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文檔簡介
1、晝夜節(jié)律是機體調節(jié)自身生理活動和行為來適應環(huán)境的近24小時的周期性變化。晝夜節(jié)律的調節(jié)方式是由正調控元件和負調控元件組成的轉錄/翻譯負反饋環(huán)路。除此之外,晝夜節(jié)律還受到其他許多因素調控,其中最重要的一個因素就是能量代謝,但是能量代謝影響晝夜節(jié)律的分子機制尚不清楚。我們通過酵母雙雜交技術篩選發(fā)現(xiàn)LIPIN1與BMAL1分子之間存在相互作用。LIPIN1蛋白參與脂質合成和能量代謝。本研究擬進一步研究LIPIN1在晝夜節(jié)律和能量代謝中的作用,
2、探討能量代謝影響晝夜節(jié)律的可能通路。
目的:闡明LIPIN1在晝夜節(jié)律中的作用;研究LIPIN1是否介導了能量代謝對晝夜節(jié)律的調節(jié)。
方法:通過免疫沉淀驗證LIPIN1和BMAL1的相互作用;通過GSTpull down的方法尋找LIPIN1與BMAL1,CLOCK相互作用的結合域;通過熒光素酶報告系統(tǒng)研究LIPIN1對BMAL1,CLOCK的功能的影響;通過構建LIPIN1的突變體,檢測螢光素酶活性,尋找LIPIN
3、1對BMAL1,CLOCK的功能影響的結構域;通過免疫熒光共定位尋找LIPIN1在細胞中發(fā)揮影響B(tài)MAL1,CLOCK功能的可能性原因的解釋。通過LIPIN1基因敲除小鼠的行為學實驗,研究LIPIN1對晝夜節(jié)律的作用;通過實時定量熒光PCR研究LIPIN1敲除后對時鐘基因表達的影響。
結果:LIPIN1與BMAL1、CLOCK之間存在相互作用, LIPIN1b的C端是其與BMAL1、CLOCK相互作用的重要結構域。在小鼠肝臟中
4、,LIPIN1與BMAL1的相互作用具有晝夜節(jié)律性,在CT8-CT16最高。LIPIN1可以劑量依賴性地抑制CLOCK/BMAL1的轉錄活性。其可能的作用機制是促進BMAL1從細胞核轉移到細胞質中。LIPIN1基因敲除小鼠肝臟中一些CLOCK/BMAL1靶基因表達的晝夜節(jié)律出現(xiàn)變化,主要表現(xiàn)為CT9的表達量比野生型小鼠高。白天進食可以逐步逆轉小鼠肝臟的節(jié)律基因表達,而這種改變在LIPIN1基因敲除小鼠中變緩。LIPIN1在果蠅神經(jīng)系統(tǒng)的
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