鉤端螺旋體分子特性分析研究.pdf

1、鉤端螺旋體病是由致病性鉤端螺旋體引起的一種人獸共患病，為世界上流行最廣泛的人獸共患傳染病之一，其嚴(yán)重病例可發(fā)展至多器官衰竭、甚至死亡。目前，對鉤端螺旋體的分類方法主要包括傳統(tǒng)的血清學(xué)方法和基因分子分型方法。經(jīng)典的血清學(xué)分類法在過去幾十年應(yīng)用較為廣泛，但使用血清均為多克隆抗體，在不同鉤端螺旋體血清群或型之間存在一定的交叉反應(yīng)。隨著生物技術(shù)的發(fā)展，各種分子分型方法被應(yīng)用于各國鉤端螺旋體病的流行病學(xué)研究。
　　本研究應(yīng)用16S rRNA

2、、多位點(diǎn)序列分析(MLST)和脈沖場凝膠電泳(PFGE)方法對中國食品藥品檢定研究院鉤端螺旋體專業(yè)實(shí)驗(yàn)室保存的73株國內(nèi)菌株和63株國外菌株進(jìn)行了分子分型。研究結(jié)果表明，應(yīng)用16S rRNA基因序列分析技術(shù)對各種血清群菌株進(jìn)行基因種分析，共鑒定出85株致病性鉤端螺旋體，分別屬于8個(gè)不同的鉤端螺旋體基因種屬;應(yīng)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)對鉤端螺旋體的7個(gè)管家基因擴(kuò)增、測序，進(jìn)行多位點(diǎn)序列分析(MLST)，得出了各致病性菌株的基因型(STs

3、)，并發(fā)現(xiàn)了47種新的MLST基因型，其中32種來自中國，表明中國鉤端螺旋體分子流行趨勢與其他國家有所不同;利用限制性內(nèi)切酶NotⅠ酶切鉤端螺旋體染色體DNA后，應(yīng)用PFGE技術(shù)分離DNA片段，菌株DNA從20 kb到700 kb大小的DNA片段得到了較好的分離效果，酶切片段的數(shù)量、大小和分布特征明顯不同，采用Bionumerics軟件對圖譜進(jìn)行聚類分析，方法采用UPGMA，聚類相似系數(shù)采用基于條帶比較的Dice，相似性系數(shù)在31.62