人胚胎肌肉組織來(lái)源的隨機(jī)惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞系的生物學(xué)特性.pdf

1、第一部分:
　　背景與目的:
　　非整倍體是癌細(xì)胞的最大遺傳特征,非整倍體是指細(xì)胞核內(nèi)染色體數(shù)目出現(xiàn)異常。100多年前就有人提出非整倍體是癌癥的起因假說(shuō),近來(lái)越來(lái)越多的研究證實(shí)這種假說(shuō)成立的可能性。但非整倍體作為獨(dú)立因素能否導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生,目前還沒(méi)有確切的結(jié)論。本實(shí)驗(yàn)用人胚胎肌肉細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),通過(guò)聚乙二醇融合肌肉細(xì)胞,以期獲得非整倍體細(xì)胞,由于聚乙二醇是非致突變物質(zhì),在融合過(guò)程中不會(huì)有基因突變的產(chǎn)生,排除了基因突變的作用,通

2、過(guò)此方法獲得非整倍體細(xì)胞,進(jìn)一步分析產(chǎn)生的非整倍體細(xì)胞能否形成腫瘤,從而對(duì)腫瘤產(chǎn)生的誘因-非整倍體學(xué)說(shuō)進(jìn)行深入研究。
　　材料和方法:
　　用人胚胎肌肉細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),50％聚乙二醇進(jìn)行細(xì)胞融合,觀察能否產(chǎn)生非整倍體細(xì)胞;利用3-甲基膽蒽(MCA)和秋水仙素(colcemid)聯(lián)合處理人胚胎肌肉細(xì)胞,產(chǎn)生的非整倍體細(xì)胞作為陽(yáng)性對(duì)照;未進(jìn)行任何處理的肌肉細(xì)胞作為陰性對(duì)照,通過(guò)染色體分析和流式細(xì)胞儀分析檢測(cè)非整倍體細(xì)胞。對(duì)非整倍體

3、細(xì)胞進(jìn)行長(zhǎng)期培養(yǎng),觀察細(xì)胞能否惡性轉(zhuǎn)化形成腫瘤。
　　結(jié)果:
　　通過(guò)流式細(xì)胞儀分析發(fā)現(xiàn),通過(guò)細(xì)胞融合及 MCA和秋水仙素(colcemid)處理均產(chǎn)生非整倍體細(xì)胞,染色體分析發(fā)現(xiàn)這些細(xì)胞染色體數(shù)目是異常的,產(chǎn)生的非整倍體細(xì)胞以亞二倍體為主,少量細(xì)胞為超二倍體;而且部分非整倍體細(xì)胞短期培養(yǎng)可以增殖,其中一次融合永生化,但均未發(fā)生惡變。
　　結(jié)論:
　　聚乙二醇對(duì)人胚胎肌肉正常二倍體細(xì)胞融合,能夠產(chǎn)生非整倍體細(xì)胞。

4、長(zhǎng)期培養(yǎng),未發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化。
　　第二部分:
　　背景和目的：
　　本實(shí)驗(yàn)室通過(guò)人胚胎肌肉細(xì)胞的培養(yǎng),獲得自發(fā)惡性轉(zhuǎn)化為肉瘤細(xì)胞系,分別命名MS0812、MS0504、MS3、MS4和MS5。本實(shí)驗(yàn)對(duì)這種自發(fā)惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞系的染色體變化進(jìn)行研究,揭示這種肉瘤細(xì)胞系的染色體變化特點(diǎn)。
　　材料和方法:
　　染色體分析轉(zhuǎn)化肉瘤細(xì)胞系MS0812、MS0504、MS3、MS4和MS5染色體數(shù)目和結(jié)構(gòu)的變化特點(diǎn)。

5、通過(guò)流式細(xì)胞儀分析進(jìn)行染色體倍體研究。
　　結(jié)果:
　　肉瘤細(xì)胞系幾乎所有的細(xì)胞核型都存在染色體數(shù)目和結(jié)構(gòu)的異常,染色體數(shù)目大多在46條以上,結(jié)構(gòu)異常包括環(huán)形染色體、線形染色體、雙著絲粒染色體和廣泛的易位。流式細(xì)胞儀分析肉瘤細(xì)胞系全部是非整倍體。
　　結(jié)論:
　　MS0812、MS0504、MS3、MS4和MS5肉瘤細(xì)胞系是非整倍體細(xì)胞,染色體的數(shù)目和結(jié)構(gòu)存在大范圍的異常。
　　第三部分:
　　目的:

6、
　　觀察苦參堿(matrine)對(duì)體外培養(yǎng)的人肉瘤細(xì)胞系MS0812細(xì)胞的增殖和誘導(dǎo)調(diào)亡作用。
　　方法:
　　苦參堿處理人肉瘤細(xì)胞系 MS0812后,應(yīng)用 MTT比色法檢測(cè)不同濃度苦參堿和不同作用時(shí)間對(duì)MS0812細(xì)胞的增殖作用的影響,DNA凝膠電泳、TUNEL法和流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡。
　　結(jié)果:
　　苦參堿對(duì)MS0812細(xì)胞增殖具有抑制作用,其增殖抑制作用隨作用時(shí)間延長(zhǎng)及藥物濃度升高更加明顯,具有