黃蜀葵花總黃酮對(duì)缺血性損傷的保護(hù)機(jī)制研究.pdf

1、黃蜀葵花為錦葵科秋葵屬植物黃蜀葵的干燥花，最先記錄在《嘉佑本草》，分布廣泛、資源豐富?！侗静菥V目》記載:其花氣味甘、寒、滑、無毒，主治小便淋及催生，治諸惡瘡膿水久不瘥者，作末敷之即愈，為瘡家要藥，消疽腫，浸油涂湯火傷等?，F(xiàn)代研究證實(shí)黃蜀葵花提取物黃酮類成分不僅對(duì)瘡瘍有明顯的治療作用，對(duì)缺血導(dǎo)致心、腦、組織等損傷也具有明顯的保護(hù)作用。本論文通過黃蜀葵花總黃酮在體外對(duì)內(nèi)皮祖細(xì)胞抑制凋亡作用及對(duì)整體水平缺血性損傷的保護(hù)作用進(jìn)行系統(tǒng)的探討，研究

2、內(nèi)容如下:
　　當(dāng)組織因各種原因?qū)е碌娜毖l(fā)生后，組織的無氧代謝替換了有氧代謝，產(chǎn)生大量的糖酵解產(chǎn)物，導(dǎo)致組織水腫、炎癥浸潤及組織纖維壞死，組織損傷發(fā)生。對(duì)于缺血性損傷疾病的發(fā)病機(jī)制，目前公認(rèn)的作用機(jī)制涉及能量代謝、鈣超載、氧自由基、炎癥細(xì)胞活化和各種促炎性細(xì)胞因子釋放等因素，但其發(fā)病的具體分子機(jī)制尚未完全闡明，抑制組織損傷的藥物也正處于研究階段，目前臨床尚無針對(duì)發(fā)生缺血后抑制組織損傷的保護(hù)、治療性藥物。各種治療方向最終均作用于內(nèi)

3、皮細(xì)胞，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞向血管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化，促進(jìn)血管新生達(dá)到組織修復(fù)、器官功能恢復(fù)的最終目的。傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)在治療缺血性疾病方面歷史悠久，效果顯著。其中黃蜀葵花在難治性瘡瘍治療中體現(xiàn)出良好療效，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究已經(jīng)證實(shí)一定劑量的黃蜀葵花總黃酮對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的遷移和分化具有明顯的促進(jìn)作用。內(nèi)皮細(xì)胞來源于內(nèi)皮祖細(xì)胞，而內(nèi)皮祖細(xì)胞在體內(nèi)數(shù)量極少，提高內(nèi)皮祖細(xì)胞在缺血缺氧狀態(tài)下抗氧化、抑制凋亡及抑制炎癥能力并促進(jìn)其轉(zhuǎn)化為成熟的內(nèi)皮細(xì)胞也是治療缺血性疾病的關(guān)鍵。黃

4、蜀葵花總黃酮作為傳統(tǒng)中藥的提取物，具有多組份優(yōu)勢，在復(fù)雜的缺血性損傷中起到保護(hù)并治療的多靶點(diǎn)作用值得探討。
　　通過黃蜀葵花總黃酮干預(yù)后肢缺血大鼠動(dòng)物模型，觀察TFA對(duì)炎癥的抑制作用。經(jīng)過后肢缺血大鼠實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷臉?gòu)建，給予黃蜀葵花總黃酮干預(yù)四周后處死大鼠，通過流式細(xì)胞技術(shù)檢測血液中調(diào)節(jié)性T細(xì)胞亞群在模型及給藥前后的變化水平，確定黃蜀葵花總黃酮具有抑制炎癥，促進(jìn)損傷部位愈合的作用;RT-PCR進(jìn)一步驗(yàn)證了損傷部位腫瘤壞死因子α的表達(dá)水

5、平，黃蜀葵花總黃酮可以顯著抑制腫瘤壞死因子α的基因表達(dá)水平，抑制炎癥反應(yīng)在損傷部位的級(jí)聯(lián)反應(yīng)，通過促血管生成進(jìn)而達(dá)到對(duì)缺血性損傷的保護(hù)。該部分的研究結(jié)果與后續(xù)藥效學(xué)數(shù)據(jù)一致，也從另一個(gè)角度驗(yàn)證了黃蜀葵花總黃酮對(duì)缺血組織的保護(hù)作用，同時(shí)首次證實(shí)了黃蜀葵花總黃酮具有調(diào)控調(diào)節(jié)性T細(xì)胞細(xì)胞亞群的作用。
　　通過黃蜀葵花總黃酮干預(yù)不同狀態(tài)下的內(nèi)皮祖細(xì)胞，觀察TFA的抗凋亡作用。在體外條件下進(jìn)行藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)研究，確定黃蜀葵花總黃酮在體外條件下可

6、以保護(hù)內(nèi)皮祖細(xì)胞的免受ROS引起的氧化損傷，對(duì)內(nèi)皮祖細(xì)胞的增殖分化具有保護(hù)作用。內(nèi)皮祖細(xì)胞經(jīng)過H2O2處理后，發(fā)生明顯的細(xì)胞凋亡，但是經(jīng)過黃蜀葵花總黃酮的藥物干預(yù)后，RT-qPCR檢測發(fā)現(xiàn)凋亡相關(guān)基因Bak，caspase-3，caspase-9基因表達(dá)量明顯降低，顯示出黃蜀葵花總黃酮具有明顯的抗凋亡作用。由此推測在整體水平，黃蜀葵花總黃酮具有相同的作用效果，可以保護(hù)缺血損傷部位內(nèi)皮祖細(xì)胞的凋亡，進(jìn)而發(fā)揮對(duì)缺血組織的保護(hù)作用。
　

7、　通過后肢缺血實(shí)驗(yàn)大鼠模型的構(gòu)建，給藥TFA治療四周后處死大鼠，通過分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證黃蜀葵花總黃酮的干預(yù)效果。黃蜀葵花總黃酮可以明顯改善缺血大鼠后肢的炎癥損傷水平，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)大鼠血清中的總自由基水平明顯降低，caspase-3磷酸化水平降低，凋亡抑制蛋白Bcl-2的蛋白表達(dá)量明顯升高，證實(shí)了黃蜀葵花總黃酮的對(duì)后肢缺血組織的保護(hù)作用。
　　通過黃蜀葵花總黃酮干預(yù)心肌缺血再灌注損傷動(dòng)物模型，觀察TFA的心肌缺血再灌注損傷保護(hù)作用

8、。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)黃蜀葵花總黃酮能顯著改善心臟缺血再灌注損傷，顯著改善心臟缺血再灌注氧化應(yīng)激水平，抑制心臟缺血再灌注炎癥水平，可以顯著抑制心臟缺血再灌注狀態(tài)下的炎癥小體的激活。
　　本課題研究表明:1、黃蜀葵花總黃酮在整體水平也可以降低損傷組織的炎癥水平，下調(diào)腫瘤壞死因子α的表達(dá)，可以提高調(diào)節(jié)性T細(xì)胞亞群的比例來發(fā)揮抑制炎癥，保護(hù)受損組織的作用。2、黃蜀葵花總黃酮在體外可以保護(hù)內(nèi)皮祖細(xì)胞免受氧化應(yīng)激導(dǎo)致的凋亡。3、黃蜀葵花總黃酮在整體水平