二甲雙胍對犬乳腺腫瘤細胞體外增殖抑制作用的影響.pdf

1、犬乳腺腫瘤作為危害母犬健康的常發(fā)的腫瘤性疾病之一，其受犬的年齡、品種、絕育狀態(tài)、繁殖情況以及遺傳因素等多種因素的影響。隨著犬作為伴侶動物的常態(tài)化，犬飼養(yǎng)年限越來越長，犬乳腺腫瘤的發(fā)病率在逐年升高，嚴重威脅犬的健康。犬乳腺腫瘤無論從臨床發(fā)病特點、組織病理學(xué)分型還是乳腺超聲、CT診斷上都與人類乳腺癌具有極高的相似性，可以作為人類乳腺癌研究的完美模型。因此，尋求安全而又有效的抗腫瘤藥物無論對人類還是犬都是十分必要和迫切的。二甲雙胍作為一種口服

2、降糖藥，主要用于Ⅱ型糖尿病的治療，對大量臨床案例的統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)二甲雙胍在降低糖尿病患者血糖的同時，可以顯著降低2型糖尿病患者罹患腫瘤的風(fēng)險和死亡率，對腫瘤起到一定的預(yù)防和治療作用。本研究以犬轉(zhuǎn)移乳腺腫瘤細胞系CHMm和原發(fā)腫瘤細胞系CHMp為模型，進行二甲雙胍對犬乳腺腫瘤增殖抑制實驗的研究，為二甲雙胍用于犬乳腺瘤的研究和治療提供一定的實驗基礎(chǔ)和理論依據(jù)，主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下:
　　1.通過CCK-8法和平板克隆形成實驗，檢測不同

3、濃度二甲雙胍對犬乳腺腫瘤細胞增殖活性和克隆形成能力的影響。結(jié)果表明，二甲雙胍可顯著抑制犬乳腺腫瘤細胞CHMm和CHMp的增殖活性和克隆形成能力，并呈現(xiàn)一定的濃度和時間依賴性，根據(jù)對CHMm和CHMp細胞IC50的比較發(fā)現(xiàn):CHMm對二甲雙胍的敏感性更高。
　　2.通過Annexin-FITC和PI染色法，檢測二甲雙胍誘導(dǎo)犬乳腺腫瘤細胞凋亡情況，并通過western blot法檢測凋亡關(guān)鍵蛋白的表達。研究證實，隨著二甲雙胍作用濃度的

4、升高，可誘導(dǎo)犬乳腺腫瘤細胞CHMm發(fā)生細胞凋亡，并伴有凋亡核心蛋白caspase-3和PARP的活化切割片段的增加。在CHMp未觀察到誘導(dǎo)凋亡的發(fā)生，核心蛋白的活化片段量沒有發(fā)生顯著改變。
　　3.通過PI染色和流式細胞儀，檢測二甲雙胍對犬乳腺腫瘤細胞周期的影響，并通過western blot法檢測周期相關(guān)蛋白的變化情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，二甲雙胍可將CHMm和CHMp細胞周期阻滯在G0/G1期，并能上調(diào)p21、p27和下調(diào)Cyclin

5、D1、CDK4等G0/G1期關(guān)鍵蛋白的表達。
　　4.通過western blot法檢測二甲雙胍對犬乳腺腫瘤細胞內(nèi)AMPK/mTOR和PI3K/Akt/mTOR信號通路上關(guān)鍵蛋白的表達，結(jié)果發(fā)現(xiàn)二甲雙胍可顯著激活CHMm細胞中的AMPK蛋白，并抑制PI3K、Akt及mTOR的表達。而在CHMp，經(jīng)二甲雙胍處理后，未觀察到AMPK的顯著性激活，但觀察到了PI3K、Akt及mTOR等相關(guān)蛋白的抑制現(xiàn)象。
　　結(jié)論:本實驗驗證了二