甘薯β-淀粉酶提取純化及酶學(xué)性質(zhì)研究.pdf

1、β-淀粉酶主要存在于植物和微生物，微生物中的β-淀粉酶存有耐熱性差，提取成本較高等缺點，從植物中提取的β-淀粉酶酶活力高，耐熱性好，作用pH范圍較廣，生產(chǎn)工藝簡單、成本較低。甘薯在我國的種植面積廣、價格較低，適合作為提取β-淀粉酶的原材料，但甘薯主要被用來生產(chǎn)粉絲和淀粉，其他用途卻很少。甘薯淀粉生產(chǎn)中會產(chǎn)生大量的廢水，其中含有大量β-淀粉酶，如果能夠把β-淀粉酶提取出來，不但能夠減少污染，還具有經(jīng)濟效益。本文對來源于甘薯的β-淀粉酶進行

2、了提取、純化、鑒定及酶學(xué)性質(zhì)研究，主要研究結(jié)果如下：
　　利用水提法在不同條件下提取甘薯β-淀粉酶，結(jié)果表明，在pH5.5的磷酸緩沖液與甘薯液料比為2:1條件下，提取效果最好，酶活力為122336U/g。通過對甘薯產(chǎn)地、質(zhì)地、放置時間對比得出，陜西白心甘薯在貯藏30天后，酶活力最高，相對酶活力為129％。
　　通過對硫酸銨鹽析和有機溶劑沉淀甘薯β-淀粉酶的比較實驗，得出在丙酮體積比3:1、pH為4.5～5.0條件下，回收率最

3、高，為90.66%，相對于粗酶液，純度提高3.29倍。對甘薯β-淀粉酶進行超濾實驗，得出了超濾通量的最佳操作條件：操作壓力0.14Mpa，操作溫度20℃，操作時間40min，料液pH7.0。甘薯β-淀粉酶經(jīng)過DEAE柱層析純化后，酶活回收率為18.5%，相對于粗酶液，純度提高14.6倍。
　　采用聚丙烯酰胺凝膠電泳對純化后的酶進行鑒定，結(jié)果為一條帶，條帶清晰，分子量與標(biāo)品基本相同，約為55000KDa。在柱溫30℃、流動相為乙腈：

4、水3:1，V/V、流速1.5ml/min、進樣體積10μl條件下，利用高效液相色譜對純化后的β-淀粉酶淀粉分解產(chǎn)物進行了分析，結(jié)果表明，分解產(chǎn)物麥芽糖含量為69%。
　　對純化后的酶的酶學(xué)性質(zhì)，包括最適溫度、溫度穩(wěn)定性、最適pH、pH穩(wěn)定性、金屬離子作用進行了研究，結(jié)果表明，β-淀粉酶作用的最適溫度為50℃，溫度的穩(wěn)定性在30-50℃之間，最適pH為5.0，pH的穩(wěn)定性在3.0-6.0之間保持良好，Mn2+對β-淀粉酶有很好的激活