視交叉上核節(jié)律相關基因參與電針重置晝夜節(jié)律的作用研究.pdf

1、目的：通過對晝夜節(jié)律紊亂小鼠進行電針治療，研究電針對節(jié)律的調整作用，以及節(jié)律紊亂小鼠視交叉上核（suprachiasmatic nucleus,SCN）內多種節(jié)律相關基因及節(jié)律相關轉錄因子參與電針重置晝夜節(jié)律的作用。
　　方法：采用成都中醫(yī)藥大學時間生物學實驗室動物自發(fā)活動記錄及分析系統(tǒng)，以及Clocklab節(jié)律數(shù)據(jù)采集分析系統(tǒng)對實驗動物進行監(jiān)測和記錄。將經過篩選的44只C57BL/6J近交系小鼠雄鼠分為：空白組（n=10）、模型

2、組（n=12）、電針組（n=10）、自然恢復組（n=12）四組。小鼠馴化時維持光暗交替(Light and Dark，LD)光照條件，即開燈時間設置為06：00~18：00，關燈時間為18：00~次日06：00，使實驗室光照條件與外界環(huán)境同步?？瞻捉M小鼠維持馴化同步時光照條件，不予其他處理，20天后于ZT18（ZT：Zeitgeber time，為授時因子時間；本實驗ZT0為06:00，ZT16即為22:00)時相點處死取材。模型組小鼠

3、LD馴化10天后開始造模，即進行10天的超前性光暗周期轉移(advances of light/dark cycle)，10天后節(jié)律紊亂模型建立，造模成功后于ZT18時相點處死取材。自然恢復組及電針組小鼠LD馴化10天，節(jié)律同步后開始造模，造模10天后恢同步期光照條件。自然恢復組在造模結束后第1天至第3天于ZT16時相點進行捆綁以平衡電針組因捆綁造成的刺激，電針組于造模結束后第1天至第3天于ZT16時相點進行電針干預，選取“肝俞”和“至

4、陽”穴，電針設置：2/15Hz，0.2mA，電針15min，每天1次，連續(xù)電針3天。第三次電針結束后2h處死動物并取材保存至-80℃冰箱。采用PCR Array高通量檢測方法檢測各組動物SCN內節(jié)律相關基因及部分節(jié)律相關轉錄因子相對表達量。
　　結果：(1)電針重置晝夜節(jié)律結果：造模前各組動物峰相位、起始活動時間以及周期比較均無統(tǒng)計學差異（P>0.05)。造模后模型組、自然恢復組及電針組與造模前比較峰相位、起始活動時間、周期均顯著

5、超前（P<0.05)。再同步時期，電針組電針干預后峰相位、起始活動時間后移，與造模時及空白組比較具有統(tǒng)計學差異（P<0.05)；電針組再同步第一天及第二天周期與空白組和造模前比較有統(tǒng)計學差異（P<0.05)，再同步第三天與空白組和造模前比較無統(tǒng)計學差異（P>0.05）。(2)電針影響視交叉上核節(jié)律相關基因結果：造模后模型組動物SCN節(jié)律相關基因與空白組比較，模型組小鼠節(jié)律相關基因表達上調8個(Aanat、Crx、Epo、Nkx2-5、P

6、ax4、Prf1、Rora、Stat5a)，下調4個(Egr1、Per1、Per3、Prokr2)；自然恢復組與模型組比較上調3個基因(Esrra、Mat2a、Per3)，下調11個(Cartpt、Crx、Epo、Kcnma1、Mtnr1b、Nkx2-5、Nms、Pax4、Prf1、Prkacb、Prkca)；電針組與模型組比較，節(jié)律相關基因上調6個(Egr1、Esrra、Mat2a、Per1、Per3、Prokr2)，下調21個(Aa

7、nat、Arntl、Cartpt、Crx、Csnk1e、Epo、Kcnma1、Mtnr1b、Myod1、Nkx2-5、Nms、Opn3、Pax4、Prf1、Prkacb、Prkca、Prkcb、Prokr2、Rora、Rorb、Slc9a3、Tgfb1)。其中電針顯著影響基因4個，分別是：生物鐘基因：Per1；節(jié)律轉錄因子：Egr1；以及CREB信號：AANAT，Prokr2。Per1，Egr1，Prokr2造模后均表現(xiàn)為明顯下調，自然