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    • 簡介:大連理工大學碩士學位論文抗奶牛乳腺炎特異性IGY的制備及活性研究姓名王宇申請學位級別碩士專業(yè)生物化工指導教師徐永平20060616抗奶牛乳腺炎特異性卵黃抗體的制備及活性研究PREPARATIONANDACTIVITYRESEAICHOFEGGYBIKANTIBODYIGYSPECIFICFORDAIRYCOWMAS6TISABSTRACTEGGYOLKIMMUN0出OBUL毗ALSOCALLEDIGYISONEOFTHL讎PRIILCIPALCLASSESIMMUNOGLOBULINSIILAVIANSER扎IGY哪BBDTOSPECIFIC枷GENSSUCH鼬BAC州A,VINLSES。CARCINOGENS姐DTOXINS趾DCANNEU心ALIZETHEB瑚NF砒DFECTSOFTHE刪GENSITISIMOWNTLLATTLLEMAORSEN皿戚BODYILLCHICKENSI直∞IS訂黜FER∞D(zhuǎn)ACROSST11EFOLLICLLL甜印ITHELIUILLOFTHEOVARYANDACCUMDATEDIN也EYOLKDLLRING009ENESISINAINAⅡILERSIILMARTOⅡLEPLACENTA】咖SF醯OFIGGINMAMMALSDAIRYCOWMASTITI8ISONEOFTHEPFINCIPALCALLSESOFECONOMICLOSSESI11也EDAIRYILLDUS旬哪IILPAMCUL戤圈印】,F(xiàn)DC口CCM,倒L,哪AND上強曲砌缸∞盯瞅出ET、VOMOSTCOMINON口A血OGENICMICROORGAILISMSGEILE枷ONOF枷BODIESBGAINSTPAMOGENICBACTERIAMAYREPRESEⅡTANIDEALALTEMATIVETO也ESLLB也E墻_PEUTICUSEOF碰BIOTICSTHEUSEOFCLLICKENSFBFSPECI丘CIMMUNOGLOBULIILPRODUCDONISMORECONVENI貧LTBEC峨NLE趾廿BODIESAR℃EASILYDELIVEREDIILANEGGANDCANSEQUELLTLYNOINV勰IVETECHILIQUESARENECESSAN,TOHAR、吧ST曲鋤THEOBIECDVEOFTLLEPRESENTSTUDYWASTOPRODUCEIGY刪BODIESSPECIFICAILYAG砌4腳彤‘西ARLD上己C口圮THETV∞PRINCIPALB∞矧ACAUSINGM硎TISINDAIRYCA坩ETHENLAILLRESULTSAREASTIOUOWSCOMMIREDTOTLLEIGYHARVEST丘_0MTLLEL碰N2HENS證瑚瑚【IZED謝也OIMER口肼℃岱口,E∞鼠TLLE血CRW硒SI鯛IFIC缸LNYLLI出ER151200妣HEILSWERESIRIMLTANEOUSLYIMMUNIZEDWI也B劬BAC把D吼SANPREDPI枷ONME也ODW夠ENGAGED勰MEFIRSTS姊OFISOLADONIILOURRESEARCHDUET0ITSHIGH陀COV敷Y讎DABILI母TOSUSTAINIGYACTI們TYSEQUENCIILGGELM把DTIONIILDICATEDTHAT也EIGYCANBEUPTO90%PURE111ISLEVEL講LRI田ANDAC廿VITYMAYHAVECONSIDE鞠BLEAPPLICATIONM也EL耵GESCALEPRODUCTIONOFIGYFORNLERAPERTICPLLRPOSESTHEDATA丘OMTHEINLLIBMONINVI臺。咖DIESDEIILONS把她D也AT也E哪WMOFBOM口Ⅳ旭淞ANDE∞豇CANBEIIL】曲“EDEITHERINSOLIDOR1IALLIDCLLLTL】】他THERE、VASNOSI鰣FICAMLYDITI翻LCEP005INMEDEGREETOWHICHIGY如MODIESINLLIBITED口LF,哪OREC口壇111EMINIMALHLLLIBITORYC0N刪IONMICOFI疊YW雒DETECTECED鵲35M咖LH1CONCLUSION,ILLAC石VATED口塒陀珊COUPLEDWITHEC撕C托BEUSCDASTLLECOMPLEXA玎TIGEN恤TFMLYCALLSEDHENSINLI㈣REAADOⅡANDIILDUCE1ARGE鋤。眥TOFMESPECIFICANTIBODYP鵲SIVEPROTCCTIONCOLLLDBETHENEXTSTEPINGENERATINGIGYAIMBODIESTLLATCOLLLDBEUSEDFBRTHEE丘B(yǎng)CTIVECOR山田LOFM越時廿SINDAIRVCATTLEF刪1ERWORKCOULDBEDONEBASEDONOURRE∞ARCKANDNOWWEARESTILLSTUDYIILGONMEMECLLAMSMOFIGYP嬲SIVEPROTEC缸ONINDAIRYCOWMASTIDSKEYWORDE酲YOLKIMMUNOGIOBUIIN;DAIRYCOWM且STJ石S;ELISAⅡ
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    • 簡介:LLLLRLLLNRFFLIJLLIJIJJIFL/FLLL/LJLLLRLLY3231247中圖分類號S852密級壘玨學校代碼Q22壘學號&逝鰱蟄隸北裝案夫謦碩士掌位論文二甲雙胍對犬乳腺腫瘤細胞體外增殖抑制作用的影響作者三墓雪學位類別盔主亟導師割云熬撞所在學院動物醫(yī)堂堂匾一級學科獸醫(yī)堂二級學科蝤壓簦醫(yī)堂二。一七年六月目錄目錄摘要I英文摘要III1引言111犬乳腺腫瘤L111犬乳腺腫瘤的臨床發(fā)病特點1112犬乳腺腫瘤的臨床治療現(xiàn)狀112二甲雙胍的概述2121二甲雙胍的歷史2122二甲雙胍的藥代動力學2123二甲雙胍與血糖調(diào)節(jié)一3124二甲雙胍的降糖外作用313二甲雙胍的抗腫瘤效應4131二甲雙胍抗腫瘤的臨床依據(jù)4132二甲雙胍抑制腫瘤細胞的基礎研究依據(jù)4133二甲雙胍抑制乳腺腫瘤的臨床證據(jù)和可行性51,4二甲雙胍抗腫瘤的作用機制5141二甲雙胍與細胞凋亡5142二甲雙胍與細胞周期一6143二甲雙胍與AMPK/MTOR信號通路715本實驗的目的和意義82材料與方法921實驗材料9211細胞系,9212主要儀器設備9213主要抗體9214主要試劑及材料10215主要試劑的配制1122實驗方法11221犬乳腺腫瘤細胞的培養(yǎng)和傳代11222CCK一8法檢測犬乳腺腫瘤細胞體外增殖活性12223克隆形成實驗12224流式細胞術檢測細胞周期12225細胞凋亡檢測13226二甲雙胍處理后細胞相關蛋白表達量的鑒定13227數(shù)據(jù)分析16舢7川4㈣2札I1洲3㈣2㈣3眥Y
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    • 簡介:浙江大學碩士畢業(yè)論文單位代碼10335研究生學號20817051加介次掌暴碩士學位論文奶牛隱性乳腺炎免疫傳感器診斷技術的研究作者姓名指導教師學科專業(yè)所在學院提交日期中國杭州浙江大學碩士畢業(yè)論文DEVELOPMENTOFIMMUNOSENSORBASEDTECHNIQUEFORDIAGNOSISOFSUB一CLINIEALMASTITISINDAIRYCOWSADISSERTATIONFORMASTER’SDEGREESUBMITTEDTOTHEGRADUATESCHOOL,ZHEJIANGUNIVERSITYHANGZHOU,ZHEJIANG,CHINAGRADUATESTUDENTDINGSHOUQIANGSUPERVISORTANXUN,ASSCOCIATEPROFESSORMAJBASIEVETERINARYMEDICINEMAY2010
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    • 簡介:東北農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文奶山羊乳腺發(fā)育過程中激素及其受體表達規(guī)律的研究姓名李真申請學位級別碩士專業(yè)動物生物化學與分子生物學指導教師李慶章20090613ABSTRACTIIILAWROLEOFHMONESTHEIRRECEPTSINDEVELOPMENTOFDAIRYGOATMAMMARYGLABSTRACTTHEDEVELOPMENTOFMAMMALMAMMARYGLISDIFFERENTWITHOTHERGANSMAINLYWASINTHEPREGNANTPERIODTHEMAMMARYGLEPITHELIALCELLMULTIPLICATEDDIFFERENTIATEDINTHISTIMEBECOMEDTHEMATURESECRETIONGLTHENEXPERIENCETHEPROCESSESFROMLACTATINGTOINVOLUTIONMANYFACTSSUCHASHMONESREGULATEDITSGROWTHLACTATIONINVOLUTIONTHEEXPERIMENTSHADPROVENTHATTHEPROGESTERONECANPROMOTETHEGLALVEOLUSTOGROWTHEESTROGENCANBEABLETOPROMOTETHEDUCTUSTOEXTENTTHEPROLACTINPLAYEDANIMPTANTPARTINLACTOGENESISLACTATINGTHEGROWTHHMONEAFFECTEDMAMMARYGLTHROUGHREGULATIONOUTSIDEINSIDETHENUTRITIONCOMPETITIONCANCODINATETHEESTROGENTOPROMOTETHEMAMMARYGLDUCTUSGROWTHTHISRESEARCHTAKEDTHEDIARYGOATSASTHEOBJECTUSINGRIASTUDYEDTHECONTENTSOFESTROGENPROGESTERONEPROLACTINGROWTHHMONEINSULININTHEDEVELOPMENTOFMAMMARYGLTHEIR’SRECEPTSWEREMEASUREDBYIFREALTIMETHEPCRFROMTHESEDATESWECANANALYZETHERELATIONSHIPSBETWEENHMONESRICHTHEMAMMARYGLGROWTHREGULATIONTHEYALSOPROVIDESYSTEMICTHEYBASISFTHEDIARYGOATINDUSTRYSDEVELOPMENTTHERESULTSAREASFOLLOWSTHECONTENTOFE2INSERUMINCREASEDSIGNIFICANTLYFROMVIRGINSTAGETOPREGNANCYSTAGETHEHIGHESTCONTENTOFE2WASOBSERVEDINTHELATEPREGNANCY15438531915PGMLP005DURINGTHEPREGNANCYPERIODTHECONTENTOFINSGRADUALLYREDUCED316646416IUMLP005THECONTENTOFINSGOTDOWNGRADUALLY116702987IUMLP001INTHELACTOGENESISTHECONTENTOFE2INMILKATTHELACTOGENESISWASHIGH58591326659PGMLTHENED
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    • 簡介:CLASSIFIEDINDEXU.D.CDISSERTATIONFORTHEDOCTORALDEGREESCREEN烈GFUNCTIONALGENESOFDEVELOPMENTANDLACTATIONM後MMARYGLANDINDAIRYCOWCANDIDATESUPERVISORACADEMICDEGREEAPPLIEDFORSPECIALITYDATEOF0RALEXAMINATIONUNIVERSITYHOUXIAOMINGPROF.LIQINGZHANGDOCTOROFAGRICULTUREANIMALBIOCHEMISTRYANDMOLECULARBIOLOGYJUNE.2009NORTHEASTAGRICULTURALUNIVERSITY芒一覆藿霉量F要。器奄薹KR瓤夕曩薏薯蠶廠K薹廠’目錄目錄中文摘要???????????????????????????????????.1英文摘要??????????????????????????????????..III1弓I言???????????????????????????????????????????????..11.1奶牛品種及特征?????????????????????????????.11.1.1荷斯坦牛??????????????????????????????一11.1。2娟姍牛???????????????????????????????。L1.13更賽牛????????????????????????????????21.1.4愛爾夏牛??????????????????????????????..21.1.5瑞士褐牛??????????????????????????????。21.2奶牛的乳腺發(fā)育?????????????????????????????..31.2.1胚胎期奶牛乳腺發(fā)育?????????????????????????..31.2.2青春期奶牛乳腺發(fā)育?????????????????????????..41.2.3妊娠期奶牛乳腺發(fā)育?????????????????????????一51.2.4泌乳期奶牛乳腺發(fā)育??????????????????????????51.2.5奶牛乳腺的退化???????????????????????????。51.3奶牛生理周期的劃分???????????????????????????.61.4牛基因組學研究進展???????????????????????????.61.4.1?;鶎M遺傳圖譜??????????????????????????..71.4.2牛基岡組物理圖譜??????????????????????????..71.4.3?;鶎MDNA的序列測定??????????????????????。81.4.4牛功能基岡組學???????????????????????????..81.5差異表達基岡的篩選???????????????????????????.91.5.1MRNA差異顯示PCR??????????????????????????91.5.2抑制性消減雜交技術?????????????????????????LO1.5.3基岡表達連續(xù)性分析技術???????????????????????.101.5.4基岡芯片??????????????????????????????.101.6基岡芯片數(shù)據(jù)分析????????????????????????????1L1.7基岡結(jié)構及功能分析???????????????????????????121.7.1獲得全長EDNA的方法????????????????????????121.7.2RNA干擾???????????????????????????????????????..131.7.3基岡過表達技術???????????????????????????.141.8乳腺細胞培養(yǎng)技術????????????????????????????141.9研究的目的和意義????????????????????????????L52材料與方法????????????????????????????????..172.1實驗動物的選取?????????????????????????????17
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    • 簡介:浙江大學動物科學學院碩士學位論文奶牛乳腺組織體外培養(yǎng)體系的建立及MET對其酪蛋白Α基因表達的影響姓名趙學軍申請學位級別碩士專業(yè)動物營養(yǎng)與飼料科學指導教師劉建新張才喬20040501竺塑翌壘蘭蘭些堡蘭J_J_●__一一一奶牛乳腺組織體外培養(yǎng)體系的建立及蛋氨酸對其酪蛋白ⅡSL基因表達的影響摘要本課題以泌乳奶牛乳腺組織為研究材料,在泌乳奶牛乳腺組織的體外培養(yǎng)方法選擇試驗一和用于測定奶牛乳腺組織酪蛋白釩I基因MRNA表達量RTPCR法的構建試驗二進行了研究并利用建立的方法,研究、探討了體外培養(yǎng)的奶牛乳腺組織對泌乳素刺激的應答性試驗三與蛋氨酸對體外培養(yǎng)奶牛乳腺組織酪蛋白A。?;虮磉_的影響試驗四。1.泌乳奶牛乳腺組織體外培養(yǎng)方法的建立試驗一用組織塊旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)法與貼壁培養(yǎng)法對液氮冷凍復活組織進行培養(yǎng),培養(yǎng)條件為DMEM/F12培養(yǎng)液中含2PG/ML氫化可的松、5H∥M1轉(zhuǎn)鐵蛋白、LOHG/ML胰島素和10%的胎牛血清。通過臺盼藍染色觀察旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)法、培養(yǎng)組織觀察、拍照貼壁培養(yǎng)法、MTT法活性測定,發(fā)現(xiàn)旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)法在120H后組織、細胞成活率都較高,MTT值與基因組DNA降解值顯示在72H內(nèi)組織的活性最高;貼壁培養(yǎng)法培養(yǎng)的組織、細胞在24H開始貼壁,到48H后完全貼壁成活,72H后組織具有明顯分泌活性,MMT值與基因組DNA降解值顯示,72H以后奶牛乳腺組織已表現(xiàn)增殖能力、死亡率明顯下降,96小時后培養(yǎng)組織的增殖能力與死亡率都達到穩(wěn)定狀態(tài)。研究證實,奶牛乳腺組織貼壁和旋轉(zhuǎn)兩種培養(yǎng)方法都可以保持奶牛乳腺組織基本活性,其中旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)方法操作比較簡單,培養(yǎng)時可立刻對組織進行試驗處理,試驗周期短,旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)的組織量大,可以滿足對組織需求多的試驗,但組織存活時間較貼壁培養(yǎng)短,對組織、細胞的分裂增殖狀況無法進行形態(tài)觀察;貼壁培養(yǎng)方法,組織存活時間長,便于進行形態(tài)觀察,但組織完全貼壁需要48H,72H后處于穩(wěn)定狀態(tài),才能夠開始進行處理,試驗周期長。2.酪蛋白Ⅱ,,基因及持家基因GAPDH的擴增、序列分析及RTPCR條件探討試驗二4
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    • 簡介:南京農(nóng)業(yè)大學博士學位論文轉(zhuǎn)基因克隆法制作人溶酶體Β葡萄糖苷酶奶山羊乳腺生物反應器的研究姓名張艷麗申請學位級別博士專業(yè)動物遺傳育種與繁殖指導教師王鋒201006轉(zhuǎn)基因克隆法制作人溶酶體0葡萄糖苷酶奶山羊乳腺生物反應器的研究組織中分離提取得到總RNA,利用RTPCR方法,直接獲得人GLCCERASE基因的編碼序列,經(jīng)測序分析,所得GLCCERASECDNA與GENEBANK中同源性為99%,發(fā)現(xiàn)1個堿基差異,導致天冬氨酸到甘氨酸的改變。為了盡快檢測所獲得的目標基因是否能正常編碼獲得重組蛋白質(zhì),本試驗以PEGFPCI為基礎質(zhì)粒,構建了含有人GLCCERASE基因的真核表達載體PEGFPGLECERASE。用脂質(zhì)體介導法將該載體轉(zhuǎn)染入COS7細胞中進行暫態(tài)表達研究,可見報告基因GFP順利表達,經(jīng)RTPCR和熒光酶學法進行驗證,在細胞中檢測到了GLCCERASE的MRNA表達,并在細胞裂解產(chǎn)物中檢測到了GLCCERASE的生物活性。這些結(jié)果表明所克隆的人GLCCERASEEDNA能夠正確編碼蛋白,發(fā)揮生物學功能,可以用于下一步的乳腺表達載體構建。第二部分人GLCCERASE基因乳腺特異性表達載體的構建及乳腺細胞表達試驗中,將在體外經(jīng)真核細胞表達驗證正確的GLCCERASE基因以及細胞篩選標記基因NEO插入含有山羊D酪蛋白基因調(diào)控序列的PBCL載體中,經(jīng)PCR、酶切和測序鑒定,得到正確的重組質(zhì)粒PBCLGLCCERASENEO為了檢測乳腺表達載體的有效性,將該載體轉(zhuǎn)染入小鼠乳腺上皮細胞系HC11細胞中,經(jīng)G418抗性篩選,獲得陽性克隆細胞,將克隆細胞擴大培養(yǎng)后,經(jīng)PCR檢測結(jié)果表明,人GLCCERASE基因己成功轉(zhuǎn)入到HC1L細胞中。進一步用催乳素、胰島素及氫化可的松誘導培養(yǎng)轉(zhuǎn)基因細胞,經(jīng)RTPCR和WESTERNBLOT檢測表明,山羊B酪蛋白基因啟動子驅(qū)動的人GLCCERASE基因能夠在乳腺上皮細胞中轉(zhuǎn)錄翻譯并分泌到胞外。這些結(jié)果表明,所構建的人OLCCERASE基因乳腺表達載體具有生物學功能,為下一步利用該載體進行轉(zhuǎn)基因供體細胞的建立奠定了基礎第三部分奶山羊胎兒成纖維細胞的分離培養(yǎng)及脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染研究,采用組織塊培養(yǎng)法結(jié)合胰蛋白酶消化法分離純化得到奶山羊胎兒成纖維細胞,繪制了生長曲線,鑒定了胎兒細胞性別及核型特征,結(jié)果表明該培養(yǎng)體系可以支持奶山羊胎兒成纖維細胞的體外生長,其細胞形態(tài)為梭形,高度匯合后呈火焰狀,增殖特性以及核型特征均為正常,性別鑒定顯示該奶山羊胎兒細胞為雌性,符合體細胞轉(zhuǎn)基因克隆的基本要求。進一步利用脂質(zhì)體法將PEGFP21質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入該細胞,研究了脂質(zhì)體量、質(zhì)粒量和轉(zhuǎn)染時間對轉(zhuǎn)染效率的影響,獲得了脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染該細胞的最佳條件24孔細胞培養(yǎng)板中采用40肛L脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑,12PG質(zhì)粒DNA,細胞在復合物中孵育6H。這為下一步目的基因轉(zhuǎn)染奶山羊胎兒成纖維細胞的研究提供了參考依據(jù)。第四部分建立轉(zhuǎn)人GLECERASE基因奶山羊胎兒成纖維細胞的試驗,利用上述優(yōu)化的轉(zhuǎn)染體系,將線性化的乳腺特異性表達載體PBCLGLCCERASENEO轉(zhuǎn)染胎兒成纖維細胞,經(jīng)G418篩選8~10天后,獲得抗性細胞克隆,進一步通過96孔細胞培養(yǎng)板分N
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      上傳時間:2024-03-03
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    • 簡介:貴州大學2010屆碩士研究生學位論文人溶菌酶基因牛乳腺特異表達載體的構建及其在家兔乳腺內(nèi)的表達學科專業(yè)動物遺傳育種與繁殖研究方向分子遺傳學與動物育種導師劉若余教授研究生田甜中國﹒﹒﹒﹒貴州﹒﹒﹒﹒貴陽2010年4月分類號S852論文編號2007020090密級貴州大學2010屆碩士論文3目目目目錄錄錄錄部分縮寫中英文對照5中文摘要6ABSTRACT7前言8第一篇文獻綜述部分10一、轉(zhuǎn)基因動物生物反應器的研究進展10二、動物乳腺生物反應器表達載體的構建131啟動子調(diào)控元件1311Β乳球蛋白基因調(diào)控序列1312乳清酸蛋白基因調(diào)控序列1413酪蛋白基因調(diào)控序列142與乳腺組織特異性表達有關的調(diào)控元件1521“MILKBOX”的調(diào)節(jié)1622胰島素、糖皮質(zhì)激素和促乳素的誘導調(diào)節(jié)163內(nèi)含子對基因表達的影響164具有染色體變構和開放功能的元件1741位點控制區(qū)LCR1742核基質(zhì)黏附區(qū)MATRIXATTACHMENTREGION,MAR185與轉(zhuǎn)錄翻譯有關的元件186目的基因的選擇187牛乳腺特異表達載體建立的目的和意義19三、轉(zhuǎn)基因動物實驗的常用方法201受精卵原核顯微注射212精子轉(zhuǎn)導法213胚胎逆轉(zhuǎn)錄病毒感染法214胚胎干細胞介導法225體細胞核移植法226基因打靶技術22四、動物乳腺生物反應器面臨的機遇和挑戰(zhàn)23第二篇試驗部分25一、Β酪蛋白基因調(diào)控序列的克隆251材料與方法2511材料2512方法262結(jié)果3121CSN2基因5′端和3′端調(diào)控序列的擴增3122序列分析3323CSN2基因5′和3′UTR的克隆鑒定323討論34二、表達人溶菌酶牛乳腺特異表達載體的建立361材料與方法3611材料36
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      上傳時間:2024-03-02
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    • 簡介:FILL1LRR1JIHJLLLR111LF1LLFY3231215中圖分類號哥級公玨學校代碼Q229學號14Q91鯉52隸北裝警T譬碩士學位論文牛乳腺上皮細胞中氨基酸激活甘氨酰一TRNA合成酶的信號通路作者奎嫂地導師直芏至麴授學位類別理主砸所在學院生僉抖掌塋醫(yī)一級學科生物主二級學科生物絲塋芻僉王生物塋二。一七年六月一一量皇舅量量量■|喜量量皇量■■皇量量魯量量■皇量量■皇曼■量量■■皇量量旨鼻量量置■量量量■YO,,IJ’二“O坐刪量目錄摘要I英文摘要IIIL前言111氨基酸對奶牛泌乳的調(diào)節(jié)作用1111奶牛乳腺發(fā)育及泌乳一1112氨基酸對泌乳的調(diào)節(jié)作用一112氨酰TRNA合成酶的研究進展2121氨酰TRNA合成酶的結(jié)構與生物學功能一2122AARS的非經(jīng)典功能3123甘氨酰TRNA合成酶的研究進展313MAP3K10結(jié)構與功能414GPCRRACL/CDC42信號通路相關研究5141G蛋白偶聯(lián)受體5142RACL/CDC42結(jié)構與功能615NFRB1信號通路與泌乳調(diào)節(jié)816實驗目的與意義82材料與方法1021實驗材料L02】1主要實驗儀器10212實驗動物與細胞10213主要實驗試劑1022主要試劑的配制1123實驗方法13231奶牛乳腺上皮細胞的培養(yǎng)13232真核表達載體的構建15233SDSPAGE及免疫印跡19234免疫共沉淀20235細胞轉(zhuǎn)染20236GTP酶活性檢測2224數(shù)據(jù)分析243結(jié)果與分析2531奶牛乳腺上皮細胞培養(yǎng)與泌乳模型的建立25311奶牛乳腺上皮細胞的原代培養(yǎng)與純化25312奶牛乳腺上皮細胞的鑒定2632GIYRS與不同激酶相互作用的驗證27
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    • 簡介:CLASSIFIEDINDEXU。DCDISSERTATIONFORTHEMASTERDEGREEINAGRICULTURESTUDYONI迮LATEDENZYMESANDPROTEINSINDIFFEI也NTTYPESOFMASTITISINDAIRYCATTLECANDIDATESUPERVISORACADEMICDEGREEAPPLIEDFORSPECIALITYDATEOFORALEXAML‘NATI‘ONUNIVERSITYWANGHONGWEIPROFESSORGAOLIMASTEROFAGRICULTURECLINICALVETERINARYSCIENCEJUNE,2010NORTHEASTAGRICULTURALUNIVERSITY14研究的目的和意義1L2材料與方法1321材料。13211藥品與試劑13212主要儀器與設備132I3試驗動物L422方法14221樣品的采集與處理14222相關酶類因子的測定原理及操作流程14223相關蛋白因子的測定原理及操作流程19224對不同程度乳腺炎乳中相關成分的分析2023實驗數(shù)據(jù)處理203結(jié)果與分析2131用藥前不同程度奶牛乳腺炎乳中相關酶含量的測定2L32用藥前不同程度奶牛乳腺炎乳中相關急性時相蛋白的含量測定2333用藥前不同程度奶牛乳腺炎乳中總固體、蛋白、乳糖、乳脂的含量測定24
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    • 簡介:EXPRESSIONANDMETHYLATIONANALYSISOFERANDPRGENEINMAMMARYGLANDOFGOATTHESISSUBMITTEDTOQINGDAOAGRICULTURALUNIVERSITYINFULFILLMENTOFTHEREQUIREMENTFORTHEDEGREEOFMASTEROFAGRONOMY,一一RONGMEIJIECOLLEGEOFANIMALSCIENCEANDVETERINARYMEDICINESUPERVISORPROF.MINLINGJIANGQINGDAO,CHINA青島農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文目錄2.2基因表達的檢測?????????????????????182.3DNA甲基化結(jié)果?????????????????????202.4DNA甲基化與基因表達的關系?????????????????.213討論?????????????????????????22結(jié)論????????????????????????.26參考文獻????????????????????????.27致謝????????????????????????.31
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    • 簡介:浙江大學動物科學學院博士學位論文乳酸鏈球菌菌素治療奶牛隱性乳腺炎的研究姓名吳俊強申請學位級別博士專業(yè)預防獸醫(yī)學指導教師胡松華20100601乳酸鏈球菌素治療奶牛隱性乳腺炎的研究25106IU、125X106IU的NISIN制劑于擠奶結(jié)束后分別灌注于右前、右后以及左后乳區(qū),左前乳區(qū)灌注250ML生理鹽水作為對照組,然后在灌注結(jié)束后24H、48H、72H、96H以及1周時進行SCC及NAGASE酶活性的檢測。試驗結(jié)果表明,除了50106IU劑量組有明顯的臨床癥狀外,其他劑量組與對照組均無明顯的臨床癥狀。灌注三種不同劑量的藥物后,三個灌注乳區(qū)牛奶體細胞數(shù)在24H時均明顯升高,但是24H后又逐漸下降,至1周時恢復正常水平,而對照組乳區(qū)則無顯著變化。牛奶中NAGASE酶活性檢測結(jié)果表明,灌注藥物后24H后,兩個高劑量組50X106IU、25X106IUNAGASE酶活性均升高,然后在24~72H保持穩(wěn)定,隨后NAGASE酶活性恢復至正常水平;而125X106IU劑量組與對照組在灌注后24H、48H與72H時,NAGASE酶活性則略微升高,隨后便恢復至正常水平。上述結(jié)果表明,25106IU與125X106IU對奶牛乳腺的刺激性最小,結(jié)合前期NISIN乳房灌注劑治療奶牛隱性乳腺炎的抑菌效果,選擇25106IU作為治療奶牛隱性乳腺炎的治療劑量。3NISINZ乳房灌注劑對奶牛隱性乳腺炎治療效果90頭泌乳中期其患隱性乳腺炎的荷斯坦奶牛90個患病乳區(qū),被隨機分成試驗組46個患病乳區(qū),對照組44個患病乳區(qū)。試驗組奶牛乳腺內(nèi)灌注NISIN乳房灌注劑25X106IU,每天一次,連續(xù)三天,對照組則按照牧場常規(guī)不采取治療。通過檢測治療前后HMT變化、細菌學檢查、牛奶體細胞計數(shù)、以及牛奶中NAGASE酶活性變化,確定NISIN乳房灌注劑對奶牛隱性乳腺炎的治療效果。細菌學檢查結(jié)果可以看出,患病乳區(qū)分離的主要病原菌為金黃色葡萄球菌278%、凝固酶陰性葡萄球菌311%和無乳鏈球菌333%;經(jīng)過NISIN治療后第2周后,試驗組與對照組細菌學轉(zhuǎn)陰率分別為652%和159%,統(tǒng)計學差異極顯著P001;其中各試驗組與對照組主要致病菌在治療后第2周其細菌學轉(zhuǎn)陰率分別為金黃色葡萄球菌為500%和182%,無乳鏈球菌為909%和140%,凝固酶陰性葡萄球菌為588%和273%,兩組細菌學轉(zhuǎn)陰率同期比較,金黃色葡萄球菌與凝固酶陰性葡萄球菌均無統(tǒng)計學差異,而無乳鏈球菌則差異極顯著P001;NAGASE酶活性檢測結(jié)果表明,試驗組在經(jīng)NISIN乳房灌注劑治療第L、2周后,牛奶中在NAGASE酶活性均顯著減低P001,而對照組則無顯著差異;牛奶體細胞計數(shù)結(jié)果顯示,試驗組在治療后第1、2周牛奶中體細胞
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    • 簡介:石河子大學碩士學位論文荷斯坦牛HSP701基因多態(tài)性與耐熱性及乳腺炎抗性的關聯(lián)分析姓名程維杰申請學位級別碩士專業(yè)臨床獸醫(yī)學指導教師孫延鳴20090601HSP701基因座位處于極不平衡狀態(tài)P001,而1623座位基因型與荷斯坦奶牛的SCS和耐熱性指標存在顯著相關,說明奶牛在乳房炎抗性和耐熱性方面受到選擇的影響。關鍵詞熱休克蛋白701,耐熱性,乳腺炎,多態(tài)性
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    • 簡介:ADISSERTATIONSUBMITTEDTOSICHUANAGRICULTURALUNIVERSITYINPARTIALFULFILLMENTOFTHEREQUIREMENTFORMASTERDEGREEOFSCIENCEMOLECULARCLONINGANDCONSTRUCTINGMAMMARYGLANDSPECIFICEXPRESSIONVECTORFORTRACHEAANTIMICROBIAIPEPTIDEGENEOFCHINESEHOLSTEINCOWSLUANHONGYUDIRECTEDBYLIUCHANGSONGANDCAOSUIZHONG本研究得到國家自然科學基金30571329四川省教育廳青年基金項I三L09ZB054四川農(nóng)業(yè)大學青年科技創(chuàng)新基金00231800資助THERESEARCHWASSUPPORTEDBYPROGRAMOFNATIONALNATURALSCIENCEFOUNDATION30571329,YOUNGFOUNDATIONOFSICHUANPROVINCIALEDUCTIONDEPARTMENT09ZB054ANDYOUNGINNOVATIONFOUNDOFSICHUANAGRICULTURALUNIVERSITY00231800YA’AN,SICHUAN,CHINAJUNE,2010論文獨創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學位論文是我個人在導師指導下進行研究工作所取得的成果。盡我所知,除了文中特別加以標注和致謝的地方外,學位論文中不包含其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果,也不包含為獲得四川農(nóng)業(yè)大學或其它教育機構的學位或證書所使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。研究蚴磊紅國劣石年∥月刀日關于論文使用授權的聲明本人完全了解四川農(nóng)業(yè)大學有關保留、使用學位論文的規(guī)定,即學校有權保留并向國家有關部門或機構送交論文的復印件和電子版,允許論文被查閱和借閱,可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編學位論文。同意四川農(nóng)業(yè)大學可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學位論文的全部或部分內(nèi)容。研究生簽名荔訌兩刷幣.猢刎鋤ZO/O年2_0/O年鄉(xiāng)月幽日否月一日
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    • 簡介:廣西大學碩士學位論文牛乳腺特異性表達人溶菌酶基因載體構建與表達檢測姓名劉晟申請學位級別碩士專業(yè)動物遺傳育種與繁殖指導教師石德順劉慶友20100601CONSTRUCTLONOFBOVINEMAMMARYGLANDSPECIFICTRANSGENICVECTORSEXPRESSINGHUMANIJYSOZYMEANDITSEXPRESSIONDETECTIONABSTRACTITISVERYHOTINTHESUBTROPICALAREAREGION,ANDCOWSAREEASYTOGETMASTITISINTHISSTUDYACOWMAMMARYGLANDSPECIFICEXPRESSINGHUMANLYSOZYMEHLZTRANSGENICVECTORWASCONSTRUCTEDANDASSAYEDACCORDINGTOTHEMRNASEQUENCEOFHLZRELEASEDINGENBANKNM__0002392,APAIROFPRIMERSWEREDESIGNEDWITHTOTALRNAFROMHUMANPLACENTATISSUESASTEMPLATE,USINGRTPCRTECHNIQUEA406BPHLZFRAGMENTWASAMPLIFIEDANDCLONEDWITHBOVINEBETACASEINREGULATORYELEMENTSASPROMOTEREGFPASREPORTERGENE,AMPANDNEOASSELECTIONGENE,TWOMAMMARYGLANDSPECIFICEXPRESSINGHLZGENEVECTORSPBCN52HLZ11EGFPNEOANDPBCN38一HLZ一11EGFPNEOWERECONSTRUCTEDTHEVECTORSWERECONFORMEDTOBECORRECTBYRESTRICTIONDIGESTING,PCRANDSEQUENCINGTHENTHEVECTORWASTRANSFECTEDINTOBCAPCELLSWITHLIPOFECTAMINE,ANDGREENFLUORESCENCEPROTEINWASOBSERVEDINPARTOFTRANSFECTEDCELLSAT24HWITHTOTALRNAOFTHESETRANSFECTEDCELLS,USINGQRTPCRREALTIMEQUANTITATIVEREVERSETRANSCRIPTIONPCRANDTHE2ZXZX臼METHOD,EXPRESSIONEFFICIENCYOFTHETWOVECTORSWERECOMPAREDO89004VS062005THEDIFFERENTISNOTSIGNIFICANTTHENLINEDPBCN52一HLZ一11一EGFPNEODNAWASTRANSFECTEDINTOBCAPCELLS,ANDSELECTII
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