小鼠4、8-細(xì)胞期胚胎單卵裂球染色體標(biāo)本制備的研究.pdf

1、染色體是生物遺傳的物質(zhì)載體，在生物的世代相傳過程中表現(xiàn)出高度的穩(wěn)定性和物種特異性。通過染色體分析，可為研究物種的起源進化、品種的形成和基因的定位提供細(xì)胞遺傳學(xué)方面的基本資料。本實驗以昆明小鼠4、8-細(xì)胞期胚胎單卵裂球為研究對象，以CZB培養(yǎng)液為基礎(chǔ)培養(yǎng)液，采用空氣干燥法制備單卵裂球的染色體標(biāo)本。實驗中分別添加不同濃度的兩種紡錘體阻斷劑——秋水仙素和長春花堿進行不同阻斷培養(yǎng)時間的實驗以確定阻斷劑的最佳處理濃度和時間，并以不同低滲液對胚胎進

2、行低滲處理以確定最佳的低滲液種類，從而獲得了理想的實驗參數(shù)，進一步對得到的中期分裂相進行了分級評定。實驗結(jié)果如下： 1、在確定秋水仙素不同處理濃度和時間對小鼠4-細(xì)胞期胚胎單卵裂球中期分裂相數(shù)影響的實驗中，經(jīng)統(tǒng)計分析，阻斷培養(yǎng)2小時組中0.6μg/ml濃度組與其他三組差異顯著(0.2μg/ml組、0.4μg/ml組和0.8μg/ml組)；阻斷培養(yǎng)4小時組中0.4μg/ml濃度組與其他三組差異顯著：阻斷培養(yǎng)6小時組中0.6μg/

3、ml濃度組與其他三組差異顯著；阻斷培養(yǎng)8小時組中0.4μg/ml濃度組與其他三組差異顯著(P<0.05)。根據(jù)實驗的實際情況，適宜制備小鼠4-細(xì)胞期胚胎單卵裂球染色體標(biāo)本的秋水仙素的處理濃度和時間是0.6μg/ml和6小時。 2、在確定秋水仙素不同處理濃度和時間對小鼠8-細(xì)胞期胚胎單卵裂球中期分裂相數(shù)影響的實驗中，經(jīng)統(tǒng)計分析，阻斷培養(yǎng)2小時組中四個濃度組差異均不顯著；阻斷培養(yǎng)4小時組中0.2μg/ml濃度組與其他三組差異顯著；

4、阻斷培養(yǎng)6小時組中四個濃度組差異均不顯著；阻斷培養(yǎng)8小時組中0.4μg/ml濃度組與其他三組差異顯著(P<0.05)。根據(jù)實驗的實際情況，適宜制備小鼠8-細(xì)胞期胚胎單卵裂球染色體標(biāo)本的秋水仙素的處理濃度和時間是0.2μg/ml和6小時。 3、在確定長春花堿不同處理濃度和時間對小鼠4-細(xì)胞期胚胎單卵裂球中期分裂相數(shù)影響的實驗中，經(jīng)統(tǒng)計分析，阻斷培養(yǎng)0.1μg/ml濃度組中10小時組與其他三組差異顯著(4小時組、6小時組和8小時組

5、)；阻斷培養(yǎng)0.8μg/ml濃度組中8小時組和10小時組間差異不顯著，但與其他兩組差異顯著；阻斷培養(yǎng)0.5μg/ml濃度組中10小時組與6小時組差異不顯著，而與其他兩組差異顯著；阻斷培養(yǎng)0.7μg/ml濃度組中8小時組與其他三組差異顯著(P<0.05)。根據(jù)實驗的實際情況，適宜制備小鼠4-細(xì)胞期胚胎單卵裂球染色體標(biāo)本的長春花堿的處理濃度和時間是0.1μg/ml和8小時。 4、在確定長春花堿不同處理濃度和時間對小鼠8-細(xì)胞期胚胎

6、單卵裂球中期分裂相數(shù)影響的實驗中，經(jīng)統(tǒng)計分析，阻斷培養(yǎng)0.1μg/ml濃度組中10小時組與其他三組差異顯著：阻斷培養(yǎng)0.3μg/ml濃度組中8小時組和10小時組間差異不顯著，但與其他兩組差異顯著；阻斷培養(yǎng)0.5μg/ml濃度組中10小時組與其他三組差異顯著；阻斷培養(yǎng)0.7μg/ml濃度組中10小時組與其他三組差異顯著(P<0.05)。根據(jù)實驗的實際情況，適宜制備小鼠8-細(xì)胞期胚胎單卵裂球染色體標(biāo)本的長春花堿的處理濃度和時間是0.1μg/

7、ml和10小時。 5、在確定不同種類低滲液處理對小鼠4、8-細(xì)胞期胚胎單卵裂球中期分裂相數(shù)影響的實驗中，經(jīng)統(tǒng)計分析，0.45％氯化鈉低滲液組與其他兩組(0.5％檸檬酸鈉和0.35％氯化鉀)差異顯著(P<0.05)。低滲液選用0.45％氯化鈉時，低滲效果優(yōu)于選用0.5％檸檬酸鈉和0.35％氯化鉀的。 6、在利用最佳參數(shù)制備小鼠4-細(xì)胞期胚胎單卵裂球染色體標(biāo)本時，經(jīng)統(tǒng)計分析，兩種阻斷劑的作用效果差異不顯著；而在制備小鼠8