深低溫對全腦缺血性損傷保護機制的基因組學(xué)研究.pdf

1、本文論述了深低溫對全腦缺血性損傷保護機制的基因組學(xué)研究。 國際醫(yī)學(xué)界把低溫劃分為輕度低溫33-35oC，中度低溫28-32 oC，深度低溫17-27 oC和超深度低溫2-16 oC。大量動物試驗和臨床實踐證實低溫具有顯著的腦保護作用，但隨著溫度的降低，副作用也會逐步增加。輕中度低溫由于副作用小，目前在臨床上已經(jīng)得到了廣泛的運用。但臨床上還有許多病理生理狀態(tài)不能僅靠輕中度低溫解決問題。目前國內(nèi)外已經(jīng)有大量的試驗證實深低溫對全腦缺血

2、缺血性損傷具有更好的保護作用，它能明顯增加腦組織對缺血的耐受性，并且深低溫腦保護技術(shù)已經(jīng)開始用于臨床。關(guān)于低溫腦保護作用機制，國內(nèi)外學(xué)者已經(jīng)作了較多的研究。但目前對低溫腦保護相關(guān)基因尚缺乏足夠的認識。 本試驗應(yīng)用基因組學(xué)技術(shù)研究全腦缺血大鼠海馬基因表達變化以及深低溫對全腦缺血大鼠海馬基因表達的影響，篩選出深低溫腦保護相關(guān)基因，為今后更為系統(tǒng)全面的分析闡明低溫腦保護機理奠定科學(xué)基礎(chǔ)。 第一部分大鼠全腦缺血早期海馬基因表達

3、譜的變化。 目的：篩選出全腦缺血大鼠海馬差異表達基因。 方法：建立大鼠體外循環(huán)模型，實驗分成兩組，對照組(n=3)：建立體外循環(huán)5分鐘后取大鼠海馬組織；實驗組(n=3)：停循環(huán)全腦缺血5分鐘后取大鼠海馬組織。采用Affymetrix 大鼠全基因組芯片檢測兩組動物海馬基因表達的變化，獲取差異表達基因。 結(jié)果：篩選出差異表達基因共有55個，其中28個基因表達有顯著性差異（P<0.01），上調(diào)30個，下調(diào)25個。

4、 結(jié)論：篩選出的全腦缺血大鼠海馬差異表達基因?qū)﹃U明全腦缺血性損傷的分子生物學(xué)機制有重要意義。 第二部分深低溫對全腦缺血大鼠海馬基因組表達的影響。 目的：篩選出深低溫對全腦缺血大鼠海馬影響的差異表達基因。 方法：建立大鼠體外循環(huán)模型，實驗分成兩組，常溫缺血組(n=3)：常溫條件下停循環(huán)全腦缺血5分鐘；低溫缺血組(n=3)：深低溫條件下停循環(huán)全腦缺血5分鐘。采用Affymetrix 大鼠全基因組芯片檢測

5、兩組動物海馬基因表達的變化，獲取差異表達基因。 結(jié)果：篩選出差異表達基因共有75個，其中39個基因表達有顯著性差異（P<0.01），上調(diào)33個，下調(diào)42個。 結(jié)論：深低溫對全腦缺血大鼠海馬基因表達有明顯影響，這些差異表達基因可能與深低溫腦保護作用相關(guān)。 第三部分深低溫對全腦缺血大鼠海馬mGluR3表達的影響。 目的：研究深低溫對全腦缺血大鼠海馬代謝型谷氨酸受體3型(mGluR3)表達的影響，并探討其在深

6、低溫腦保護機制中的作用。 方法：建立大鼠體外循環(huán)模型，實驗分成3組，對照組(n=6)：建立大鼠體外循環(huán)模型5分鐘后取海馬組織；常溫缺血組(n=6)：常溫條件下停循環(huán)全腦缺血5分鐘；低溫缺血組(n=6)：深低溫條件下停循環(huán)全腦缺血5分鐘。采用實時熒光定量RT-PCR技術(shù)檢測3組動物海馬mGluR3的表達。 結(jié)果：常溫缺血組目的基因的表達值比對照組明顯下調(diào)， p＜0.01,有顯著性統(tǒng)計學(xué)差異；低溫缺血組目的基因的表達值比對照