以及腦脊液蛋白定量測(cè)定結(jié)果偏高。(2)器材潘氏試驗(yàn)所用器材均應(yīng)十分潔凈沒有污染,以免潘氏試驗(yàn)出現(xiàn)假陽性。(3)試劑飽和苯酚試劑如飽和度降低會(huì)出現(xiàn)假陰性,應(yīng)定期檢查、更換試劑,特別是室溫較低時(shí)。(4)潘氏試驗(yàn)觀察結(jié)果時(shí)應(yīng)注意在黑色背景下進(jìn)行,否則易引起假陰性。(5)腦脊液蛋白定量測(cè)定時(shí)如蛋白濃度過高,應(yīng)先用生理鹽水稀釋后再重新測(cè)定。,,四、化學(xué)檢查,,,5.方法學(xué)評(píng)價(jià)腦脊液蛋白質(zhì)檢測(cè)試驗(yàn)的方法學(xué)評(píng)價(jià),四、化學(xué)檢查,,,6.參考區(qū)間①定性試驗(yàn)陰性或極弱陽性。②定量測(cè)定腰椎穿刺液020G/L~040G/L;腦池液010G/L~025G/L;腦室液005G/L~015G/L。7.臨床意義腦脊液蛋白質(zhì)含量增高是血腦脊液屏障功能障礙的標(biāo)志,其臨床意義見下表。腦脊液蛋白質(zhì)含量增高的臨床意義,腦脊液蛋白質(zhì)含量增高的臨床意義,四、化學(xué)檢查,(二)葡萄糖測(cè)定1.測(cè)定方法腦脊液中葡萄糖濃度的高低與血漿葡萄糖濃度、血腦脊液屏障的通透性、葡萄糖酵解程度以及葡萄糖膜轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)的功能有關(guān)。腦脊液葡萄糖測(cè)定的方法主要有葡萄糖氧化酶法和己糖激酶法。葡萄糖氧化酶法易受一些還原性物質(zhì)干擾,特異性較低;己糖激酶法不受輕度溶血、脂血、黃疸、維生素C及藥物的干擾,特異性、準(zhǔn)確性都高于葡萄糖氧化酶法。2.參考區(qū)間成人25MMOL/L~45MMOL/L;兒童28MMOL/L~45MMOL/L。,,四、化學(xué)檢查,3.臨床意義(1)腦脊液葡萄糖降低見于①化膿性腦膜炎、結(jié)核性腦膜炎和真菌性腦膜炎葡萄糖含量越低,預(yù)后越差。②腦寄生蟲病如腦囊蟲病、血吸蟲病、肺吸蟲病、弓形蟲病等。③腦腫瘤,尤其是惡性腫瘤。④神經(jīng)性梅毒。⑤低血糖等。(2)腦脊液葡萄糖升高見于①早產(chǎn)兒或新生兒主要由于血腦脊液屏障的通透性較高所致。②飽餐或靜脈注射葡萄糖后,血液葡萄糖含量增高。③影響到腦干的急性外傷或中毒。④腦出血。⑤糖尿病等。,,四、化學(xué)檢查,(三)氯化物測(cè)定1.測(cè)定方法腦脊液中氯化物含量受血氯濃度、血PH、血腦脊液屏障通透性及腦脊液中蛋白質(zhì)含量等多種因素影響。正常情況下,腦脊液中氯化物含量比血液中高20左右。這是由于腦脊液內(nèi)蛋白質(zhì)含量較低,為了維持腦脊液和血漿滲透壓之間平衡,故腦脊液氯化物含量高于血漿,即DONNAN平衡。腦脊液氯化物測(cè)定方法與血清氯化物測(cè)定方法相同,目前臨床常用的方法有硝酸汞滴定法、硫氰酸汞比色法、離子選擇電極法、電量分析法、干化學(xué)分析法等。其中離子選擇電極法變異系數(shù)小,準(zhǔn)確度和精密度良好,易于自動(dòng)化,為使用最廣泛的常規(guī)方法。2.參考區(qū)間成人120MMOL/L~130MMOL/L;兒童111MMOL/L~123MMOL/L。,,四、化學(xué)檢查,3.臨床意義氯化物降低主要見于①腦部細(xì)菌或真菌感染如化膿性腦膜炎、結(jié)核性腦膜炎及真菌性腦膜炎。結(jié)核性腦膜炎時(shí),腦脊液中氯化物降低尤為明顯,比葡萄糖降低出現(xiàn)得還要早,故對(duì)結(jié)核性腦膜炎與化膿性腦膜炎鑒別有一定價(jià)值。②低血氯癥各種原因如體內(nèi)氯化物的異常丟失、攝入氯化物過少等引起血氯降低時(shí),腦脊液中氯化物可隨之降低。③嘔吐、腎上腺皮質(zhì)功能減退癥和腎臟病變。④病毒性腦膜炎、脊髓灰質(zhì)炎,腦膿腫、神經(jīng)梅毒氯化物稍減低或正常。氯化物升高主要見于尿毒癥、脫水、心力衰竭和漿液性腦膜炎等。,,四、化學(xué)檢查,,,(四)其他1.化學(xué)檢查(1)酶及乳酸測(cè)定腦脊液常見的其他化學(xué)檢查主要有酶及乳酸測(cè)定,其濃度增高的臨床意義見下表。腦脊液中主要酶及乳酸濃度增高的臨床意義,四、化學(xué)檢查,(2)蛋白電泳腦脊液蛋白電泳分析可較靈敏發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)各組分的變化。腦脊液蛋白電泳常用乙酸纖維薄膜電泳法及瓊脂糖凝膠電泳法,電泳條件與血清蛋白電泳相同。若采用等電聚焦電泳可提高電泳圖譜的分辨率。因腦脊液蛋白質(zhì)含量少,在電泳前可將腦脊液標(biāo)本在高分子聚乙二醇或右旋糖酐透析液中進(jìn)行濃縮。,,四、化學(xué)檢查,,,腦脊液蛋白質(zhì)電泳檢查的臨床意義,四、化學(xué)檢查,2免疫學(xué)檢查(1)免疫球蛋白測(cè)定健康人腦脊液中免疫球蛋白含量極少,病理情況下由于血腦脊液屏障通透性增加,血中免疫球蛋白進(jìn)入腦脊液中或中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染時(shí)激活免疫細(xì)胞分泌免疫球蛋白,引起腦脊液免疫球蛋白增加。目前臨床上常用免疫比濁法檢測(cè)腦脊液中免疫球蛋白含量。免疫比濁法具有靈敏度高、準(zhǔn)確性和重復(fù)性好,快速且能自動(dòng)分析等特點(diǎn)。,,四、化學(xué)檢查,,,腦脊液免疫球蛋白檢查的臨床意義,四、化學(xué)檢查,,,(2)其他項(xiàng)目測(cè)定腦脊液其他免疫學(xué)檢查項(xiàng)目測(cè)定的臨床意義見下表。腦脊液其他免疫學(xué)檢查項(xiàng)目測(cè)定的臨床意義,腦脊液其他免疫學(xué)檢查項(xiàng)目測(cè)定的臨床意義,五、腦脊液檢查臨床應(yīng)用,(一)中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染性疾病診斷與鑒別診斷1.化膿性腦膜炎腦脊液細(xì)胞數(shù)明顯增多,分類以中性粒細(xì)胞為主,蛋白質(zhì)明顯增高,葡萄糖和氯化物明顯降低,細(xì)菌涂片可見致病菌,細(xì)菌培養(yǎng)陽性可確診。2.病毒性腦膜炎腦脊液細(xì)胞數(shù)輕到中度增多,分類以淋巴細(xì)胞為主,蛋白質(zhì)輕度增高,葡萄糖和氯化物一般正常,特異性IGM抗體檢測(cè)可用于早期診斷。3.結(jié)核性腦膜炎腦脊液細(xì)胞數(shù)輕到中度增多,疾病早期以中性粒細(xì)胞為主,隨著病情的進(jìn)展變化為以淋巴細(xì)胞為主,氯化物明顯降低、蛋白質(zhì)輕度到中度增高,細(xì)菌涂片見抗酸桿菌或結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)陽性可確診。4.真菌性腦膜炎腦脊液細(xì)胞學(xué)特點(diǎn)與結(jié)核性腦膜炎相似,兩者難以區(qū)別。臨床上最常見的是新型隱球菌感染,細(xì)菌涂片墨汁染色陽性或隱球菌乳膠凝集試驗(yàn)陽性可確診。,,五、腦脊液檢查臨床應(yīng)用,(二)協(xié)助中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤的診斷腦脊液細(xì)胞學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞,有助于中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤的診斷。腦轉(zhuǎn)移癌和腦膜癌陽性率可達(dá)80左右,但原發(fā)腫瘤(髓母細(xì)胞瘤除外)陽性率較低。,,五、腦脊液檢查臨床應(yīng)用,,,常見中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的腦脊液實(shí)驗(yàn)室檢查特點(diǎn),第二節(jié)漿膜腔積液檢查,人體漿膜腔包括胸腔、腹腔、心包腔。正常情況下,漿膜腔內(nèi)僅含有少量液體,主要起潤(rùn)滑作用。病理情況下,大量的液體在漿膜腔內(nèi)潴留,從而形成了漿膜腔積液SEROUSEFFUSION。根據(jù)積液產(chǎn)生的部位不同,可分為胸腔積液(胸水)、腹腔積液(腹水)、心包腔積液;根據(jù)積液產(chǎn)生的原因及性質(zhì)不同,可分為漏出液和滲出液。,,漏出液多為雙側(cè)性非炎性積液,常見于各種腎病、充血性心力衰竭、嚴(yán)重的營(yíng)養(yǎng)不良、晚期肝硬化、腫瘤及靜脈栓塞等疾病滲出液多為單側(cè)性炎性積液,病因比較復(fù)雜,常見于結(jié)核性和細(xì)菌性感染、轉(zhuǎn)移性肺癌、乳腺癌、淋巴瘤、卵巢癌、消化液刺激及外傷等。確定漿膜腔積液的性質(zhì),對(duì)病因的診斷有著重要的意義。,第二節(jié)漿膜腔積液檢查,,一、標(biāo)本采集與處理,,1.標(biāo)本采集由臨床醫(yī)師行漿膜腔穿刺術(shù)采集,采集的標(biāo)本分4管留取,每管1ML~2ML。第一管供細(xì)菌學(xué)檢查(結(jié)核分枝桿菌檢查留10ML),必須置于無菌試管中;第二管供化學(xué)及免疫學(xué)檢查(化學(xué)檢查宜用肝素抗凝);第三管供細(xì)胞學(xué)檢查(宜用EDTAK2抗凝),標(biāo)本采集后應(yīng)立即低速離心或用細(xì)胞收集器濃集細(xì)胞,及時(shí)完成細(xì)胞檢查。如不能及時(shí)檢查,可加入標(biāo)本1/10量的無水乙醇并置冰箱冷藏保存以固定細(xì)胞;第四管不加任何抗凝劑以觀察有無凝固現(xiàn)象。,一、標(biāo)本采集與處理,,2.標(biāo)本轉(zhuǎn)運(yùn)(1)標(biāo)本運(yùn)送標(biāo)本采集后應(yīng)立即在30分鐘內(nèi)送檢,以防止細(xì)胞變形、出現(xiàn)凝塊或細(xì)菌溶解破壞,否則應(yīng)將標(biāo)本置于4℃冰箱內(nèi)保存。(2)生物安全漿膜腔積液內(nèi)可能含有各種病原生物,應(yīng)按潛在生物危害物質(zhì)處理。標(biāo)本的采集、運(yùn)送、檢查及處理等過程要符合實(shí)驗(yàn)室生物安全原則,注意個(gè)人生物安全防護(hù)。,一、標(biāo)本采集與處理,,3.保存和接收①妥善保存標(biāo)本收到后應(yīng)及時(shí)檢查,漿膜腔積液常規(guī)及化學(xué)檢查必須在采集后2小時(shí)內(nèi)完成,否則應(yīng)將標(biāo)本冷藏保存。如果進(jìn)行細(xì)胞學(xué)計(jì)數(shù)和分類可將標(biāo)本保存24小時(shí)。②注意標(biāo)識(shí)采集標(biāo)本容器的標(biāo)識(shí)與檢驗(yàn)申請(qǐng)單一致。4.標(biāo)本處理應(yīng)按照臨床實(shí)驗(yàn)室廢物處理原則(WS/T/2492005)的方法處理實(shí)驗(yàn)后的殘余標(biāo)本和所用器械,以免污染環(huán)境和造成室內(nèi)感染??蓪堄鄻?biāo)本與1∶50的84消毒液混合消毒12分鐘后倒掉。,二、一般性狀檢查,,(一)量1.參考區(qū)間正常胸腔、腹腔、心包腔內(nèi)均有少量液體。2.臨床意義病理情況下,漿膜腔內(nèi)液體增多,其量與病變的部位及嚴(yán)重程度相關(guān),可達(dá)數(shù)百至上千毫升。,二、一般性狀檢查,,(二)顏色1.參考區(qū)間淡黃色。2.臨床意義漏出液顏色較淺,滲出液因病因不同而顏色各異,見下表。漿膜腔積液常見顏色變化及臨床意義,二、一般性狀檢查,,(三)透明度1.參考區(qū)間清晰透明。2.臨床意義積液透明度與其所含的細(xì)胞、細(xì)菌和蛋白質(zhì)數(shù)量等有關(guān)。漏出液因其所含細(xì)胞、細(xì)菌及蛋白質(zhì)量少而呈清晰透明或微渾液體,滲出液因含大量細(xì)胞、細(xì)菌及蛋白質(zhì)而呈現(xiàn)不同程度渾濁。,二、一般性狀檢查,,(四)凝固性1.參考區(qū)間不易凝固。2.臨床意義漏出液一般不易凝固或出現(xiàn)凝塊。滲出液由于含有較多的纖維蛋白原和細(xì)菌、細(xì)胞破壞后釋放的凝血活酶,可有凝塊形成,但若其中含有纖溶酶時(shí),可不出現(xiàn)凝固。,二、一般性狀檢查,,(五)比重1.測(cè)定方法比重計(jì)法。2.參考區(qū)間漏出液<1015,滲出液>1018。3.臨床意義積液比重的高低取決于所含溶質(zhì)的數(shù)量及種類。漏出液中由于含細(xì)胞、蛋白質(zhì)成分少,所以比重<1015;滲出液中由于含有較多的細(xì)胞和蛋白質(zhì),故比重常>1018。,三、顯微鏡檢查,,(一)細(xì)胞計(jì)數(shù)1.計(jì)數(shù)方法與腦脊液計(jì)數(shù)方法相同,應(yīng)計(jì)數(shù)全部有核細(xì)胞(包括間皮細(xì)胞)。2.參考區(qū)間漏出液<100106/L;滲出液>500106/L。3.臨床意義積液中出現(xiàn)少量紅細(xì)胞,常常因穿刺損傷出血所致,因此積液中出現(xiàn)少量的紅細(xì)胞對(duì)滲出液和漏出液的鑒別意義不大;若積液中出現(xiàn)大量的紅細(xì)胞,則提示為出血性滲出液,常見于惡性腫瘤、結(jié)核病等。漿膜腔積液細(xì)胞增高的臨床意義見有核細(xì)胞分類計(jì)數(shù)。,三、顯微鏡檢驗(yàn),,4.質(zhì)量保證(1)標(biāo)本送檢應(yīng)及時(shí),以免積液凝固或細(xì)胞破壞而引起的結(jié)果不準(zhǔn)確。(2)進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí),應(yīng)將積液標(biāo)本充分混勻,否則影響計(jì)數(shù)結(jié)果。(3)若因穿刺損傷引起血性積液,在做白細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)應(yīng)進(jìn)行校正,校正公式為白細(xì)胞/L(校正)=積液白細(xì)胞/L-5.方法學(xué)評(píng)價(jià)與腦脊液細(xì)胞計(jì)數(shù)基本相同。,,三、顯微鏡檢驗(yàn),,(二)有核細(xì)胞分類計(jì)數(shù)1.計(jì)數(shù)方法(1)直接分類法細(xì)胞計(jì)數(shù)的同時(shí),在高倍鏡下根據(jù)細(xì)胞核的形態(tài),將單個(gè)核細(xì)胞(包括淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、間皮細(xì)胞)數(shù)與多個(gè)核細(xì)胞數(shù)記錄下來,最后用百分比表示。若白細(xì)胞<150106/L,可不進(jìn)行分類計(jì)數(shù)。(2)染色分類法若直接分類區(qū)分細(xì)胞較難時(shí),可將積液離心,取沉淀進(jìn)行涂片染色,油鏡下分類。此時(shí)若有異常細(xì)胞,應(yīng)另行描述報(bào)告。2.參考區(qū)間漏出液<100106/L;滲出液>500106/L。3.臨床意義漏出液一般以淋巴細(xì)胞及間皮細(xì)胞為主;滲出液根據(jù)病因、病情不同而變化,積液中有核細(xì)胞分類及臨床意義見下表。,三、顯微鏡檢驗(yàn),,積液中有核細(xì)胞分類及臨床意義,三、顯微鏡檢驗(yàn),,4.質(zhì)量保證(1)積液進(jìn)行離心時(shí),速度不能過快,以免影響細(xì)胞形態(tài)。(2)用玻片離心沉淀或細(xì)胞室沉淀法收集細(xì)胞效果更好。(3)涂片固定時(shí)間不宜過長(zhǎng),固定溫度不宜過高。5.方法學(xué)評(píng)價(jià)直接分類法操作簡(jiǎn)單,但結(jié)果準(zhǔn)確性較低;染色分類法雖操作復(fù)雜,但結(jié)果準(zhǔn)確性好,且較容易發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞。,三、顯微鏡檢驗(yàn),,(三)其他1.寄生蟲乳糜樣積液離心后沉淀物中可檢查有無微絲蚴;阿米巴積液可檢查有無阿米巴滋養(yǎng)體;包蟲病患者積液中可檢查有無棘球蚴頭節(jié)和小鉤。2.膽固醇結(jié)晶積液中出現(xiàn)膽固醇結(jié)晶可見于陳舊性胸腔積液脂肪變性及膽固醇性胸膜炎積液。,四、黏蛋白定性試驗(yàn),,(一)檢查方法1.原理漿膜間皮細(xì)胞在炎癥刺激下分泌黏蛋白增加,黏蛋白是一種酸性糖蛋白,等電點(diǎn)為PH30~PH50,在稀乙酸溶液中可以產(chǎn)生白色云霧狀沉淀,即RIVALTA反應(yīng)。2.簡(jiǎn)要操作100ML蒸餾水+01ML冰乙酸→逐滴加積液至稀乙酸溶液中→黑色背景下觀察結(jié)果。,四、黏蛋白定性試驗(yàn),,(二)質(zhì)量保證1.球蛋白不溶于水且可呈云霧狀混濁,若積液中球蛋白含量增高,可引起假陽性。2.試驗(yàn)時(shí),冰乙酸與蒸餾水應(yīng)充分混勻,且應(yīng)在黑色背景下觀察結(jié)果。3.積液中細(xì)胞數(shù)目較多時(shí),應(yīng)將積液離心后取上清液進(jìn)行試驗(yàn)。,四、黏蛋白定性試驗(yàn),,(三)方法學(xué)評(píng)價(jià)黏蛋白定性試驗(yàn)RIVALTATEST是一種簡(jiǎn)單的黏蛋白過篩試驗(yàn),簡(jiǎn)便、快速,不需特殊儀器和設(shè)備,臨床實(shí)驗(yàn)室常用,能粗略的區(qū)分漏出液和滲出液。要判斷積液的性質(zhì)還需做蛋白質(zhì)定量、蛋白質(zhì)電泳分析等其他實(shí)驗(yàn)室檢查。,四、黏蛋白定性試驗(yàn),,(四)參考區(qū)間漏出液陰性;滲出液陽性。(五)臨床意義滲出液中因含較多的黏蛋白,所以RIVALTA試驗(yàn)呈陽性;漏出液呈陰性,但腔內(nèi)漏出液經(jīng)長(zhǎng)期
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