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簡介:大節(jié)段負(fù)重骨缺損是臨床上一個常見而又棘手的難題不僅骨缺損量大而且常常因?yàn)楣悄?、骨髓及周圍組織的毀損而缺少成骨的細(xì)胞源易形成骨不連遺留嚴(yán)重功能障礙尤為重要的是負(fù)重骨缺損不同于腔隙性骨缺損不僅要求外形結(jié)構(gòu)的恢復(fù)更要求功能的重建即能夠滿足負(fù)重運(yùn)動所要求的生物力學(xué)性能目前臨床上仍以自體骨移植作為骨缺損修復(fù)的金標(biāo)準(zhǔn)但取自體骨必然會造成供骨區(qū)的病殘取骨量有限為了避免自體骨移植的種種缺陷人們對骨替代材料進(jìn)行了不懈的探索開發(fā)出人工陶瓷、生物多聚物等材料但由于缺乏生物活性對大節(jié)段骨缺損的修復(fù)效果還不太理想骨組織工程學(xué)使有成骨能力的種子細(xì)胞和具有骨傳導(dǎo)能力的支架材料相結(jié)合明顯促進(jìn)骨的再生和重塑為大段負(fù)重骨缺損的修復(fù)提供了新的思路和方法目前骨組織工程研究集中在種子細(xì)胞、支架材料和二者的相互作用等方面并在骨缺損的修復(fù)方面取得了顯著進(jìn)展然而這一技術(shù)用于修復(fù)大節(jié)段負(fù)重骨缺損尚缺乏足夠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)在種子細(xì)胞的獲取以及體外構(gòu)建組織工程骨技術(shù)方面仍有爭議更需要開發(fā)、篩選出既能滿足組織工程骨需要又經(jīng)濟(jì)實(shí)用的支架材料為此我們設(shè)計更加具有臨床參考意義的大動物試驗(yàn)?zāi)P脱芯孔泽w骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞MESENCHYMALSTEMCELLSMSCS復(fù)合同種異體脫鈣骨基質(zhì)DEMINERILIZEDBONEMATRIXDBM構(gòu)建組織工程骨修復(fù)大節(jié)段負(fù)重骨缺損的可行性為組織工程骨用于臨床提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)首先通過骨髓穿刺獲取MSCS并在體外擴(kuò)增、向成骨細(xì)胞誘導(dǎo)獲取足量有成骨潛能的種子細(xì)胞結(jié)果顯示1、接種后4到6天體外培養(yǎng)的MSCS就可觀察到特異的成纖維樣集落形成單位這是干細(xì)胞的特點(diǎn)之一2、以310CM細(xì)胞密度接種的原代細(xì)胞9至12天長滿單層以110CELLSCM2接種的傳代細(xì)胞4至7天長滿單層3、MSCS表達(dá)CD105而不表達(dá)CD454、MSCS成骨誘導(dǎo)1012天后形成鈣化結(jié)節(jié)表達(dá)堿性磷酸酶、I型膠原和骨鈣素與成骨細(xì)胞的特征相符5、流式細(xì)胞儀檢查未發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)細(xì)胞中有異常倍數(shù)染色體其次制備山羊DBM并研究其與MSCS的相互作用結(jié)果顯示1、DBM成立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)具有高孔隙率和孔隙連通率2、MSCS能在DBM的表面和更深的孔壁上粘附伸展和增植3、對一般的接種方法當(dāng)接種細(xì)胞密度超過210ML時上架細(xì)胞數(shù)即不再增加細(xì)胞在支架上的粘附率低于75﹪3、雙向接種法可使細(xì)胞上架率達(dá)到8095﹪支架上的粘附細(xì)胞數(shù)隨接種細(xì)胞的密度增高而增加再次細(xì)胞支架復(fù)合體和DBM被分別植入羊背部肌袋內(nèi)研究其異位成骨能力前者組織學(xué)檢查觀察到異位成骨且以軟骨內(nèi)成骨為主、無明顯炎癥反應(yīng)而單純支架材料無異位成骨二者X線片上均未見明顯的成骨影像最后使用山羊構(gòu)建負(fù)重骨大節(jié)段缺損的動物模型研究組織工程骨修復(fù)骨缺損的成骨和重塑過程結(jié)果顯示1、術(shù)后4周實(shí)驗(yàn)組的缺損區(qū)可觀察到軟骨內(nèi)成骨12周骨缺損被新骨連接24周新生骨組織重塑良好、已接近正常骨干2、植入體內(nèi)2周后支架材料內(nèi)即可觀察到血管形成12周形成豐富的血管網(wǎng)3、植入4周后DBM開始吸收12周后幾乎完全吸收5、隨修復(fù)時間延長修復(fù)組織的力學(xué)性能逐漸增強(qiáng)24周達(dá)到正常的85﹪綜上所述我們可以得出結(jié)論1、MSCS的增殖能力強(qiáng)并可定向誘導(dǎo)向成骨細(xì)胞分化適合作為骨組織工程的種子細(xì)胞2、DBM具有良好的細(xì)胞和組織相容性其生物降解性與體內(nèi)的成骨過程相匹配是組織工程骨較理想的支架材料3、雙向接種法能夠顯著提高種子細(xì)胞的上架率有利于組織工程骨的體外構(gòu)建4、MSCSDBM在體內(nèi)兩周后即有豐富的毛細(xì)血管形成能夠?yàn)槌晒翘峁┝己玫臓I養(yǎng)5、DBM荷載MSCS構(gòu)建的組織工程骨能明顯促進(jìn)大段骨缺損的愈合并且能夠更快地恢復(fù)其力學(xué)性能
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簡介:中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)(北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院)博士學(xué)位論文下頜骨外板劈開珊瑚人工骨植入在治療半側(cè)顏面短小中的應(yīng)用基礎(chǔ)與臨床研究姓名宋彬申請學(xué)位級別博士專業(yè)整形外科指導(dǎo)教師歸來張智勇20080527中困醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院博士研究生學(xué)位論文下頜骨外板劈開珊瑚人工骨植入在治療半側(cè)顏面短小中的應(yīng)用基礎(chǔ)與臨床研究中文摘要采用下頜骨外板劈開珊瑚人工骨植入的方法來治療半側(cè)顏面短小,對此國內(nèi)外尚無文獻(xiàn)報道。我們采用下頜骨外板劈開珊瑚人工骨植入的方法進(jìn)行了動物試驗(yàn)及相關(guān)臨床病例的治療,并對此方法進(jìn)行了基礎(chǔ)和臨床的研究。動物實(shí)驗(yàn)研究812月齡成年小香豬10頭,隨機(jī)分為A,B兩組,每組5頭。每只實(shí)驗(yàn)動物分別進(jìn)行下頜骨外板劈開,之后將塑形好的珊瑚人工骨植入下頜骨內(nèi)外板之間的間隙內(nèi)。A組一側(cè)為空白對照,一側(cè)植入厚05CM的珊瑚人工骨;B組N植入厚05CM珊瑚人工骨,一側(cè)植入厚LCM珊瑚人工骨。分別于術(shù)前、術(shù)后即刻及術(shù)后6個月進(jìn)行CT檢查。術(shù)后第3個月,每組隨機(jī)挑選1只試驗(yàn)動物處死后取下頜骨標(biāo)本進(jìn)行組織學(xué)檢查HE染色、掃描電鏡,剩余動物于術(shù)后6個月處死,對其中6只的下頜骨標(biāo)本進(jìn)行生物力學(xué)檢測,對另外2只的骨標(biāo)本進(jìn)行組織學(xué)檢查HE染色,掃描電鏡、AZANMALLORY特殊染色。結(jié)果發(fā)現(xiàn)①下頜骨外板劈開珊瑚人工骨植入后,下頜骨厚度明顯增加,組織學(xué)的超微結(jié)構(gòu)均與正常骨組織無顯著差異,對下頜骨最大應(yīng)力的影響不大,論證了下頜骨外板劈丌珊瑚人工骨植入是擴(kuò)展下頜骨厚度的有效手段,為其應(yīng)用于臨床打下基礎(chǔ);②珊瑚人工骨于植入后的6個月組織學(xué)達(dá)到基本修復(fù),大體觀察可見試驗(yàn)側(cè)下頜骨創(chuàng)面均已基本愈合,下頜骨下緣局部可見凹陷及軟組織長入,此種現(xiàn)象在珊瑚人工骨厚度為LCM時更加明顯。下頜角區(qū)可見增生的骨結(jié)節(jié)。臨床應(yīng)用研究采用下頜骨外板劈開珊瑚人工骨植入的方法治療半側(cè)顏面短小11例。應(yīng)用CT分割技術(shù)對術(shù)前、術(shù)后即刻、術(shù)后6個月的下頜骨厚度變化情況進(jìn)行測量分析,并對患者面部進(jìn)行形態(tài)觀察,結(jié)果1下頜骨術(shù)后6個月厚度明顯增加,術(shù)后即刻比術(shù)前平均增厚580MM,術(shù)后6個月比術(shù)前平均增厚481MM;2由于珊瑚植入側(cè)下頜骨相應(yīng)部位厚度增加,術(shù)后6個月患者面下部1/3不對稱畸形得到明顯改善。本文結(jié)論下頜骨外板劈開珊瑚人工骨植入后,間隙內(nèi)有新骨生成,組織學(xué)結(jié)構(gòu)可基本修復(fù),下頜骨厚度明顯增厚。雖然局部有軟組織長入,但對下頜骨最大應(yīng)
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簡介:隨著科學(xué)的發(fā)展和技術(shù)的進(jìn)步外科手術(shù)機(jī)器人已經(jīng)能夠代替人類執(zhí)行越來越多手術(shù)任務(wù)了并且已應(yīng)用于世界各地的許多手術(shù)室中。本文設(shè)計了一臺用于脊椎手術(shù)中骨釘植入的機(jī)器人。本文在確定了機(jī)器人的構(gòu)型和自由度布置之后對機(jī)器人進(jìn)行了運(yùn)動學(xué)分析采用標(biāo)準(zhǔn)的DH建模方法建立了機(jī)器人的數(shù)學(xué)模型并采用解析法求得了機(jī)器人的運(yùn)動學(xué)逆解并采用關(guān)節(jié)動作最小的原則選取其中一組解。之后使用MATLAB對正逆解進(jìn)行了驗(yàn)證分析并畫出了機(jī)器人工作空間確保符合手術(shù)需要。機(jī)器人的結(jié)構(gòu)設(shè)計部分首先給出了整體的機(jī)械傳動方案的設(shè)計然后分別進(jìn)行直線運(yùn)動關(guān)節(jié)以及旋轉(zhuǎn)關(guān)節(jié)的設(shè)計其中詳細(xì)介紹了主要部件的選型以及結(jié)構(gòu)布置方案。最后為了保證機(jī)器人運(yùn)動的安全性與可靠性對機(jī)器人進(jìn)行了模態(tài)分析和關(guān)鍵部件的靜力學(xué)分析。本文機(jī)器人控制系統(tǒng)采用了一種基于CAN總線的分布式結(jié)構(gòu)。將各關(guān)節(jié)控制器掛在CAN總線上與上位機(jī)進(jìn)行通信。建立可靠控制結(jié)構(gòu)之后進(jìn)行了驅(qū)動部件的計算選型然后介紹了反饋元件的引入以及應(yīng)用包括力傳感器、編碼器和光電開關(guān)等使得機(jī)器人擁有一定感知能力。最后進(jìn)行了基于牛脊柱骨的鉆孔力采集的力學(xué)建模實(shí)驗(yàn)完成了對采集到的數(shù)據(jù)處理與特征提取并對牛脊椎骨鉆孔實(shí)驗(yàn)整個過程進(jìn)行了數(shù)學(xué)建模確保操作者能夠?qū)崟r判斷鉆孔時鉆頭的進(jìn)給位置在鉆穿脊椎骨之前停止操作保證手術(shù)的安全進(jìn)行。
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簡介:我國鋼結(jié)構(gòu)設(shè)計規(guī)范尚未對狗骨式結(jié)構(gòu)設(shè)計做出明確規(guī)定,國外的研究只能作為參考。將我國現(xiàn)行規(guī)范中對普通型鋼梁的設(shè)計規(guī)定應(yīng)用于狗骨式連接結(jié)構(gòu)勢必會有不妥之處。本研究以強(qiáng)化鋼框架節(jié)點(diǎn)抗震性能的狗骨式剛性連接結(jié)構(gòu)為研究對象,考慮整體穩(wěn)定和局部穩(wěn)定的相關(guān)性,利用有限元分析軟件研究設(shè)置側(cè)向支撐或加勁肋前后的受力性能,旨在提供保證良好受力狀態(tài)下的構(gòu)造措施,對工程設(shè)計具有一定的指導(dǎo)意義。本研究首先通過對SAP2000及ANSYS軟件的應(yīng)用,確定了適于本研究的有限元程序,即ANSYS;并確定采用位移增量法進(jìn)行全路徑跟蹤;建立了無任何支承的狗骨式連接結(jié)構(gòu)有限元模型,對體現(xiàn)延性設(shè)計概念的狗骨式節(jié)點(diǎn)進(jìn)行了塑性鉸分析;為增強(qiáng)結(jié)構(gòu)或板件的穩(wěn)定性能,考慮了穩(wěn)定性構(gòu)造措施,即設(shè)置側(cè)向支撐或加勁肋,并采用相應(yīng)的有限元模型進(jìn)行了受力性能分析;最后將分析結(jié)果應(yīng)用于狗骨式連接鋼框架,對一榀普通剛性連接鋼框架和一榀狗骨式剛性連接鋼框架1∶2模型進(jìn)行了擬靜力非線性有限元分析。經(jīng)過對數(shù)值分析結(jié)果的討論,得出下列主要結(jié)論進(jìn)一步明確了狗骨式連接結(jié)構(gòu)塑性鉸出現(xiàn)的具體截面位置;發(fā)現(xiàn)設(shè)加勁肋或側(cè)向支撐在單向荷載作用下對承載力影響不大,但在循環(huán)往復(fù)荷載作用下,設(shè)置側(cè)向支撐對整體穩(wěn)定性能有明顯改善;指出狗骨式剛性連接改變了塑性鉸形成次序,充分利用了結(jié)構(gòu)的延性,雖然產(chǎn)生較大變形,但對結(jié)構(gòu)的極限承載力影響并不大;明確了側(cè)向支撐的位置,指出側(cè)向支撐不設(shè)置在翼緣削弱處,即塑性鉸出現(xiàn)處,同樣可以保證結(jié)構(gòu)的整體穩(wěn)定。將穩(wěn)定性構(gòu)造措施的研究成果應(yīng)用于狗骨式連接鋼框架,結(jié)果表明,超規(guī)范設(shè)計側(cè)向支撐的方法合理有效。
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簡介:天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文眼眶眼外肌PULLEY及相關(guān)結(jié)構(gòu)的實(shí)驗(yàn)研究姓名錢學(xué)翰申請學(xué)位級別博士專業(yè)眼科學(xué)指導(dǎo)教師趙堪興20040601第2頁I◆天律醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文一、PULLEY的概念月IJ舌PULLEY的中文直譯為滑車、滑輪或轆轤,其物理學(xué)含義為改變力作用方向或大小的輪繩結(jié)構(gòu),近年發(fā)現(xiàn)眼球運(yùn)動系統(tǒng)中也存在著一個功能類似的結(jié)構(gòu),PULLEY即被引入到了眼外肌EXTRAOCULARMUSCLESEOMS的研究中。眼外肌PULLEY是由膠原纖維、彈力纖維和平滑肌構(gòu)成、包繞在EOMS周圍的環(huán)狀結(jié)構(gòu),位于眼球近赤道部的筋膜囊內(nèi),借由膠原、彈力纖維和平滑肌組成的懸?guī)罱Y(jié)構(gòu)與骨性眼眶壁相連。廣義的PULLEY有兩種類型一種是上斜肌PULLEY,即臨床通常所稱的滑車TROCHLEA,其主要成分是纖維軟骨,又稱為纖維軟骨滑車FIBROCARTILAGIOUSPULLEY;另一種是直肌PULLEYSRECTUSPULLEYS其主要成分是膠原纖維、彈力纖維和平滑肌,因此直肌PULLEYS又稱為纖維肌肉PULLEYSFIBROMUSCLOUSPULLEY。在國際斜視學(xué)會的標(biāo)準(zhǔn)名詞表2002年中,PULLEY指的就是直肌PULLEY,本論文中若無特別說明,所指的PULLEY也是直肌PULLEY。
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簡介:目的探討外源性胰島素應(yīng)用對2型糖尿病患者骨密度和部分骨代謝生化指標(biāo)的影響及其相關(guān)影響因素。方法547例2型糖尿病患者分為口服藥物組B組188例其中男性95例女性93例胰島素應(yīng)用組C組男性179例女性160例根據(jù)使用胰島素時間長短不同將C組分為四個亞組①C1組胰島素應(yīng)用時間小于1年其中男性50例女性48例②C2組胰島素應(yīng)用時間1年至5年其中男性49例女性51例③C3組胰島素應(yīng)用時間5年至10年其中男性42例女性41例④C4組胰島素應(yīng)用時間大于10年其中男性38例女性40例。另設(shè)正常對照組A組282例為在我院體檢的健康人。其中男性127人女性155例均已絕經(jīng)。測定B組和C組患者骨密度、空腹血糖、糖化血紅蛋白、血鈣、血磷、堿性磷酸酶、血清骨鈣素和降鈣素并對上述指標(biāo)進(jìn)行比較。測定A組患者骨密度與B、C兩組進(jìn)行比較。結(jié)果1與A組相比2型糖尿病患者骨密度降低P結(jié)論1、2型糖尿病患者骨密度低于同齡正常人2、女性、高齡、病程長、低體重是糖尿病合并骨質(zhì)疏松的危險因素3、胰島素應(yīng)用對2型糖尿病患者的骨代謝沒有明顯負(fù)性影響。
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簡介:為了探討不同劑量飲酒影響胰島素敏感性的分子機(jī)理該研究擬以整體動物實(shí)驗(yàn)結(jié)合體外原代骨骼肌細(xì)胞培養(yǎng)從細(xì)胞和分子水平探討酒精作用下的骨骼肌細(xì)胞IRS1MRNA表達(dá)水平變化在酒精影響的胰島素敏感性改變中的作用為進(jìn)一步的機(jī)理研究提供參考研究方法該研究整體實(shí)驗(yàn)中以WISTAR大鼠為研究對象以灌胃方式給予不同劑量酒精建立飲酒模型設(shè)立對照組及低、中、高劑量酒精攝入組酒精劑量分別為0、06、08和30MLKGBWDAY每日一次通過灌胃方式給予13周后處死大鼠收集血液分離血清測定空腹血糖和空腹血胰島素并在此基礎(chǔ)上計算胰島素抵抗指數(shù)作為反映胰島素敏感性的指標(biāo)分離大鼠骨骼肌組織提取組織總RNA通過逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)RTPCR測定骨骼肌IRS1MRNA的表達(dá)水平從而觀察酒精對大鼠胰島素敏感性的影響以及酒精劑量與骨骼肌IRS1MRNA表達(dá)水平及HOMAIR之間的關(guān)系探討酒精是否影響骨骼肌IRS1MRNA表達(dá)水平這一變化與酒精引起的胰島素敏感性改變的關(guān)系為了驗(yàn)證酒精是否對骨骼肌細(xì)胞IRS1MRNA表達(dá)有直接影響以體外原代培養(yǎng)大鼠骨骼肌細(xì)胞為研究對象用含不同濃度酒精的培養(yǎng)基培養(yǎng)于不同時間收集細(xì)胞提取總RNA通過RTPCR方法測定各組骨骼肌細(xì)胞IRS1MRNA表達(dá)水平的變化觀察不同濃度酒精對骨骼肌細(xì)胞IRS1MRNA表達(dá)的影響及與酒精的劑量關(guān)系結(jié)論長期適量飲酒可以增強(qiáng)胰島素敏感性升高骨骼肌細(xì)胞IRS1MRNA表達(dá)水平而過量飲酒可以降低胰島素敏感性降低酒精骨骼肌細(xì)胞IRS1MRNA表達(dá)水平酒精可以直接作用于骨骼肌細(xì)胞而發(fā)揮對IRS1MRNA表達(dá)的影響骨骼肌細(xì)胞IRS1MRNA表達(dá)水平的改變可能在酒精對胰島素敏感性的影響中發(fā)揮了一定的作用酒精對胰島素敏感性的影響存在著性別差異雌性動物比雄性動物更敏感
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簡介:前言全身骨骼肌分布廣范在法醫(yī)學(xué)、運(yùn)動醫(yī)學(xué)和整形醫(yī)學(xué)中骨骼肌挫傷發(fā)生率較高。哺乳動物骨骼肌的再生能力已經(jīng)得到了證實(shí)。骨骼肌損傷輕微肌膜保持完整可以通過再生恢復(fù)其收縮力而損傷嚴(yán)重傷及肌膜則肌纖維再生不完全形成纖維性修復(fù)。纖維性修復(fù)與再生這兩個過程相互支持、相互制約共同影響著骨骼肌損傷后恢復(fù)的質(zhì)量。目前研究較多的是骨骼肌損傷后再生過程但是關(guān)于骨骼肌纖維性修復(fù)研究報道甚少所以促使我們尋找一種能夠抑制骨骼肌損傷后纖維化的新指標(biāo)。內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)主要由大麻素受體CANNABINOIDRECEPTCBR、內(nèi)源性大麻素ENDOCANNABINOID和合成與降解內(nèi)源性大麻素的酶組成。CBR分為1型大麻素受體CB1RECEPTCB1R和2型大麻素受體CB2RECEPTCB2R兩個亞型。CB2R基因于1993年被克隆主要分布和表達(dá)于免疫系統(tǒng)組織包括脾、胸腺以及血源性細(xì)胞如淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等又稱之為周圍型大麻素受體PERIPHERALCANNABINOIDRECEPT。近年來發(fā)現(xiàn)CB2R還表達(dá)于結(jié)腸粘膜固有層中的巨噬細(xì)胞、骨骼中的成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞、中樞神經(jīng)系統(tǒng)以及人類和嚙齒類動物的骨骼肌。CB2R與人類多種疾病的發(fā)生和發(fā)展有著密切的關(guān)系。激活CB2R可以抑制肝損害后纖維化形成減輕慢性胰腺炎的纖維化程度而且能夠緩解系統(tǒng)性硬化病中皮膚和肺纖維化的發(fā)展并且對心肌缺血再灌注損傷后的心肌具有保護(hù)作用。但是CB2R是否參與了骨骼肌挫傷修復(fù)的調(diào)節(jié)目前國內(nèi)外尚未見研究報道。本課題在建立了大鼠骨骼肌挫傷動物模型基礎(chǔ)上并實(shí)施CB2R選擇性激動劑JWH133及拮抗劑AM630干預(yù)手段旨在探討1CB2R表達(dá)和肌成纖維細(xì)胞數(shù)量分別隨損傷時間規(guī)律性的變化有可能應(yīng)用于骨骼肌損傷時間的推斷2骨骼肌挫傷修復(fù)過程中CB2R通過調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)化生長因子Β1TRANSFMINGGROWTHFACTΒ1TGFΒ1纖維連接蛋白特殊結(jié)構(gòu)域AFIBRONECTINEXTRADOMAINAFNEIIIAALPHA平滑肌肌動蛋白ALPHASMOOTHMUSCLEACTINΑSMA和基質(zhì)金屬蛋白酶1MATRIXMETALLOPROTEINASES1MMP1和基質(zhì)金屬蛋白酶2MATRIXMETALLOPROTEINASES2MMP2等因子的生物學(xué)功能、以及肌成纖維細(xì)胞MYOFIBROBLAST的生物學(xué)行為影響骨骼肌挫傷后纖維化程度揭示內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)中的周圍型大麻素受體在骨骼肌挫傷修復(fù)過程中的作用。為探索骨骼肌挫傷修復(fù)的新機(jī)制進(jìn)一步闡明骨骼肌挫傷纖維性修復(fù)的分子機(jī)制奠定基礎(chǔ)。為今后在運(yùn)動醫(yī)學(xué)和整形醫(yī)學(xué)中研究肌肉損傷丌辟新的途徑和方法本研究成果有可能對未來研發(fā)相應(yīng)治療藥物具有重要意義。材料與方法一、大鼠骨骼肌挫傷模型的建立參照KAMI等大鼠骨骼肌急性鈍挫傷模型自制骨骼肌打擊器打擊器與傳感器相連通過傳感器檢測出打擊器下落的速度根據(jù)EK12MV2計算出動能。應(yīng)用2%戊巴比妥鈉30MGKG腹腔注射麻醉后右下肢剪毛備皮。并將大鼠右下肢置于伸膝、踝背屈90°位置用自制打擊器重500克打擊大鼠右下肢距跟骨25CM處部位。二、分組及取材健康成年雄性SPRAGUEDAWLEYSD大鼠65只體重230G320G大鼠以消毒飼料及自來水分籠飼養(yǎng)保持摯料清潔及空氣通暢。一骨骼肌挫傷組及對照組1、挫傷組分別于挫傷后不同時間段3、6、12H、1、3、5、7、10及14D腹腔注射2%戊巴比妥鈉350MGKG麻醉致死后取右下肢挫傷區(qū)肌肉一部分用于石蠟切片的HE染色、MASSON三染色、免疫組織化學(xué)染色和免疫熒光染色。另一部分用于WESTERNBLOT和RTPCR每個時間段5只大鼠。2、對照組取5只未致傷正常大鼠右下肢相同部位骨骼肌其余同上。二體內(nèi)CB2R激動劑組、拮抗劑組及VEHICLE組1、CB2R激動劑組分別于挫傷時及傷后1D、3D、5D、7D、9D、11D及13D于挫傷處肌肉內(nèi)注射CB2R選擇性激動劑JWH133按工作液濃度5MGML溶解于DMSO和生理鹽水給藥50ΜL傷后14D處死大鼠取右下肢挫傷區(qū)肌肉一部分用于HE染色、MASSON染色和免疫組織化學(xué)染色。另一部分用于實(shí)時熒光定量RTPCR共5只大鼠。2、CB2R拮抗劑組分別于挫傷時及傷后1D、3D、5D、7D、9D、11D及13D于挫傷處肌肉內(nèi)注射CB2R選擇性拮抗劑AM630按工作液濃度5MGML溶解于DMSO和生理鹽水給藥50ΜL傷后14D處死大鼠其余同上。3、VEHICLE組挫傷處肌肉內(nèi)注射溶解于生理鹽水的DMS050ΜL其余同上。三、組織病理學(xué)和免疫組織化學(xué)染色骨骼肌樣本經(jīng)4%多聚甲醛PH74固定1D脫水、透明包埋在石蠟中制作5ΜM切片進(jìn)行HE染色、MASSON三染色、免疫組化染色和免疫熒光染色。四、WESTERNBLOT檢測CB2R和GAPDH蛋白提取樣本總蛋白置于80℃保存。采用LOWRY法和BCA法測蛋白濃度定總蛋白40ΜG進(jìn)行PAGESDS凝膠電泳。將蛋白轉(zhuǎn)印到PVDF膜上用5%脫脂奶粉封閉后分別用兔抗大鼠CB2R多克隆抗體1600、小鼠抗大鼠GAPDH單克隆抗體110004℃孵育過夜分別再用相應(yīng)的二抗室溫孵育ECL發(fā)光經(jīng)電泳凝膠成像分析系統(tǒng)掃描用SCIONIMAGE軟件檢測蛋白條帶CB2R灰度值與GAPDH灰度值兩者比值為其相對蛋白定量。五、反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)RTPCR檢測CB2R和GAPDHMRNA一RNA提取用RNAISOPLUS提取組織總RNA。紫外可見光分光光度計測定OD260OD280值并且計算RNA濃度將樣品部分RNA稀釋成05ΜGΜL80℃冰箱保存?zhèn)溆?。二反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)表1反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)所需試劑和使用量三PCR反應(yīng)表2PCR反應(yīng)所需試劑和使用量四電泳6ΜLPCR反應(yīng)產(chǎn)物和4ΜL溴酚蘭混合后加入2%瓊脂糖凝膠梳孔內(nèi)進(jìn)行穩(wěn)壓電泳電泳凝膠成像分析系統(tǒng)掃膠拍照。六、實(shí)時熒光定量RTPCR檢測TGFΒ1、FNEIIIA、ΑSMA、COLI、COLIII、MMP1、MMP2和GAPDHMRNA一RNA提取同五二反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)表3反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)所需試劑和使用量三REALTIMEPCR反應(yīng)表4REALTIMEPCR反應(yīng)所需試劑和使用量七、統(tǒng)計學(xué)分析用SPSS130FWINDOWS進(jìn)行數(shù)據(jù)分析以P<005為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果一、HE染色和MASSON三染色一大鼠骨骼肌挫傷動物模型挫傷后3H~6H挫傷處骨骼肌局部出血、水腫、變性可見少量多核粒細(xì)胞POLYMPHONUCLEARCELLSPMNS。傷后12H~1D大量的PMNS和圓形的單個核細(xì)胞MONONUCLEARCELLSMNCS聚集在挫傷區(qū)并且壞死骨骼肌纖維被逐漸吞噬。傷后3D到7DPMNS逐漸變少M(fèi)NCS和紡錘形的成纖維樣細(xì)胞FIBROBLASTICCELLSFBCS大量出現(xiàn)可見新生血管和膠原形成。同時新生骨骼肌開始增殖多個核呈串珠樣位于肌細(xì)胞中央的多核肌管MULTINUCLEATEDMYOTUBES數(shù)量逐漸增加多存在于挫傷中心區(qū)。從傷后10D~14D偶見MNCS主要是FBCS纖維化程度進(jìn)一步加重。挫傷區(qū)新生多核肌管多己與損傷周邊區(qū)肌纖維殘存端融合孤立存在的多核肌管數(shù)量減少。MASSON染色顯示傷后5D~14D膠原纖維面積逐漸增加。二大鼠骨骼肌挫傷后局部注射藥物動物模型挫傷后14DCB2R激動劑組挫傷區(qū)可見大量核位于中央的新生肌管密集排列并可見多個核位于肌細(xì)胞周邊較成熟新生骨骼肌。FBCS數(shù)量比CB2R拮抗劑組和VEHICLE組少。CB2R拮抗劑組挫傷區(qū)出現(xiàn)大量FBCS而新生肌管數(shù)量比CB2R激動劑組和VEHICLE組少。MASSON染色顯示膠原纖維面積由大到小依次為CB2R拮抗劑組、VEHICLE組、CB2R激動劑組。二、免疫組織化學(xué)染色一大鼠骨骼肌挫傷動物模型CB2R分布于對照組大鼠骨骼肌肌膜、肌漿和血管平滑肌。大鼠骨骼肌挫傷后3H~12H極少數(shù)PMNS微弱表達(dá)CB2R。傷后12H~3D大量MNCS顯示了CB2R的陽性反應(yīng)。傷后3D~7DCB2R表達(dá)于MNCS、FBCS、新生多核肌管和新生血管壁中。傷后10D~14D仍然可見一些陽性FBCS。GROUPI傷后12H~1D未見ΑSMA陽性肌成纖維細(xì)胞的分布。GROUPⅡ傷后5D~7D肌成纖維細(xì)胞的數(shù)量明顯增加。GROUPⅢ傷后10D~14D肌成纖維細(xì)胞的數(shù)量達(dá)高峰。二大鼠骨骼肌挫傷后局部注射藥物動物模型與拮抗劑組及VEHICLE組相比大鼠接受JWH133處理后挫傷修復(fù)區(qū)出現(xiàn)的ΑSMA陽性肌成纖維細(xì)數(shù)量明顯減少。三、雙重免疫熒光染色為了鑒定巨噬細(xì)胞和肌成纖維細(xì)胞表達(dá)CB2R利用激光共聚焦掃描顯微鏡分別共定位CB2R和巨噬細(xì)胞標(biāo)志物MACROPHAGEMARKER以及CB2R和ΑSMA。對照組大鼠骨骼肌可見少許CB2R和MACROPHAGEMARKER雙陽性細(xì)胞傷后1D挫傷區(qū)出現(xiàn)大量表達(dá)CB2R和MACROPHAGEMARKER細(xì)胞。傷后14D挫傷修復(fù)區(qū)可見大量CB2R和ΑSMA雙陽性細(xì)胞。四、WESTERNBLOT檢測對照組大鼠骨骼肌有CB2R陽性條帶。骨骼肌挫傷各組CB2R蛋白表達(dá)強(qiáng)度有一定時間規(guī)律性。傷后1D陽性條帶明顯增強(qiáng)傷后5D~7D達(dá)到高峰傷后10D開始下降到傷后14DCB2R陽性條帶仍強(qiáng)于正常對照組。五、RTPCR檢測對照組大鼠骨骼肌可以檢測出CB2RMRNA。和WESTERNBLOT趨勢相似傷后7DCB2RMRNA表達(dá)水平達(dá)到高峰。六、實(shí)時熒光定量RTPCR檢測我們檢驗(yàn)JWH133和AM630對TGFΒ1、FNEIIIA、ΑSMA、COLⅠ、COLⅢ、MMP1和MMP2MRNA表達(dá)的影響。AM630處理后大鼠的TGFΒ1、FNEIIIA、ΑSMA、COLⅠ和COLⅢMRNA含量明顯增高。但是JWH133處理后大鼠的MMP1和MMP2MRNA表達(dá)更多。結(jié)論1、肌成纖維細(xì)胞在骨骼肌挫傷區(qū)中出現(xiàn)有一定的時間規(guī)律性可以作為一種客觀指標(biāo)用于法醫(yī)學(xué)骨骼肌損傷時間的推斷并且參與了骨骼肌挫傷區(qū)內(nèi)膠原沉積促進(jìn)骨骼肌挫傷后纖維化的進(jìn)程。2、正常大鼠骨骼肌肌膜、肌漿、血管平滑肌細(xì)胞和固有的巨噬細(xì)胞表達(dá)CB2R。3、骨骼肌挫傷修復(fù)過程中巨噬細(xì)胞和肌成纖維細(xì)胞表達(dá)CB2R。并且CB2R表達(dá)具有時間規(guī)律性可用于骨骼肌損傷時間的推斷。4、CB2R能夠有效地減輕骨骼肌挫傷后纖維化程度。5、CB2R可能通過減弱TGFΒ1和FNEIIIA的表達(dá)來阻礙肌成纖維細(xì)胞活化從而抑制纖維形成。還可能通過增加MMP1和MMP2的表達(dá)降解細(xì)胞外基質(zhì)促進(jìn)骨骼肌再生。
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簡介:該文的目的旨在研究不同時間全身運(yùn)用利多卡因?qū)趋兰∪毖俟嘧p傷的保護(hù)作用我們將實(shí)驗(yàn)動物新西蘭白兔隨機(jī)分為利多卡因缺血前用藥組、利多卡因再灌注前用藥組和對照組分別在缺血前、再灌注前開始給利多卡因或生理鹽水用噻唑藍(lán)比色試驗(yàn)MTT法測定骨骼肌缺血3H、再灌注3H以后兔小腿三頭肌和脛前肌不同時間的壞死率同時我們還觀察了缺血和再灌注3H時再灌注前用藥組和對照組脛前肌的超微結(jié)構(gòu)的區(qū)別實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示缺血前用藥組和再灌注前用藥組兩種肌肉的壞死率在再灌注3H時都比對照組明顯下降而且兩種用藥方式的效果沒有差別而缺血時實(shí)驗(yàn)組和對照組的骨骼肌壞死率沒有差別另外再灌注3H時實(shí)驗(yàn)組和對照組脛前肌超微結(jié)構(gòu)的破壞也有明顯差別因此我們認(rèn)為無論在缺血前還是再灌注前全身運(yùn)用利多卡因?qū)趋兰〉脑俟嘧p傷都有明顯的保護(hù)作用但對缺血造成的損傷沒有保護(hù)作用
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簡介:旋毛蟲病TRICHINELLOSIS是一種嚴(yán)重的人獸共患寄生蟲病主要因生食或半生食含有旋毛蟲幼蟲囊包的豬肉或其它動物肉類所致為了尋找診斷旋毛蟲病的特異性抗原該研究首先應(yīng)用SDSPAGE對旋毛蟲肌幼蟲可溶性抗原、肌幼蟲分泌排泄ES抗原組分進(jìn)行了分析然后用旋毛蟲病和其它寄生蟲病患者血清及正常人和小鼠血清進(jìn)行免疫印跡WESTERNBLOT此外為了鑒定出引起交叉反應(yīng)的抗原還對衛(wèi)氏并殖吸蟲及華支睪吸蟲成蟲可溶性抗原組分進(jìn)行了分析結(jié)果表明旋毛蟲肌幼蟲可溶性抗原中的24、23、21、20KDA蛋白組分和ES抗原中的71、23KDA蛋白組分是旋毛蟲的特異性抗原可用于旋毛蟲病的免疫學(xué)診斷在旋毛蟲、衛(wèi)氏并殖吸蟲及華支睪吸蟲之間存在有共同抗原
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簡介:分類號R782科學(xué)學(xué)位D專業(yè)學(xué)位口學(xué)校代碼10062學(xué)號2011602810學(xué)科門類醫(yī)學(xué)又坪普科矢號TI陵瓣潮■■墨烈LI吐UN臃髓HY碩士學(xué)位論文IⅥ【ASTER’SDISSERTATION論文題目下頜升支矢狀劈開截骨術(shù)下頜骨裂開方式的觀測研究TITLEEVALUATIONTHESPLITPATTERNSOFTHEMANDIBLEINABILATERALSAGITTALSPLITRAMUSOSTEOTOMY一級學(xué)科口腔醫(yī)學(xué)二級學(xué)科口腔臨床醫(yī)學(xué)論文作者于天平指導(dǎo)教師侯敏教授導(dǎo)師組成員濮禮臣宋大立陳偉天津醫(yī)科大學(xué)研究生院二零一四年五月天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要目的通過對研究對象CBCT影像資料的回顧性研究,對下頜升支矢狀劈開截骨術(shù)BSSRO下頜骨不同裂開方式進(jìn)行分類,同時探討影響裂開方式的下頜骨的解剖因素及相關(guān)操作因素。研究對象及方法研究一選取2011年7月至1J2012年10月就診于南開大學(xué)附屬口腔醫(yī)院行雙側(cè)下頜升支矢狀劈開截骨術(shù)的患者130例,男性62人,女性68人,年齡平均為2326485歲,范圍在17“歲之間。納入標(biāo)準(zhǔn)1BSSRO手術(shù)過程中無意外骨折發(fā)生;2患者未同時進(jìn)行下頜角手術(shù),如“下頜角咬肌肥大畸形整復(fù)術(shù)”;3無下頜骨骨折病史。在術(shù)前3天以及術(shù)后1月對所有研究對象行CBCT韓國怡友巴泰克公司,IMPLAGRAPHY掃描獲取患者術(shù)前術(shù)后相關(guān)CBCT數(shù)據(jù)及影像資料。按照HUNSUCK學(xué)者提出的的改良型術(shù)式進(jìn)行手術(shù)。以下頜角點(diǎn)GO為界對BSSRO手術(shù)骨裂開方式進(jìn)行分類,同時觀測不同裂開方式患者下頜升支皮質(zhì)骨厚度、下頜角角度以及下頜升支橫斷面形態(tài)的差異。通過SPSS170軟件對相關(guān)解剖數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。研究二選取2010年5月到2013年8月于南開大學(xué)附屬口腔醫(yī)院正頜外科行BSSRO手術(shù)的患者304例,男性136人,女性168人,平均年齡為2206I415歲,范圍在1744歲之間。單純下頜前突者138人,面部偏斜者120人,下頜前突伴上頜后縮者46人。CBCT掃描及手術(shù)操作同實(shí)驗(yàn)一。結(jié)果研究一BSSRO手術(shù)下頜升支正常裂開方式有2類1在下頜升支舌側(cè)的下頜舌骨溝附近裂開,此類比較多見,占7538%;2在下頜升支后緣中央?yún)^(qū)域裂開,占2462%。下頜升支皮質(zhì)骨厚度分布不均勻,其中皮質(zhì)骨厚度最薄的區(qū)域位于下頜升支舌側(cè)的下牙槽神經(jīng)管與升支后緣之間。下頜升支橫斷面形態(tài)可分為三類,分別為1類三角形,占2846%;2半月牙形,占6154%3均勻型,占1000%。單因素統(tǒng)計分析表明,BSSRO手術(shù)不同裂開方式患者下頜升支舌側(cè)的下牙槽神經(jīng)管后方區(qū)域皮質(zhì)骨厚度、下頜升支后緣區(qū)域皮質(zhì)骨厚度、下頒角角度以及升支橫斷面形態(tài)分布不同,差異有統(tǒng)計學(xué)意義PO05。且經(jīng)過LOGISTIC回歸分析,下頜升支后緣區(qū)域的裂開方式與上述四因素相關(guān)P005。
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簡介:現(xiàn)今國內(nèi)外對云岡石窟和龍門石窟的研究著作、期刊與學(xué)術(shù)論文比比皆是,其研究的深刻程度已經(jīng)達(dá)到很高的水平,尤其是對北魏這一歷史時期的云岡石窟與龍門石窟造像。在研究生期間跟隨導(dǎo)師全國范圍考察了中國古代雕塑,被石窟造像中那些古老的佛傳故事,高超的雕刻手法,傳統(tǒng)造像的藝術(shù)魅力,深深的吸引。雖然知道寫這篇論文有一定的難度,但筆者仍然希望在前輩研究的基礎(chǔ)上,從雕塑造型藝術(shù)方面來談北魏晚期的云岡石窟與龍門石窟造像形成“秀骨清像、褒衣博帶”的漢化藝術(shù)特征并通過圖表對比分析的方式來展現(xiàn)。佛教作為外來宗教,從印度一傳入中國就開始踏上了漢化的歷程。在北魏這樣的社會背景下,更是加快了它的漢化歷程。北魏處于南、北朝的早期,是一個時局動蕩、帝王更替頻繁的王朝,石窟藝術(shù)能夠在這個時期盛行起來,與這一時期的社會背景相關(guān)。這個時期統(tǒng)治階級的內(nèi)部矛盾十分激烈,彼此殘殺,而此時佛教恰恰提出今生苦短,來世永樂以及輪回和因果報應(yīng)等超脫現(xiàn)實(shí)的思想,正符合當(dāng)時受到嚴(yán)重摧殘的大眾的想法,這種“末世”和“救贖”的思想也促使統(tǒng)治者自己信仰佛教。對于當(dāng)時的虔佛者與其說是皈依于哪怕是完全曲解了的佛教宗教教義,還不如說是把佛教當(dāng)成一種不死神明祈福消災(zāi)的手段。由此看出佛教雖然不是我們最早創(chuàng)造,但當(dāng)它進(jìn)入中國后,我們以如何的方式來呈現(xiàn)它且能為當(dāng)時時代所需要,這一點(diǎn)是非常重要的。就如我們今天的藝術(shù),如何在全世界越來越同化的當(dāng)下,做出自己的特色而不是一味的模仿跟風(fēng),才能扎根本土站穩(wěn)腳跟本文第一部分首先闡述了研究的內(nèi)容、目的以及對“秀骨清像,褒衣博帶”的界定;第二部分則分析了北魏晚期歷史背景以及“傳神論”與“玄學(xué)”對云岡石窟與龍門石窟形成“秀骨清像、褒衣博帶”風(fēng)格的影響,同時對云岡石窟與龍門石窟做了一個分期研究以便我們更清晰的看到這一漢化過程造像特征的前后關(guān)聯(lián)。第三部分對北魏時期的云岡石窟與龍門石窟具有代表性的佛像造像進(jìn)行了造型藝術(shù)分析。第四部分從形體、衣紋、面部、蓮座特征進(jìn)行分析比較,來探討北魏晚期形成“秀骨清像、褒衣博帶”這一漢化造型藝術(shù)特征的脈絡(luò)。第四部分,從北魏晚期云岡石窟和龍門石窟造像在不斷本土化的進(jìn)程中取得的崇高的造型藝術(shù)價值反思,外來藝術(shù)本土化與傳承的重要性。第五部分結(jié)語,藝術(shù)是相通而又相互輪回的,它并不是哪個時代下規(guī)定的統(tǒng)一模式,它必然在不同的社會背景中呈現(xiàn)出不一樣的特征,才能顯示其魅力所在。而如何堅守外來藝術(shù)本土化后取得本民族藝術(shù)特色之后的傳承是值得我們深思的一個問題。
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