鉤端螺旋體病的實(shí)驗(yàn)室診斷及監(jiān)測(cè)方法研究.pdf

1、鉤端螺旋體病(簡(jiǎn)稱鉤體病)是由致病性鉤端螺旋體(簡(jiǎn)稱鉤體)引起的世界范圍內(nèi)流行的人獸共患病,嚴(yán)重威脅著人類的健康和畜牧業(yè)的發(fā)展。鉤體病的臨床癥狀多變,動(dòng)物宿主眾多,實(shí)驗(yàn)室診斷和監(jiān)測(cè)的研究工作任重而道遠(yuǎn)。
　　新發(fā)現(xiàn)的未知功能鉤體外膜蛋白PL40特異且保守地存在于致病性鉤體中,可與鉤體病患者血清中的抗體特異性地結(jié)合。而LipL32是含量最豐富的鉤體表面蛋白,被廣泛應(yīng)用于鉤體病的相關(guān)檢測(cè)中。因此本研究在非變性條件下原核克隆、表達(dá)和純化

2、了rPL40和rLipL32,并基于這兩個(gè)重組蛋白建立間接ELISA的方法檢測(cè)了116份鉤體病疫區(qū)血清。以MAT作為金標(biāo)準(zhǔn),rIApL32-ELISA和rPL40-ELISA的特異性分別為92％和90％,敏感性分別為56％和49％。Cohen's kappa系數(shù)分別為0.51和0.42。以上結(jié)果表明這兩個(gè)重組蛋白可作為鉤體病血清學(xué)檢測(cè)的靶點(diǎn),檢測(cè)結(jié)果與MAT之間的一致性良好。此外,rPL40和rIApL32還有著一定的協(xié)同作用,如將兩種

3、蛋白的檢測(cè)結(jié)果綜合起來,可使敏感性和Cohen's kappa系數(shù)分別提高至72％和0.56。本研究還評(píng)估了商用診斷試劑盒SERION ELISA IgG,結(jié)果發(fā)現(xiàn)雖然該試劑盒的敏感性達(dá)80％,但特異性僅為69％,Cohen's kappa系數(shù)為0.47,并不如相關(guān)報(bào)道中的檢測(cè)效果好。
　　鉤體病的血清學(xué)檢測(cè)具有依賴宿主免疫水平等局限性,因此本研究還開發(fā)了一種快速檢測(cè)致病性鉤體的側(cè)向?qū)游鲈嚰?。該試紙是基于一?duì)rLipL32單克隆抗

4、體(簡(jiǎn)稱單抗)并結(jié)合膠體金技術(shù)研發(fā)的,其中的單抗對(duì)是從制備的29株能識(shí)別8個(gè)rLipL32抗原表位的單抗中兩兩配對(duì)篩選出來的。該試紙可用于鉤體病的診斷和監(jiān)控,檢測(cè)rLipL32和鉤體菌體的最小值分別為1 ng和104條。該方法填補(bǔ)了鉤體病檢測(cè)相關(guān)領(lǐng)域的空白。
　　與病原學(xué)檢測(cè)相比,核酸檢測(cè)敏感性更強(qiáng),是鉤體監(jiān)測(cè)的重要手段。為了監(jiān)測(cè)江西省鉤體病常見宿主的帶菌情況及評(píng)估PCR檢測(cè)的效果,本研究在分析CDC歷年資料的基礎(chǔ)上,用以G1/(