人溶菌酶基因牛乳腺特異表達(dá)載體的構(gòu)建及其在家兔乳腺內(nèi)的表達(dá).pdf

1、β-酪蛋白是一種高效表達(dá)的乳蛋白，在牛乳中其含量是9.3g/L，占牛乳蛋白總量的28.2％，僅次于αs-1酪蛋白，且其啟動子的組織特異性較好，表達(dá)穩(wěn)定，不會造成異位表達(dá)。為了建立牛乳腺特異表達(dá)載體，根據(jù)已發(fā)表的CSN25′和3′調(diào)控區(qū)序列設(shè)計兩對引物并引入酶切位點，用高保真PCR擴增了牛CSN2基因的5′端和3′端的調(diào)控元件及啟動子，長度分別約為1.8kb和1.1kb，并將CSN25′和3′調(diào)控區(qū)序列分別克隆到pMD19-TVector

2、上，將插入目的片段重組質(zhì)粒送上?；瞪锛夹g(shù)有限公司進(jìn)行測序，測序結(jié)果Blast程序與已發(fā)表的序列的相應(yīng)區(qū)域進(jìn)行比對，結(jié)果表明PCR擴增的CSN25′端和3′端調(diào)控區(qū)與已發(fā)表的序列的同源性為97％、99％。
　　為了建立牛乳腺暫態(tài)生物反應(yīng)器，我們將已經(jīng)克隆的CSN2基因5′端和3′端調(diào)控序列，運用體外DNA重組技術(shù)分別連接到改造過的pcDNA3.0真核表達(dá)載體上。經(jīng)鑒定將正確的目的克隆命名為pC，然后將目的基因hLYZ插入pC載體