30325.geobacillusspα淀粉酶基因的克隆、表達、酶學性質研究及分子進化

1、廣西大學碩士學位論文Geobacillusspα淀粉酶基因的克隆、表達、酶學性質研究及分子進化姓名：薛蓓申請學位級別：碩士專業(yè)：微生物學指導教師：韋宇拓20090701Geobacillusspn一淀粉酶基因的克隆、表達、酶掌性質研究反分子進化利用定點飽和突變對GeobacillusspGXSla一淀粉酶基因進行改造，首先是借助計算機根據(jù)GeobacillusspGXS1一淀粉酶基因的同源建模三維結構信息，利用ProSa2003軟件根據(jù)

2、能量(knowledge—basedpotentials)最低化原則，計算機輔助沒計確定GeobacillusspGXSla一淀粉酶基岡氨基酸飽和突變位點，通過同源建模分析表明192D、221E和289D三個位點都是活性中心位點。利用兼并引物對192，221，289位點的氨基酸分別進行飽和突變，篩選到四個有活力的突變D192A、E221N、E221L和D289L。對突變酶進行酶學性質的研究表明D192A的最適溫度、最適pH、米氏常數(shù)、比

3、活力和Tm分別為65。C、70、341mg／mL、2839、26978U／mg、75。C；突變酶E221N的最適溫度、最適pH、米氏常數(shù)、比活力和Tm分別為65。C、70、384mg／mL、37064U／mg、77℃；突變酶E221L的最適溫度、最適pH、米氏常數(shù)、比活力和Tm分別為70。C、65、266mg／mL、31825U／mg、775“C；突變酶D289L的最適溫度、最適pH、米氏常數(shù)、比活力和Tm分別為60。C、70、434m