簡(jiǎn)介：BK病毒（BKVIRUS，BKV）隸屬于多瘤病毒（POLYOMAVIRUS），是導(dǎo)致腎移植術(shù)后移植物腎病的重要危險(xiǎn)因素之一。自上世紀(jì)九十年代以來(lái)，隨著腎移植手術(shù)的廣泛開(kāi)展，由BK病毒感染導(dǎo)致移植物功能受損、進(jìn)展為BK病毒性腎?。˙KVIRUSNEPHROPATHYBKVN）而導(dǎo)致移植物丟失的病例報(bào)道逐漸增多。根據(jù)國(guó)內(nèi)外研究顯示，腎移植受者中有1％～5％的人會(huì)發(fā)生BKVN，其中大約50導(dǎo)致移植腎失功，由此引起了移植醫(yī)生及學(xué)者的高度重視。解放軍309醫(yī)院器官移植研究所前期針對(duì)腎移植術(shù)后BKV感染的研究結(jié)果顯示單中心腎移植術(shù)后BKV感染和BKVN的發(fā)病率與國(guó)內(nèi)外研究數(shù)據(jù)基本一致，由此顯示了BKV感染在腎移植術(shù)后普遍存在。本課題研究的目的是應(yīng)用器官移植研究所自主研發(fā)的BK病毒核酸定量檢測(cè)試劑盒（PCR熒光探針?lè)ǎz測(cè)活體腎移植術(shù)后受者BKV感染的發(fā)病情況，研究活體腎移植術(shù)后受者BKV感染流行病學(xué)特征。分析活體腎移植術(shù)后BKV感染和進(jìn)展為BKVN的危險(xiǎn)因素。根據(jù)制定的入組標(biāo)準(zhǔn)選擇2012年2月1日至2013年1月31日在解放軍309醫(yī)院器官移植研究所行活體腎移植術(shù)的43例受者作為研究對(duì)象，供、受者分別在移植術(shù)前行血液BKV檢測(cè)。受者在移植術(shù)后第05、1、3、6、9、12和15個(gè)月定期采集尿液和外周血（PERIPHERALBLOOD，PB）標(biāo)本，應(yīng)用BK病毒核酸定量檢測(cè)試劑盒檢測(cè)尿液和血液標(biāo)本中BKVDNA載量，記錄檢測(cè)結(jié)果。并對(duì)具備指證的移植術(shù)后受者行移植腎穿刺活檢（在B超引導(dǎo)下），對(duì)移植腎進(jìn)行病理學(xué)診斷（普通染色及免疫組織化學(xué)染色）。同時(shí)監(jiān)測(cè)受者的血清肌酐值和免疫抑制劑藥物濃度。將入選研究對(duì)象按照尿液BKV陽(yáng)性（病毒尿癥VIRURIA）、血液BKV陽(yáng)性（病毒血癥，VIREMIA）和病理學(xué)確診BKVN分為三組，分別統(tǒng)計(jì)記錄性別、年齡、術(shù)后并發(fā)糖尿?。≒TDM）、急性排斥反應(yīng)ACUTEREJECTION，AR、術(shù)后肺部感染（PNEUMONIA）以及術(shù)前免疫誘導(dǎo)方案和術(shù)后免疫抑制方案等資料，對(duì)影響活體腎移植術(shù)后BKV感染的相關(guān)危險(xiǎn)因素進(jìn)行分析。43例活體腎移植術(shù)后受者經(jīng)過(guò)平均15個(gè)月（12～18個(gè)月）的隨訪監(jiān)測(cè)，我們發(fā)現(xiàn)20例受者尿液BKVDNA陽(yáng)性，發(fā)生率為465％；6例受者血液BKVDNA陽(yáng)性，發(fā)生率為140％；1例受者經(jīng)移植腎穿刺活檢病理診斷為BKVN，發(fā)生率為23％。術(shù)后第6個(gè)月是病毒尿癥和病毒血癥發(fā)生率最高的時(shí)間點(diǎn)。應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)包括性別、術(shù)前BKV血癥、免疫誘導(dǎo)方案、術(shù)后并發(fā)糖尿病、急性排斥反應(yīng)、移植腎功能延遲恢復(fù)（DGF）和術(shù)后肺部感染等因素與活體腎移植術(shù)后BK病毒感染無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)性（P005）；FK506與活體腎移植術(shù)后病毒血癥的發(fā)生存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，術(shù)后服用FK506與BKV血癥的發(fā)生呈正相關(guān)關(guān)系（R0319P0037）。對(duì)比解放軍309醫(yī)院器官移植研究所前期的研究，我們可以看出活體腎移植術(shù)后BK病毒血癥的發(fā)生率較尸體腎移植低，病毒尿癥的發(fā)生率相似；BKVN的發(fā)生率較尸體腎移植低。術(shù)后第6個(gè)月是病毒感染的高發(fā)時(shí)段，需密切監(jiān)測(cè)尿液和血液中BKVDNA載量的變化，及時(shí)對(duì)BK病毒血癥受者進(jìn)行臨床干預(yù)。服用FK506為主的免疫抑制劑方案可能是活體腎移植術(shù)后BKV血癥的發(fā)生和進(jìn)展為BKVN的免疫相關(guān)危險(xiǎn)因素。

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多狂犬病病毒不同毒株的生物學(xué)特性和狂犬病暴露后免疫動(dòng)物模型研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：人感染禽流感病毒AVIANINFLUENZAVIRUSES，AIVS的事件近年來(lái)報(bào)道愈加頻繁。自從禽流感病毒H5N1于1997年被報(bào)道能夠感染并致人死亡以來(lái)，已在15個(gè)國(guó)家造成658人感染，病死率近60％禽流感病毒H7N7也于2003年在荷蘭引起1人死亡其他禽流感病毒如H9N2、H7N3等感染人事件在香港、加拿大等地也有報(bào)道。2013年初，禽流感病毒H7N9人感染病例又在我國(guó)東南部出現(xiàn)，截止2014年2月28日H7N9已經(jīng)造成375人感染，115人死亡。因此，我國(guó)禽間AIVS感染及人群AIVS感染狀況是備受關(guān)注的科學(xué)問(wèn)題。進(jìn)行H7N9禽流感病毒的現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查，檢測(cè)方法是關(guān)鍵一環(huán)。為了選擇能夠應(yīng)用于現(xiàn)場(chǎng)H7N9禽流感病毒的快速、高效的檢測(cè)方法，我們對(duì)5種用于檢測(cè)人甲型流感感染的商品化試劑盒（LIFETECHNOLOGIESVETMAXTMGOLDSIVDETECTIONKIT、QUIDELMOLECULARINFLUENZAABASSAY、REMELXPECTFLUABASSAY、QUIDELQUICKVUEINFLUENZAASSAY以及QUIDELSOFIAINFLUENZAABASSAY進(jìn)行了評(píng)價(jià)。首先從江蘇省無(wú)錫市和南京市采集的健康活禽肛拭子樣本提取RNA，用世界衛(wèi)生組織WLDHEALTHGANIZATION，WHO推薦的實(shí)時(shí)熒光定量PCRQREALTIMEPCR，QRTPCRINFLUENZAAASSAY和H7N9ASSAY進(jìn)行甲型流感病毒和禽流感病毒H7N9檢測(cè)，篩選出27個(gè)H7N9陽(yáng)性標(biāo)本、70個(gè)H7N9及甲型流感陰性標(biāo)本。然后對(duì)這97個(gè)標(biāo)本使用上述5種試劑盒進(jìn)行盲法檢測(cè)以及WHOQRTPCRH7N9ASSAY的復(fù)核。檢測(cè)時(shí)，根據(jù)試劑盒的不同試驗(yàn)原理，核酸分子檢測(cè)方法每種重復(fù)3次，抗原檢測(cè)方法每種重復(fù)2次。最后以WHOQRTPCRH7N9ASSAY作金標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算這幾種方法的敏感度和特異度及其可信區(qū)間CONFIDENCEINTERVAL，CI。結(jié)果1WHOQRTPCRH7N9ASSAY第一輪和第二輪結(jié)果有很好的一致性。2QUIDELQUICKVUEINFLUENZAASSAY對(duì)97份標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果全部顯示陰性。其他四種試驗(yàn)方法均有很好的特異度96100％。3LIFETECHNOLOGIESVETMAXTMGOLDSIVDETECTIONKIT特異度最高，為100％95％CI087100，假陽(yáng)性率4％95％CI112％。QUIDELMOLECULARINFLUENZAABASSAY敏感度較高，達(dá)85％95％CI6696％，假陽(yáng)性率3％95％CI010％。為掌握AIVS在無(wú)錫地區(qū)家禽中的感染狀況及其遺傳進(jìn)化特征，我們于2013年7月12月每月在無(wú)錫市活禽交易市場(chǎng)和家禽養(yǎng)殖場(chǎng)的家禽中采集活禽及其相關(guān)環(huán)境拭子標(biāo)本，以拭子標(biāo)本提取的RNA為模板，運(yùn)用WHOQRTPCRINFLUENZAAASSAY對(duì)樣品進(jìn)行甲型流感病毒篩查，對(duì)篩查陽(yáng)性標(biāo)本采用一步法反轉(zhuǎn)錄PCR進(jìn)行流感病毒全基因組PCR擴(kuò)增以及基因克隆和測(cè)序。測(cè)序所得的序列進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析，同時(shí)對(duì)甲型流感病毒陽(yáng)性標(biāo)本進(jìn)行MDCK細(xì)胞及雞胚分離培養(yǎng)和鑒定。結(jié)果1共采集標(biāo)本305份，甲型流感病毒陽(yáng)性率為285％87305。家禽交易市場(chǎng)樣本甲型流感病毒陽(yáng)性率高于養(yǎng)殖場(chǎng)319％VS104％，X2916，P00022共有6個(gè)樣本可進(jìn)行分型，分別為H9N2（3個(gè)），H5N8（1個(gè)），H11N2（1個(gè)）和H5N1（1個(gè)）。系統(tǒng)發(fā)育分析表明H5N8和H11N2有不同程度的重組。3共分離到3株禽流感病毒ACHICKEN1WUXI2013H9N2、ACHICKEN2WUXI2013H9N2和ACHICKEN1WUXI2013H5N1。禽間AIVS感染情況復(fù)雜多樣，而禽類飼養(yǎng)、加工等職業(yè)暴露人群是感染AIVS的高危人群。除了感染AIVS發(fā)病甚至死亡之外，他們當(dāng)中還存在諸如H5、H7、H9、H11等亞型AIVS的隱性感染者。豬能夠感染豬流感病毒SWINEINFLUENZAVIRUS，SIV，也能感染多種禽源和人源流感病毒，在“禽豬人”的種間傳播鏈中扮演著流感病毒中間宿主及多重宿主的作用。研究已證明豬可感染禽流感病毒H5N1和H9N2。廣東、福建、浙江地區(qū)約1％的豬職業(yè)暴露人群中有H9N2感染。因此，為了解禽和豬職業(yè)暴露人群甲型流感病毒的感染狀況，通過(guò)分析感染與一般人口社會(huì)學(xué)情況和流行病學(xué)特征的關(guān)系，確定感染AIVS的危險(xiǎn)因素，為人感染AIVS的防治策略提供依據(jù)，我們?cè)跓o(wú)錫地區(qū)禽（豬）養(yǎng)殖場(chǎng)、屠宰場(chǎng)、市場(chǎng)和散養(yǎng)戶集中地的暴露人群中開(kāi)展了甲型流感病毒血清學(xué)現(xiàn)況調(diào)查。選擇了禽職業(yè)暴露人群498名，豬職業(yè)暴露人群608名和無(wú)職業(yè)暴露的對(duì)照人群165名，共1271名研究對(duì)象。通過(guò)血凝抑制HEMAGGLUTINATIONINHIBITION，HI試驗(yàn)和微量中和MICRONEUTRALIZATION，MN試驗(yàn)對(duì)研究對(duì)象血清標(biāo)本進(jìn)行了人甲型季節(jié)性流感H1N1SEASONALINFLUENZAAH1N1，SH1N1、SH3N2，及禽流感病毒H5N1、H9N2和H7N1血清抗體的檢測(cè)。結(jié)果1禽類職業(yè)暴露、豬職業(yè)暴露和對(duì)照人群的SH1N1HI抗體陽(yáng)性率分別為177％88498，109％66608和273％45165，三組SH1N1HI抗體陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義X22900，DF2，P0000。SH3N2HI抗體陽(yáng)性率分別為173％86498，64％39608和85％14165，三組SH3N2HI抗體陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（X23429，DF2，P0000）。2H5N1在禽類職業(yè)暴露人群當(dāng)中MN滴度≥1∶80和≥1∶160的分別占146％和84％，在豬職業(yè)暴露人群分別占02％和02％，對(duì)照人群中只有1名06％對(duì)象H5N1MN滴度為1∶80，沒(méi)有更高滴度的對(duì)象。多因素LOGISTIC回歸分析表明，工作場(chǎng)所為市場(chǎng)的禽類職業(yè)暴露人員573，95％CI704665、慢性呼吸道疾病128，95％CI161025以及年齡4060歲31，95％CI1566為H5N1MN滴度≥1∶80的危險(xiǎn)因素。3對(duì)H5N1MN滴度≥1∶80的76份血清再做HI試驗(yàn)，最終按WHOMN滴度≥1∶80且HI滴度≥1∶160的確診病例標(biāo)準(zhǔn)判定有3名H5N1感染者，為2名市場(chǎng)賣禽人員和1名規(guī)模化養(yǎng)雞場(chǎng)工人，占禽暴露人群的06％3498，這3人中有2人否認(rèn)近一年內(nèi)有流感樣癥狀。4H9N2試驗(yàn)結(jié)果有5名研究對(duì)象MN滴度≥1∶10，其中2名是市場(chǎng)賣禽人員，2名是市場(chǎng)賣豬肉人員，1名是豬屠宰場(chǎng)工人。H9N2在禽職業(yè)暴露人群和豬暴露人群的MN抗體陽(yáng)性率分別為04％2498和05％3608。對(duì)照人群中未發(fā)現(xiàn)H9N2MN抗體陽(yáng)性者。5H7N1HI試驗(yàn)結(jié)果未發(fā)現(xiàn)抗體滴度≥1∶10者。H7N9禽流感病毒2013年初在中國(guó)東南部出現(xiàn)人感染病例，并在短期內(nèi)呈迅速增長(zhǎng)態(tài)勢(shì)。活禽及相關(guān)環(huán)境（包括活禽市場(chǎng)）暴露被認(rèn)為是感染H7N9的首要危險(xiǎn)因素。在H7N9疫情延續(xù)期間，禽暴露人群是否有隱性感染活禽市場(chǎng)的活禽從業(yè)人員和非活禽從業(yè)人員，以及活禽市場(chǎng)以外的禽類從業(yè)人員相比，感染的風(fēng)險(xiǎn)是否相同感染與社會(huì)人口學(xué)、基礎(chǔ)疾病、職業(yè)行為等因素又有什么樣的關(guān)系基于這些科學(xué)問(wèn)題，我們?cè)跓o(wú)錫地區(qū)禽職業(yè)暴露人群中開(kāi)展了H7N9的血清學(xué)現(xiàn)況調(diào)查，共納入對(duì)象1588名，包括1178名活禽市場(chǎng)從業(yè)人員（300名活禽從業(yè)人員和878名非活禽從業(yè)人員），245名活禽市場(chǎng)以外的活禽從業(yè)人員和165名當(dāng)?shù)亟】稻用?。?shí)驗(yàn)方法選擇火雞血HI檢測(cè)AANHUI12013H7N9血清抗體，HI滴度≥1∶20的再用MN試驗(yàn)復(fù)核，MN滴度≥1∶20的判為陽(yáng)性。為考察可能的交叉反應(yīng)，同時(shí)檢測(cè)SH1N1、SH3N2以及LPAIH7N1抗體，結(jié)果按二分類變量形式納入H7N9感染危險(xiǎn)因素的單因素LOGISTIC回歸檢驗(yàn)。結(jié)果1HI實(shí)驗(yàn)結(jié)果有27份標(biāo)本17％HI抗體滴度≥1∶20，再由MN復(fù)核，結(jié)果有8份標(biāo)本05％MN滴度≥1∶20。這8份抗H7N9中和抗體陽(yáng)性標(biāo)本所對(duì)應(yīng)的研究對(duì)象分別為無(wú)錫7個(gè)區(qū)（縣）8個(gè)不同活禽市場(chǎng)的從業(yè)人員，其中7名活禽從業(yè)人員，1名為非活禽從業(yè)人員，H7N9抗體陽(yáng)性率在活禽市場(chǎng)活禽從業(yè)人員中為23％7300，在非活禽從業(yè)人員中為01％1878。這8名研究對(duì)象均否認(rèn)一年內(nèi)有流感樣癥狀。2所有研究對(duì)象禽流感病毒H7N1的HI結(jié)果均為陰性。3二分類單因素LOGISTIC回歸分析顯示，活禽市場(chǎng)活禽從業(yè)人員感染H7N9的風(fēng)險(xiǎn)高于活禽市場(chǎng)非活禽從業(yè)人員2095，95％CI25717101。性別之間、不同年齡組之間、不同文化程度和不同收入水平之間抗體陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。SH1N1、SH3N2感染與H7N9感染也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)。結(jié)論1LIFETECHNOLOGIESVETMAXTMGOLDSIVDETECTIONKIT和QUIDELMOLECULARINFLUENZAABASSAYS對(duì)活禽肛拭子進(jìn)行禽流感病毒H7N9檢測(cè)的效果與WHO推薦的H7N9QRTPCRASSAY基本一致。2江蘇省無(wú)錫地區(qū)禽間AIVS感染情況復(fù)雜多樣，有H5N1、H5N8、H9N2和H11N2等，H5N8和H11N2很可能是重組毒株。3職業(yè)暴露人群AIVS感染普遍，禽暴露人群中存在較高水平的禽流感病毒H5N1感染以及低水平的H7N9和H9N2感染，豬暴露人群中也存在低水平的H5N1和H9N2感染。這些感染者很可能是隱性或輕癥感染。4工作場(chǎng)所為市場(chǎng)的禽類職業(yè)暴露人員、慢性呼吸道疾病以及年齡4060歲為H5N1的感染危險(xiǎn)因素。5活禽市場(chǎng)的活禽從業(yè)人員感染H7N9的危險(xiǎn)高于活禽市場(chǎng)非活禽從業(yè)人員。因此，禽類職業(yè)暴露人群，特別是市場(chǎng)禽類從業(yè)人群，以及有呼吸道慢性疾病禽類暴露人群是AIVS的防控重點(diǎn)人群。加強(qiáng)活禽市場(chǎng)的管理、環(huán)境消毒和人員防護(hù)是控制AIVS傳播的必要手段。對(duì)禽類和職業(yè)暴露人群AIVS感染狀況進(jìn)行系統(tǒng)、連續(xù)地監(jiān)測(cè)有著重要的公共衛(wèi)生意義。本研究的創(chuàng)新點(diǎn)包括1用HI和MN兩種方法串聯(lián)，證實(shí)了活禽市場(chǎng)禽暴露人群中存在禽流感病毒H7N9隱性感染，而活禽市場(chǎng)以外禽暴露人群中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)H7N9隱性感染2在同一禽暴露人群中發(fā)現(xiàn)多種AIVS隱性感染，包括H5N1、H7N9和H9N2感染3發(fā)現(xiàn)禽暴露人群中禽流感病毒H5N1感染率較高4發(fā)現(xiàn)豬暴露人群中存在低水平的禽流感病毒H5N1和H9N2感染5發(fā)現(xiàn)活禽市場(chǎng)禽間AIVS感染復(fù)雜多樣，并存在重組毒株。本研究的主要局限是血清學(xué)橫斷面調(diào)查無(wú)法確定研究對(duì)象AIVS感染發(fā)生的時(shí)間點(diǎn)，只能證明調(diào)查人群中可能存在既往感染。

簡(jiǎn)介：背景人類腸道病毒ENTEROVIRUSES，EVS型別眾多，通常以無(wú)癥狀的隱性感染為主，但也可引起急性弛緩性麻痹ACUTEFLACCIDPARALYSIS，AFP、腦膜炎或腦炎、手足口病H，F(xiàn)OOTMOUTHDISEASE，HFMD、急性出血性結(jié)膜炎、心肌炎、類感冒病癥等多種疾病，是重要的人類致病病原。EVS基因組全長(zhǎng)約75KB，為單股正鏈RNA，包括5端非編碼區(qū)5NONTRANSLATEDREGION，5NTR，編碼多聚蛋白的單一開(kāi)放讀碼框（OPENREADINGFRAMEF）和3NTR3個(gè)組成部分。1999年，OBERSTE等首次提出了基于EVVP1序列的分子生物學(xué)定型方法。傳統(tǒng)血清學(xué)方法無(wú)法定型的EVS陸續(xù)被鑒定出來(lái)，目前已分離到40多個(gè)新型EVS基因型。其原型株的全基因組多數(shù)已經(jīng)測(cè)序完成，但其他分離株的全基因組序列信息有限。EVS進(jìn)化活躍，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的新型EVS，如EVA76，EVB74，EVC96等，均有點(diǎn)突變和型內(nèi)重組發(fā)生。對(duì)新型EVS全基因組特征的分析，能夠全面掌握毒株的重組和進(jìn)化特點(diǎn)，并為基因組數(shù)據(jù)庫(kù)提供全面的序列信息，對(duì)于分析病毒在地區(qū)及全球的傳播情況提供參考依據(jù)。新型EVS雖然發(fā)現(xiàn)較晚，但已與多起疾病暴發(fā)相關(guān)，如EVA71已在東亞和東南亞地區(qū)引發(fā)數(shù)起HFMD大流行，成為全球的重大公共衛(wèi)生問(wèn)題。另外，EVB75、EVA76和EVA89與2006年印度、西班牙等國(guó)家的病毒性腦炎暴發(fā)有關(guān)。某些新型EVS的感染還表現(xiàn)為發(fā)熱、消化道和或呼吸道癥狀，常常不易鑒別，這給疾病的預(yù)防與早期診治帶來(lái)很大困難。進(jìn)行EVS血清流行病學(xué)研究能夠掌握人群中EVS抗體攜帶情況，了解人群的易感性和免疫水平的動(dòng)態(tài)變化，為疾病的預(yù)防提供參考依據(jù)。目前僅有少數(shù)新型EVS的血清流行病學(xué)研究報(bào)道。研究目的1在前期研究的基礎(chǔ)上，繼續(xù)對(duì)發(fā)現(xiàn)的部分新型EVS山東分離株EVA71C2亞型，EVB74，EVB80，EVB87的全基因組特征進(jìn)行分析2選擇部分新型EVS山東分離株（EVA71C4亞型，EVB87，EVA90），對(duì)健康人群的血清中和抗體水平進(jìn)行檢測(cè)分析。研究方法1對(duì)已經(jīng)鑒定出的新型EVS山東分離株EVA71C2亞型、EVB74、EVB80、EVB87進(jìn)行全基因組序列測(cè)定。2使用BIOEDIT717軟件，對(duì)新型EVS山東分離株與原型株間核苷酸、氨基酸序列相似性進(jìn)行比對(duì)。3采用MEGA40軟件，以鄰位法NEIGHBJOININGMETHOD與同型分離株構(gòu)建P1、P2、P3區(qū)系統(tǒng)發(fā)生樹(shù)，對(duì)新型EVS山東分離株進(jìn)行進(jìn)化重組分析。4使用SIMPLOT351軟件，分析新型EVS山東分離株與同型分離株在基因組中的重組。5選擇部分新型EVS山東分離株EVA71C4亞型，EVB87，EVA90，對(duì)健康人群血清中和抗體水平進(jìn)行檢測(cè)分析。主要結(jié)果1新型EVS全基因組序列特征分析全基因組序列特征分析顯示，EVA74、EVB80、EVB87的非結(jié)構(gòu)蛋白編碼區(qū)均發(fā)現(xiàn)了基因重組的證據(jù)。在該區(qū)域，EVA74山東株與E13和E19原型株序列同源性較高EVB80山東株與E19、E27和E13原型株序列同源性較高EVB87山東株與CVB2、EVB85和EVB98原型株序列同源性較高。EVB80山東株相比其原型株，在衣殼蛋白VP1編碼區(qū)3端有36個(gè)核苷酸插入。插入位點(diǎn)正是不同基因型間衣殼蛋白編碼區(qū)長(zhǎng)度變化的區(qū)域。EVA71C2亞型山東株96200的全基因組序列分析發(fā)現(xiàn)，96200在P1、P2和P3區(qū)與EVA71C2亞型的澳大利亞分離株7FAUS699、臺(tái)灣分離株NCKU9822、TAINAN574698TW1998和PINF754A均在同一分支與類EVA71C2亞型臺(tái)灣分離株200800643僅P1區(qū)在同一分支，在P2和P3區(qū)分屬不同分支。SIMPLOT同源重組分析發(fā)現(xiàn)，在P1、P2和P3區(qū)，96200與7FAUS699、NCKU9822、TAINAN574698TW1998和PINF754A序列相似性均超過(guò)90％與200800643、EVA71原型株BRCR及EVA71山東地方株JN0110的相似性，P1區(qū)明顯高于P2和P3區(qū)。2新型EVS血清流行病學(xué)分析血清流行病學(xué)研究所用標(biāo)本來(lái)自2010年脊髓灰質(zhì)炎病毒中和抗體監(jiān)測(cè)用血清標(biāo)本，標(biāo)本來(lái)自10個(gè)年齡組，共計(jì)390份。EVA71、EVB87和EVA90在人群中的抗體陽(yáng)性率分別為460％、470％和88％。EVA71、EVB87和EVA90在人群中的抗體陽(yáng)性率與年齡關(guān)系較為密切，在7個(gè)月～2歲左右出現(xiàn)最低值，之后逐漸增高。EVA71、EVB87和EVA90在人群中幾何平均滴度GEOMETRICMEANTITERGMT分別為1∶520、1∶402和1∶149，在7個(gè)月～2歲左右出現(xiàn)最低值，在5～14歲學(xué)齡段出現(xiàn)高值。35％的人群EVA71的GMT≥1∶256，符合HFMD實(shí)驗(yàn)室診斷病例的標(biāo)準(zhǔn)。僅有03％的調(diào)查者出現(xiàn)EVA90的GMT≥1∶256，無(wú)調(diào)查者出現(xiàn)EVB87的GMT≥1∶256。主要結(jié)論1本研究對(duì)EVA71C2亞型以及EVB74、EVB80和EVB87型山東地方株進(jìn)行了全基因組序列分析。除EVB74之外，其他均為國(guó)內(nèi)首次報(bào)道的全基因序列。2EVA71C2亞型分離株在1996～1999年間較為保守，根據(jù)現(xiàn)有的基因組數(shù)據(jù)庫(kù)資料未發(fā)現(xiàn)重組的證據(jù)。相比1996～1999年的EVA71C2亞型分離株，2008年臺(tái)灣類EVA71C2亞型分離株200800643已經(jīng)發(fā)生了重組。3EVB74、EVB80、EVB87山東分離株與其他EVB組腸道病毒在P2和P3非結(jié)構(gòu)蛋白編碼區(qū)發(fā)生重組。EVB80的基因組比對(duì)結(jié)果顯示，核苷酸的插入和缺失也是EV結(jié)構(gòu)蛋白基因進(jìn)化的機(jī)制之一。47個(gè)月～2歲兒童EVA71、EVB87和EVA90抗體陽(yáng)性率最低，可能是EV的易感人群。5EVB87可能與某些流行的EVS間存在交叉抗體反應(yīng)，人群中天然形成了EVB87免疫屏障，由此推測(cè)EV87可能不會(huì)引發(fā)大范圍的流行。6EVA90在人群中抗體陽(yáng)性率較低，而全球和國(guó)內(nèi)分離毒株相對(duì)較多，涉及地理范圍廣，需要對(duì)其加強(qiáng)監(jiān)測(cè)。75～14歲年齡組兒童EVA71、EVB87和EVA90中和抗體GMT最高，是感染易發(fā)生的年齡段，應(yīng)加強(qiáng)在學(xué)齡兒童中的預(yù)防工作，必要時(shí)應(yīng)研發(fā)疫苗開(kāi)展預(yù)防接種。

簡(jiǎn)介：目的探討慢性丙型肝炎患者應(yīng)用聚乙二醇干擾素聯(lián)合利巴韋林治療不同病毒學(xué)應(yīng)答模式與療效的關(guān)系及獲得快速和早期病毒學(xué)應(yīng)答的預(yù)測(cè)因素為臨床抗病毒治療療效判定和治療方案的選擇提供依據(jù)。材料和方法81例慢性丙型肝炎患者均給予PEGIFNΑ2A135～180ΜG或PEGIFNΑ2B50～80ΜG每周1次皮下注射利巴韋林800～1200MGD對(duì)所有患者進(jìn)行治療前、治療4周、12周、24周、48周和停藥后至少24周的隨訪詳細(xì)記錄患者的性別、年齡、HCVRNA水平、肝硬化程度、脂肪肝、體重指數(shù)BODYMASSINDEXBMI、糖尿病史、飲酒史、輸血史、既往抗病毒治療史等等。根據(jù)治療情況將患者分為快速病毒學(xué)應(yīng)答RVR組、早期病毒學(xué)應(yīng)答EVR組、無(wú)應(yīng)答NR組、復(fù)發(fā)RL組和持續(xù)病毒學(xué)應(yīng)答SVR組。分析RVR、EVR與不同治療結(jié)果之間的關(guān)系分別應(yīng)用單因素分析和多因素LOGISTIC逐步回歸分析方法分析獲得RVR和EVR的影響和預(yù)測(cè)因素。結(jié)果181例患者中51例629獲得RVR、65例80296獲得EVR、65例802獲得SVR10例123NR6例74RL。2RVR組882獲得SVREVR組908獲得SVR。未獲RVR和EVR的患者16人198其中6人375獲得SVR6人100均未復(fù)發(fā)。三組SVR率的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義X220622P＜005三組的復(fù)發(fā)率的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＞005。3SVR、NR和RL組的RVR率分別為69200P＜005EVR率分別為90800P＜005。三組RVR率及EVR率的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4單因素分析結(jié)果顯示年齡≤40歲HCVRNA載量＜4105IUML無(wú)肝硬化與快速病毒學(xué)應(yīng)答有關(guān)年齡≤40歲HCVRNA載量＜4105IUML無(wú)肝硬化BMI＜24KGM2與早期病毒學(xué)應(yīng)答有關(guān)。將上述指標(biāo)進(jìn)行多因素LOGISTIC逐步回歸分析結(jié)果表明基線HCVRNA載量和肝硬化是預(yù)測(cè)RVR和EVR的獨(dú)立影響因素。結(jié)論1RVR和EVR的獲得是獲得SVR的重要預(yù)測(cè)因素。2RVR和EVR不能預(yù)測(cè)復(fù)發(fā)。3年齡、基線病毒載量、有無(wú)肝硬化和體重指數(shù)與RVR和EVR的獲得密切相關(guān)。基線病毒載量、有無(wú)肝硬化是預(yù)測(cè)RVR和EVR的獨(dú)立因素。

簡(jiǎn)介：廈門大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)F，獨(dú)立完成的研究成果。本人在論文寫作中參考其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表的研究成果，均在文中以適當(dāng)方式明確標(biāo)明，并符合法律規(guī)范和廈門大學(xué)研究生學(xué)術(shù)活動(dòng)規(guī)范試行。另外，該學(xué)位論文為槲課題組的研究成果，獲得‘黼’課題組經(jīng)費(fèi)或?qū)嶒?yàn)室的資助，在‘為鑼嘶’實(shí)驗(yàn)室完成。請(qǐng)?jiān)谝陨侠ㄌ?hào)內(nèi)填寫課題或課題組負(fù)責(zé)人或樊驗(yàn)室名稱，未有此項(xiàng)聲明內(nèi)容的，可以不作特別聲明。聲明人簽名刃L上年6月R日廈門大學(xué)學(xué)位論文著作權(quán)使用聲明JIFLLILLLLILTFLIJIIIIIY2073763本人同意廈門大學(xué)根據(jù)中華人民共和國(guó)學(xué)位條例暫行實(shí)施辦法

簡(jiǎn)介：樹(shù)突狀細(xì)胞特異性細(xì)胞間黏附分子3結(jié)合非整合素（DENDRITICCELLSPECIFICINTERCELLULARADHESIONMOLECULE3GRABBINGNONINTERGRIN，DCSIGN）是樹(shù)突狀細(xì)胞（DENDRITICCELLS，DCS）表面的一種新型凝集素受體1，在調(diào)節(jié)樹(shù)突狀細(xì)胞黏附、遷移，激活初始T淋巴細(xì)胞，啟動(dòng)免疫應(yīng)答，以及病原體的免疫逃逸等多方面發(fā)揮重要作用26，是結(jié)核病干預(yù)策略中的新靶標(biāo)。DCSIGN是DCS表面結(jié)核桿菌的主要受體。結(jié)核桿菌可通過(guò)其胞壁成分一帶甘露糖帽的脂阿拉伯甘露聚糖（MANNOSECAPPEDLIPOARABINOMANNAN，MANLAM）與DCSIGN分子結(jié)合，抑制DCS成熟710。DCS在抗結(jié)核免疫應(yīng)答中發(fā)揮著中心作用，它是唯一能激活初始T細(xì)胞，啟動(dòng)初始免疫應(yīng)答的抗原提呈細(xì)胞6，8。而DCS要發(fā)揮活化初始T細(xì)胞的作用，其前提是必須成熟。RNA干擾（RNAINTERFERENCE，RNAI）是一種可高效、特異地下調(diào)目標(biāo)基因的表達(dá)并在基因功能研究和基因治療領(lǐng)域有著廣闊的應(yīng)用前景的技術(shù)11，12。慢病毒表達(dá)載體是RNAI常用的載體之一，能將自身攜帶的片斷整合入宿主細(xì)胞基因組，在哺乳動(dòng)物各類細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)小分子干擾RNA（SMALLINTERFERINGRNA，SIRNA），長(zhǎng)期抑制基因表達(dá)13。本研究根據(jù)人DCSIGN基因的MRNA序列選擇4條靶序列，設(shè)計(jì)合成雙鏈DNA，并經(jīng)PCR擴(kuò)增、DNA測(cè)序以及外源性篩選，確定RNAI有效靶序列，構(gòu)建并包裝產(chǎn)生人DCSIGN基因RNAI慢病毒表達(dá)載體。利用構(gòu)建成功RNAI慢病毒表達(dá)載體轉(zhuǎn)染人外周血單核細(xì)胞誘導(dǎo)分化而來(lái)的DCS，通過(guò)流式細(xì)胞儀、RTPCR以及WESTERNBLOT檢測(cè)DCS表面DCSIGN分子表達(dá)水平變化，流式細(xì)胞儀檢測(cè)DCS表面成熟標(biāo)志物HLADR及CD86水平，ELISA檢測(cè)DCS培養(yǎng)上清液中IL12、IL10分泌水平，混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)檢測(cè)DCS刺激T淋巴細(xì)胞增殖的能力。通過(guò)以上研究以明確慢病毒表達(dá)載體介導(dǎo)的RNA干擾對(duì)DCS表面DCSIGN分子表達(dá)水平的抑制程度以及對(duì)DCS成熟度和功能的影響。研究結(jié)果PCR擴(kuò)增和DNA測(cè)序結(jié)果證實(shí)，DCSIGN核苷酸鏈序列插入正確，外源性篩選確定兩條有效靶序列。選擇其中一條有效靶序列包裝慢病毒，產(chǎn)生濃縮慢病毒懸液的滴度為1109TUML。利用人DCSIGN基因RNAI慢病毒表達(dá)載體轉(zhuǎn)染DCS，流式細(xì)胞術(shù)、PCR及WB檢測(cè)均提示DCS表面DCSIGN表達(dá)水平降低，流式細(xì)胞儀顯示各組間成熟標(biāo)志物HLADR及CD86差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，ELISA結(jié)果顯示各組DCS培養(yǎng)上清液中IL10、IL12水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)結(jié)果顯示各組DCS誘導(dǎo)CD4T淋巴細(xì)胞增殖能力差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。研究結(jié)論本研究建立了一種穩(wěn)定、有效的轉(zhuǎn)染人外周血單核細(xì)胞來(lái)源的DCS的方法，并能在體外細(xì)胞水平有效抑制DCSIGN表達(dá)，慢病毒表達(dá)載體轉(zhuǎn)染后的DCS能保持其原有的形態(tài)、生長(zhǎng)特性、成熟表型及免疫學(xué)功能。這為我們后續(xù)研究人DCSIGN分子水平調(diào)控對(duì)下游抗結(jié)核免疫應(yīng)答功能的影響奠定了基礎(chǔ)，對(duì)進(jìn)一步明確人DCSIGN分子在結(jié)核病發(fā)病機(jī)制中的作用也有幫助，為結(jié)核病以及其它相關(guān)疾病的預(yù)防和治療提供了新的思路。

簡(jiǎn)介：目的了解重慶地區(qū)兒童巨細(xì)胞病毒CMV流行情況及感染特征并通過(guò)對(duì)重慶地區(qū)嬰兒CMV肝炎病例的回顧性分析以探討嬰兒CMV肝炎的臨床特點(diǎn)從而為CMV感染的防治提供資料。方法對(duì)2008年在重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院臨檢中心應(yīng)用ELISA法行CMV血清學(xué)檢查的結(jié)果進(jìn)行全面調(diào)查應(yīng)用計(jì)數(shù)資料的X2檢驗(yàn)方法從性別、年齡組等方面進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。并對(duì)我院住院確診為CMV肝炎的87例嬰兒的臨床資料進(jìn)行回顧性分析。結(jié)果12008年重慶地區(qū)兒童CMV總體感染率409％。其中331％的兒童CMVIGG陽(yáng)性提示有既往感染的血清學(xué)證據(jù)。2重慶地區(qū)兒童CMV的流行總體男女分布有差異異P＜005但不同年齡段CMV活動(dòng)性感染的幾率并無(wú)性別差異P＞005。1～14天、15～28天、29天～3月、4～6月、7～12月、1～3歲、4～6歲、7～10歲和11～18歲各年齡段CMV新發(fā)感染率分別為17％、25％、290％、338％、53％、22％、10％、13％和18％。累計(jì)感染率分別為376％、317％、447％、554％、494％、366％、297％、234％和234％。新發(fā)感染率和累計(jì)感染率各年齡段統(tǒng)計(jì)均有差異P＜005。1368例住院檢查發(fā)現(xiàn)CMV活動(dòng)性感染兒童中8041368例588％來(lái)自農(nóng)村5641368例412％來(lái)自市區(qū)?？梢?jiàn)農(nóng)村CMV活動(dòng)性感染兒童多于市區(qū)。3嬰兒CMV肝炎中7287例828％以黃疸為首發(fā)癥狀就診臨床主要表現(xiàn)還包括肝脾腫大及肝功能異常；合并肺炎4787例54O％膽道閉鎖2387例264％先天性心臟病1424例583％腹股溝疝987例103％BAEP異常828例286％。結(jié)論12008年重慶地區(qū)兒童CMV總體感染率409％高于我國(guó)山東濟(jì)南≤20歲人群的血清陽(yáng)性率；與國(guó)外比較明顯低于非洲部分地區(qū)＜10歲人群的血清陽(yáng)性率但高于英美等發(fā)達(dá)國(guó)家＜15歲人群的血清陽(yáng)性率。其中331％有既往感染的血清學(xué)證據(jù)低于英美等發(fā)達(dá)國(guó)家成人既往感染的血清陽(yáng)性率。2重慶地區(qū)兒童CMV的流行總體男女分布有差異但不同年齡段CMV活動(dòng)性感染的幾率并無(wú)性別差異。CMV新發(fā)感染多集中于＜6月齡的嬰兒其中29天～6月為CMV感染的高發(fā)年齡段。農(nóng)村兒童CMV活動(dòng)性感染高于市區(qū)。3嬰兒CMV肝炎臨床表現(xiàn)多樣大部分以黃疸為首發(fā)癥狀就診臨床主要表現(xiàn)還包括肝脾腫大及肝功能異常常合并其它系統(tǒng)損害或先天性畸形。

簡(jiǎn)介：目的研究病毒性腦膜炎腦炎的病原學(xué)及其臨床特點(diǎn)。方法收集2011年6月至11月在福建省立醫(yī)院兒科住院并診斷為病毒性腦炎或病毒性腦膜炎的62例患兒為研究對(duì)象。采用分子生物學(xué)方法鑒定病毒類型并根據(jù)病毒分離結(jié)果分為腸道病毒性腦膜炎腦炎ENTEROVIRUSMENINGITISENCEPHALITISEVME組N24與非EVME組N38。根據(jù)治療方法的不同EVME與非EVME分別再分組為治療組和對(duì)照組。采用回顧性分析方法比較EVME與非EVME的臨床特征并觀察治療效果。結(jié)果62例病毒性腦膜炎腦炎VIRUSMENINGITISENCEPHALITISVME中EVME以腸道致細(xì)胞病變?nèi)斯聝翰《綞NTERICCYTOPATHOGENICHUMANPHANVIRUSECHO30型22例感染為主其中3例是ECHO30與柯莎奇病毒BCOXSACKIEVIRUSBCOXB型混合感染其他ECHO61例、ECHO141例。EVME與非EVME發(fā)病年齡主要分布在學(xué)齡前期P005。EVME組無(wú)重癥患者非EVME組重癥8例P005。非EVME治療組熱退、頭痛緩解時(shí)間及住院時(shí)間比對(duì)照組短P結(jié)論VME致病的腸道病毒ENTEROVIRUSEV主要為ECHO30易感年齡為學(xué)齡前期男性發(fā)病率高以中度發(fā)熱為主。EV引起的顱內(nèi)感染MRI異常率明顯增高表現(xiàn)為腦膜受累未見(jiàn)腦實(shí)質(zhì)損害。EVME可引起血清CRP的升高。激素治療對(duì)于EVME可能是不必要的。

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多核苷（酸）類似物治療慢性乙型肝炎發(fā)生病毒學(xué)突破的預(yù)測(cè)因素研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：近年來(lái)，隨著登革熱流行的日益嚴(yán)重，對(duì)登革病毒進(jìn)行有效的防治是全世界共同關(guān)注的問(wèn)題。本課題以登革病毒外膜基因DⅢ區(qū)EDⅢ為研究對(duì)象，進(jìn)行診斷試劑盒的研制，同時(shí)構(gòu)建了3種類型的登革疫苗進(jìn)行免疫保護(hù)的研究。一、14型登革病毒外膜蛋白基因DⅢ區(qū)的表達(dá)及重組抗原在血清學(xué)診斷中的應(yīng)用在大腸桿菌BL21DE3中分別克隆、表達(dá)14型登革病毒外膜蛋白基因DⅢ區(qū)，重組蛋白用電洗脫法進(jìn)行純化。純化后的DEN14型重組蛋白分別應(yīng)用于間接ELISA法檢測(cè)相應(yīng)型別DENIGG抗體，以IFA為標(biāo)準(zhǔn)，其敏感性為100％；DEN1型重組蛋白應(yīng)用于捕獲ELISA法檢測(cè)DEN1型感染者IGM抗體，不僅能檢出所有IFA法IGM陽(yáng)性的標(biāo)本，而且還檢出了2份IFA法未能檢出的早期標(biāo)本DEN1型重組蛋白應(yīng)用于夾心ELISA法檢測(cè)DEN1型感染者IGMIGG總抗體，其敏感性為826％；以IFA為標(biāo)準(zhǔn)，三種方法的特異性均為100％。純化的重組蛋白混和后作為捕獲抗原制成金標(biāo)試劑條，應(yīng)用于登革病毒感染者的檢測(cè)，與PANBIO公司的金標(biāo)條檢測(cè)結(jié)果相比，兩者無(wú)顯著性差別。二、登革疫苗的研制及免疫保護(hù)作用分析114型登革病毒重組亞單位疫苗的研制及免疫原性分析利用連接肽GLYGLYSERGLYSCR將DEN1型與2型，3型與4型的EDⅢ基因片段連接在一起，構(gòu)建了EDⅢ融合基因的原核表達(dá)載體，在大腸桿菌中表達(dá)融合重組蛋白。重組蛋白經(jīng)高效液相色譜HPLC純化后免疫BALBC鼠，采用中和實(shí)驗(yàn)法測(cè)定血清DEN14型中和抗體效價(jià)，其滴度分別為1349、1453、1247、1384。免疫血清分別與14型的登革病毒作用后，攻擊乳鼠，免疫血清對(duì)乳鼠保護(hù)率分別為100％、100％、83％、83％。2登革病毒EDⅢ融合基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建及DNA在小鼠中的免疫原性觀察構(gòu)建DEN12型、DEN34型EDⅢ融合基因的真核表達(dá)載體，用間接免疫熒光法和WESTERNBLOT法檢測(cè)重組真核表達(dá)載體在BHK一2L細(xì)胞中的表達(dá)情況。結(jié)果表明，重組真核表達(dá)載體能在BHK21細(xì)胞中表達(dá)目的蛋白。DNA質(zhì)粒免疫BALBC鼠，采用中和實(shí)驗(yàn)法測(cè)定血清DEN14中和抗體效價(jià)，其滴度分別為1247、1269、1134、1160。3EDⅢ融合蛋白及DNA質(zhì)粒聯(lián)合免疫小鼠誘生中和抗體的分析將DⅢ融合重組蛋白及含有EDⅢ融合基因的DNA質(zhì)粒單獨(dú)或聯(lián)合免疫小鼠，觀察其對(duì)小鼠的免疫原性，比較誘生中和抗體的能力。結(jié)果表明，聯(lián)合免疫組產(chǎn)生的中和抗體效價(jià)顯著高于重組蛋白免疫組及DNA免疫組，同時(shí)蛋白免疫組與DNA免疫組比較，中和抗體也表現(xiàn)為增高。4登革病毒EDⅢ區(qū)融合基因重組腺病毒載體的構(gòu)建及鑒定采用腺病毒表達(dá)系統(tǒng)，構(gòu)建DEN12型、DEN34型EDⅢ融合基因的重組腺病毒表達(dá)載體，并且在293A細(xì)胞系中包裝成具有感染性的重組腺病毒，病毒滴度可達(dá)10PFUML。重組腺病毒感染哺乳動(dòng)物細(xì)胞后，用間接免疫熒光法和WESTERNBLOT法檢測(cè)重組蛋白在細(xì)胞中的表達(dá)情況，結(jié)果顯示，重組腺病毒感染哺乳動(dòng)物細(xì)胞后能夠表達(dá)目的蛋白。

簡(jiǎn)介：目的旨在利用CIPHERGEN公司的蛋白質(zhì)芯片飛行時(shí)間質(zhì)譜儀系統(tǒng)，選擇弱陽(yáng)離子交換芯片WCAKCATIONICEXCHANGERWCX，CM10芯片為WCX芯片表面加上一層疏水膜，可以結(jié)合更多的蛋白，故實(shí)驗(yàn)中選用CM10芯片，檢測(cè)HBV相關(guān)慢性肝炎、肝炎肝硬化及原發(fā)性肝癌患者血清的蛋白質(zhì)表達(dá)譜，分析各組蛋白質(zhì)圖譜差異，以期發(fā)現(xiàn)慢性肝病進(jìn)展過(guò)程中不同階段的差異性蛋白。并對(duì)各組蛋白質(zhì)圖譜進(jìn)行聚類分析，通過(guò)決策樹(shù)建立疾病預(yù)測(cè)模型。為進(jìn)一步明確差異蛋白的特性及功能，將其分離、純化后在芯片上進(jìn)行原位酶解，對(duì)差異蛋白進(jìn)行鑒定及功能分析，以探討其在乙型肝炎病毒相關(guān)慢性肝病中的作用，早期發(fā)現(xiàn)疾病的進(jìn)展，尋找阻斷慢性肝炎向肝硬化、肝癌發(fā)展的新思路。實(shí)驗(yàn)方法采用美國(guó)CIPHERGENBIOSYSTEMS公司的蛋白質(zhì)生物芯片表面增強(qiáng)激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜SELDITOFMS技術(shù)和PBSⅡC型蛋白質(zhì)芯片閱讀機(jī)，通過(guò)弱陽(yáng)離子交換芯片CM10對(duì)32例正常人、85例HBV相關(guān)慢性肝炎、30例HBV相關(guān)肝硬化和26例HBV相關(guān)肝癌術(shù)前患者的血清分別進(jìn)行檢測(cè)并讀取數(shù)據(jù)，獲得血清蛋白指紋圖譜，對(duì)得到的蛋白質(zhì)圖譜，使用CIPHERGENBIOSYSTEMS軟件311版本及BIOMARKERWIZARD軟件進(jìn)行分析、比較，以尋找慢性肝病進(jìn)展過(guò)程中的差異蛋白。對(duì)正常、慢性肝炎、肝硬化及原發(fā)性肝癌患者血清圖譜進(jìn)行聚類分析，通過(guò)決策樹(shù)建立疾病預(yù)測(cè)模型。進(jìn)一步將肝癌患者及對(duì)照組血清通過(guò)U9、U1處理后，上離子交換柱，用不同PHTRIS緩沖液洗脫，收集各組分；用NP20芯片挑選含有特征峰的組分，然后用CM10芯片驗(yàn)證含有特征峰的組分，芯片原位酶解后，PMF質(zhì)譜鑒定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果由CM10芯片共檢測(cè)到294個(gè)有效的蛋白質(zhì)波峰，其中MZ值在1000～10000DA之間有253個(gè)；10000～20000DA之間有23個(gè)；20000～30000DA之間有18個(gè)。經(jīng)分析，在正常對(duì)照、HBV相關(guān)慢性肝炎、肝硬化和肝癌組之間有18個(gè)差異蛋白峰P005，其中差異最顯著的質(zhì)荷比為5805DA的蛋白質(zhì)峰在由正常對(duì)照、慢性肝炎、肝硬化至肝癌的疾病進(jìn)展過(guò)程中表達(dá)量呈遞增趨勢(shì)，在肝癌組表達(dá)最高；質(zhì)荷比為13260DA的蛋白質(zhì)峰在這個(gè)過(guò)程中呈遞減趨勢(shì)，在肝癌組表達(dá)最低。通過(guò)聚類分析同樣發(fā)現(xiàn)質(zhì)荷比為5805DA的蛋白在正常、慢性肝炎、肝硬化和肝癌組間呈正相關(guān)，在肝癌組密度即強(qiáng)度最高。通過(guò)決策樹(shù)建立疾病預(yù)測(cè)模型，對(duì)乙型肝炎病毒相關(guān)慢性肝病預(yù)測(cè)的平均正確率達(dá)739％。對(duì)差異最顯著的質(zhì)荷比為5805DA的蛋白通過(guò)離子交換柱分離、純化，在芯片上進(jìn)行原位酶解，PMF質(zhì)譜鑒定，SWISSPROT數(shù)據(jù)庫(kù)搜庫(kù)檢索，該蛋白鑒定為硫酸軟骨素合酶Ⅱ，屬于軟骨素N乙酰半乳糖胺基轉(zhuǎn)移酶家族。結(jié)論1正常對(duì)照、乙型肝炎病毒相關(guān)慢性肝炎、肝硬化與肝癌組間血清蛋白圖譜表達(dá)差異顯著。2正常對(duì)照、乙型肝炎病毒相關(guān)慢性肝炎、肝硬化與肝癌組間有18個(gè)差異蛋白質(zhì)峰，其中質(zhì)荷比為5805DA的蛋白峰在慢性肝炎、肝硬化、肝癌血清中含量逐漸增高。3質(zhì)荷比為5805DA的蛋白經(jīng)質(zhì)譜鑒定為硫酸軟骨素合酶Ⅱ。4硫酸軟骨素合酶Ⅱ可能在乙型肝炎病毒相關(guān)慢性肝炎、肝硬化及肝癌的發(fā)病過(guò)程中發(fā)揮重要作用，可望成為疾病進(jìn)程中的血清學(xué)分子標(biāo)記。5通過(guò)決策樹(shù)建立疾病預(yù)測(cè)模型，對(duì)乙型肝炎病毒相關(guān)慢性肝病預(yù)測(cè)的平均正確率達(dá)739％。

簡(jiǎn)介：分類號(hào)密級(jí)UDC編號(hào)學(xué)位論文安徽地區(qū)卡波氏肉瘤相關(guān)皰疹病毒流行病學(xué)研究SEROPREVALENCEOFKAPOSI’SSARCOMAASSOCIATEDHERPESVIRUSINANHUIPROVINCE張瑩指導(dǎo)教師姓名王林定教授安徽醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)名稱微生物學(xué)提交論文日期2013年4月論文答辯日期2013年5月學(xué)位授予單位和日期安徽醫(yī)科大學(xué)2013年6月答辯委員會(huì)主席評(píng)閱人2013年05月安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文3學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確說(shuō)明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名日期學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人完全了解安徽醫(yī)科大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文并向國(guó)家主管部門或其指定機(jī)構(gòu)送交論文的電子版和紙質(zhì)版，有權(quán)允許論文進(jìn)入學(xué)校圖書館被查閱，有權(quán)將學(xué)位論文的內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，有權(quán)將學(xué)位論文的標(biāo)題和摘要匯編出版。愿意將本人的學(xué)位論文提交中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)、中國(guó)優(yōu)秀碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)和中國(guó)學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)中全文發(fā)表，并可以以電子、網(wǎng)絡(luò)及其他數(shù)字媒體形式公開(kāi)出版，并同意編入CNKI中國(guó)知識(shí)資源總庫(kù)，在中國(guó)博碩士學(xué)位論文評(píng)價(jià)數(shù)據(jù)庫(kù)中使用和在互聯(lián)網(wǎng)上傳播。保密的學(xué)位論文在解密后適用本規(guī)定。學(xué)位論文作者簽名導(dǎo)師簽名日期日期

簡(jiǎn)介：豬型H1N1流感病毒自被認(rèn)為是1918年1919年世界性流感大流行病原以來(lái)就一直被人們所重視引起世界各國(guó)專家的關(guān)注中國(guó)學(xué)者于1992年從豬群中分離到豬型流感病毒株為了摸清我省人群豬型流感病毒感染情況以分析豬與人流感的關(guān)系于2000年3月2000年10月對(duì)部分人群血清中的豬型流感血抑抗體進(jìn)毯子檢測(cè)分析2000年3月流行后和10月流行前分別在保定、張家口、石家莊、滄州四地市共采集健康人血清1416份按國(guó)家流感中心規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)分五個(gè)年齡組每個(gè)年齡線不少于30人份病毒株使用國(guó)際代表株ANEWJERSAY876H1N1免疫血清購(gòu)自國(guó)家流感中心雞胚傳代后制成抗原用紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)測(cè)定采用微量半加敏血凝抑制試驗(yàn)HITEST方法檢測(cè)血清中的豬型流感血抑抗體血抑效價(jià)≥110為陽(yáng)性由于在人群中發(fā)現(xiàn)有低水平抗體存在為了搞清這種感染的來(lái)源2000年3月于保定肉聯(lián)廠采集豬血清226份有2份陽(yáng)性抗體陽(yáng)性率為088﹪GMT幾何平均滴度為11314≥180說(shuō)明豬群中確實(shí)存在豬型H1N1流感病毒的傳播見(jiàn)表12提示對(duì)豬應(yīng)加強(qiáng)監(jiān)測(cè)以此對(duì)人作出預(yù)警信號(hào)另外對(duì)與豬有密切接觸的人群如獸醫(yī)、飼養(yǎng)員等進(jìn)行上崗教育嚴(yán)格執(zhí)行操作規(guī)程以免造成感染

簡(jiǎn)介：背景急性腦膜炎腦炎癥候群ACUTEMENINGITISENCEPHALITISSYNDROME，AMES是一組起病急，并以腦膜炎或腦炎為主要臨床表現(xiàn)的疾病，常發(fā)生于15歲以下兒童，對(duì)兒童身體健康的影響不容忽視。病毒、細(xì)菌、原蟲(chóng)、寄生蟲(chóng)等多種病原體均可引起腦組織炎癥，病毒最為常見(jiàn)，其次是細(xì)菌，由原蟲(chóng)、寄生蟲(chóng)所致的較為少見(jiàn)。目前國(guó)內(nèi)外報(bào)道有130多種病毒可引起腦炎病變，流行性乙型腦炎病毒簡(jiǎn)稱乙腦，JEV、人類腸道病毒HEV、單純皰疹病毒HSV1型和2型、水痘帶狀皰疹病毒VZV、巨細(xì)胞病毒CMV、流行性腮腺炎病毒MUV、風(fēng)疹病毒RV等均為AMES病例感染最常見(jiàn)的病毒。血或腦脊液中特異性抗病毒IGM抗體的檢測(cè)是早期診斷相關(guān)病毒感染的常用方法之一。AMES病程兇險(xiǎn)，致殘率高，家庭社會(huì)負(fù)擔(dān)嚴(yán)重，成為了當(dāng)前較為嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題之一。自2003年發(fā)生傳染性非典型肺炎SARS之后，我國(guó)逐步重視傳染病的防治特別是監(jiān)測(cè)工作，在開(kāi)展以發(fā)熱伴出疹癥候群的監(jiān)測(cè)及其實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方面已經(jīng)取得一定的進(jìn)展，但有關(guān)其他癥候群的研究工作尚在起步之中。目前我國(guó)在AMES的流行病學(xué)研究方面，除個(gè)別列為法定傳染病的病種如乙腦、流行性腦脊髓膜炎之外，多數(shù)是臨床資料的分析，缺乏在建立醫(yī)院監(jiān)測(cè)系統(tǒng)的基礎(chǔ)上，將AMES作為一種癥候群，全面系統(tǒng)地對(duì)某一地區(qū)在某一時(shí)期AMES開(kāi)展流行病學(xué)監(jiān)測(cè)研究并分析其流行特征的研究報(bào)道。本研究主要對(duì)山東省AMES哨點(diǎn)監(jiān)測(cè)病例的流行病學(xué)及病毒血清學(xué)診斷結(jié)果進(jìn)行分析，有助于進(jìn)一步了解該類疾病的危害，有效制定防治策略。研究目的1分析濟(jì)南市哨點(diǎn)醫(yī)院急性腦膜炎腦炎癥候群AMES病例的流行特征，探討發(fā)病的主要流行病學(xué)因素。2對(duì)AMES病例標(biāo)本進(jìn)行病原學(xué)檢測(cè)和實(shí)驗(yàn)室診斷，分析其病原譜構(gòu)成及其流行病學(xué)特征。3通過(guò)實(shí)驗(yàn)室血清學(xué)診斷，對(duì)確診的乙腦病例按照入院診斷進(jìn)行分析，初步了解乙腦的發(fā)病及其疫情報(bào)告情況，為今后乙腦的防控工作提供依據(jù)。4總結(jié)AMES監(jiān)測(cè)工作的經(jīng)驗(yàn)并在全省乃至全國(guó)推廣，逐步提高山東省AMES主要病原的實(shí)驗(yàn)室診斷能力，加強(qiáng)相關(guān)疾病的監(jiān)測(cè)與控制。研究方法在濟(jì)南市選取省、市、縣級(jí)各2所醫(yī)院作為哨點(diǎn)監(jiān)測(cè)醫(yī)院，定期收集上報(bào)的2008～2009年AMES病例相關(guān)資料，主要采用描述流行病學(xué)的方法，分析流行病學(xué)特征，探討發(fā)病的主要流行病學(xué)因素；分析AMES病例的主要臨床特點(diǎn)和實(shí)驗(yàn)室常規(guī)檢測(cè)指標(biāo)，并根據(jù)入院診斷對(duì)其進(jìn)行分類。臨床特點(diǎn)包括臨床癥狀、體征，分析指標(biāo)為構(gòu)成比，實(shí)驗(yàn)室常規(guī)檢測(cè)指標(biāo)為血和腦脊液相關(guān)指標(biāo)，主要分析病毒性腦膜炎腦炎和細(xì)菌性腦膜炎腦炎之間的差異。采集AMES病例血液標(biāo)本和腦脊液標(biāo)本，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)ELISA，開(kāi)展實(shí)驗(yàn)室血清學(xué)檢測(cè)診斷。血液標(biāo)本進(jìn)行JEV、HEV、HSV、MUV、VZV、CMV、RV血清特異性IGM抗體檢測(cè)，腦脊液標(biāo)本進(jìn)行JEV特異性IGM抗體檢測(cè)。分析血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果，并對(duì)所占構(gòu)成較高的HEV、MUV、HSV特異性IGM抗體陽(yáng)性的AMES病例進(jìn)行流行病學(xué)特征分析。根據(jù)JEV特異性IGM抗體血清學(xué)診斷結(jié)果并結(jié)合病例的入院診斷，將部分AMES病例分為乙腦臨床診斷組與漏診組，比較這兩組在流行特征、臨床表現(xiàn)、臨床實(shí)驗(yàn)室常規(guī)檢測(cè)指標(biāo)方面的差異。資料分析運(yùn)用的主要統(tǒng)計(jì)學(xué)方法為X2檢驗(yàn)、FISHER確切概率法、WILCOXON秩和檢驗(yàn)，主要指標(biāo)為構(gòu)成比。主要結(jié)果12008～2009年共報(bào)告AMES病例699例，其中2008年369例，2009年330例；2年報(bào)告的AMES病例均在7～9月呈現(xiàn)高峰，濟(jì)南市籍與非濟(jì)南市籍病例數(shù)基本持平，男女性別比為1751，15歲以下兒童占70％以上發(fā)病年齡中位數(shù)為7歲，且以學(xué)生、散居兒童、托幼兒童為主。2AMES病例在主要臨床癥狀方面，發(fā)熱、頭痛、嘔吐、惡心居前四位，分別為653例9342％、422例6037％、409例5851％、297例4249％；有頸項(xiàng)強(qiáng)直、腦膜刺激征的病例數(shù)也相對(duì)較多，分別為155例2217％、129例1845％。在實(shí)驗(yàn)室常規(guī)檢測(cè)指標(biāo)方面，病毒性腦膜炎腦炎與細(xì)菌性腦膜炎腦炎在血白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血中性粒細(xì)胞比例、腦脊液蛋白質(zhì)含量、腦脊液白細(xì)胞含量、腦脊液葡萄糖含量、腦脊液氯化物含量上差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。AMES病例的入院診斷中，屬于病毒性感染者為574例占8212％，細(xì)菌感染者為73例占1044％。32008年、2009年報(bào)告的AMES病例分別有9593％354369和9909％327330的病例采集了血清腦脊液標(biāo)本，所有標(biāo)本均檢測(cè)JEV特異性IGM抗體，陽(yáng)性率為1028％70681。此外對(duì)480例病例的血清標(biāo)本檢測(cè)其它6種病毒的特異性IGM抗體，其中MUV陽(yáng)性率最高，為1729％83480，其次是HEV1688％81480、HSV1063％51480、RV333％16480、VZV292％14480、CMV188％9480。4比較乙腦臨床診斷組與漏診組的流行特征，其性別分布與地區(qū)分布的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；漏診組中主要結(jié)論1本研究通過(guò)對(duì)濟(jì)南市6所哨點(diǎn)醫(yī)院AMES病例的監(jiān)測(cè)分析發(fā)現(xiàn)，AMES病例具有一定的流行特征及其臨床特點(diǎn)，入院診斷以病毒性感染為主，是一組臨床常見(jiàn)且具有流行特征的癥候群。今后應(yīng)繼續(xù)重視AMES病例的監(jiān)測(cè)工作。2通過(guò)采集AMES病例血液標(biāo)本和腦脊液標(biāo)本，并采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)ELISA檢測(cè)相關(guān)病毒的特異性IGM抗體進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室血清學(xué)診斷發(fā)現(xiàn)，目前MUV、HEV、HSV、JEV是山東省濟(jì)南市6所哨點(diǎn)醫(yī)院AMES病例病毒性感染的主要病原。今后應(yīng)加強(qiáng)AMES病例的監(jiān)測(cè)，特別是實(shí)驗(yàn)室病原學(xué)診斷工作。3乙腦是疫苗可預(yù)防性疾病。山東省自1986年將乙腦疫苗納入兒童計(jì)劃免疫后，發(fā)病率逐年下降，表明山東省實(shí)施以接種乙腦疫苗為主的綜合性防制措施已取得顯著成效。但本研究通過(guò)對(duì)AMES監(jiān)測(cè)病例進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室血清學(xué)診斷發(fā)現(xiàn)，部分乙腦病例因臨床癥狀較輕，缺乏實(shí)驗(yàn)室病原學(xué)診斷而漏診。今后應(yīng)加強(qiáng)乙腦的監(jiān)測(cè)和報(bào)告工作，臨床上應(yīng)重視乙腦早期診斷的血或腦脊液中抗乙腦病毒特異性IGM抗體檢測(cè)工作。4我國(guó)自1951年建立國(guó)家法定傳染病報(bào)告系統(tǒng)以來(lái)，除將乙腦、流行性腦脊髓膜炎納入常規(guī)監(jiān)測(cè)外，其它AMES病例尚無(wú)全面系統(tǒng)的資料。加強(qiáng)AMES病例監(jiān)測(cè)和實(shí)驗(yàn)室診斷，有助于指導(dǎo)臨床治療，提高生存率。今后應(yīng)加強(qiáng)AMES病例的監(jiān)測(cè)和防控工作。