菠菜種子胰蛋白酶抑制劑分離純化與性質(zhì)研究.pdf

1、蛋白酶抑制劑是一類能選擇性地降低靶蛋白酶活性的小分子量蛋白質(zhì)。植物蛋白酶抑制劑參與了植物內(nèi)源性蛋白酶活力的調(diào)節(jié)、植物貯藏蛋白的運輸、保護植物免受真菌和昆蟲的侵蝕，作為抗蟲因子，已廣泛地應(yīng)用于抗蟲轉(zhuǎn)基因植物的選育。而且蛋白酶抑制劑作為新型藥物在癌癥、艾滋病等疾病的治療方面具有應(yīng)用價值。我們從菠菜種子中分離純化得到胰蛋白酶抑制劑SOTI，對其進行了部分性質(zhì)研究。藜科菠菜屬植物菠菜(SpinaciaoleraceaL)種子研磨粉碎后，經(jīng)過乙醚

2、脫脂、pH4.5的硫酸抽提、65℃熱變性除雜蛋白、35-75％飽和度硫酸銨分部鹽析等步驟，得到抑制劑粗提物。進一步利用DEAE-52纖維素離子交換柱層析，胰蛋白酶—Sepharose4B以及G75葡聚糖凝膠過濾，最后從粗提液中分離純化得到其中的胰蛋白酶抑制劑(SOTI)。SDS-PAGE分析其近似分子量為22kD。等電聚焦實驗顯示其等電點為4.02。熱穩(wěn)定性實驗顯示SOTI在100℃水浴條件下可以保持部分的抑制活性，具有極高的熱穩(wěn)定性。