莜麥中α-淀粉酶抑制劑的分離純化與性質(zhì)研究.pdf

1、α-淀粉酶抑制劑(α-amylase inhibitor，α-AI)屬于糖苷水解酶抑制劑的一種，在大多植物種子的胚乳中都有存在，并且其含量與淀粉含量成正比，淀粉含量越高，α-淀粉酶抑制劑的含量就越高。目前已知的α-AI主要來源于植物、微生物以及人工合成等途徑。天然植物資源中的α-淀粉酶抑制劑以其來源廣泛、對環(huán)境的污染程度小、副作用弱而成為人們關(guān)注的熱點(diǎn)。
　　本文從小雜糧作物莜麥種子中，去殼粉碎，經(jīng)4℃丙酮脫脂、30％-60％硫酸

2、銨分級沉淀、Q-Sepharose fast flow柱層析、Heparin-Sepharose fast flow柱層析以及Sephacryl-200凝膠柱層析，獲得電泳純的α-淀粉酶抑制劑，純化倍數(shù)達(dá)41.30，得率1.23％。經(jīng)Superose12凝膠分子排阻層析對獲得的莜麥淀粉酶抑制劑進(jìn)行天然分子量的測定，比照SDS-PAGE結(jié)果，可知它是以單體形式存在的，相對分子量為23.76kD。對該α-淀粉酶抑制劑的巰基基團(tuán)數(shù)目的測定，揭

3、示該α-淀粉酶抑制劑含有15個巰基基團(tuán)，其中形成約為4對分子內(nèi)的二硫鍵。
　　在對莜麥α-淀粉酶抑制劑的性質(zhì)分析中，揭示其不僅可以抑制α-淀粉酶的活性，還可以抑制胰蛋白酶的活性，是一種雙功能抑制劑，并且該抑制劑還具有抗真菌的活性（幾丁質(zhì)酶活性）。電泳純的莜麥α-淀粉酶抑制劑的α-淀粉酶抑制的比活力為26.43 IU/mg，反應(yīng)的最適溫度為40℃，最適pH值為pH8.0，pH穩(wěn)定范圍在6.0-10.0，溫度耐受性強(qiáng)，100℃保溫半小

4、時仍可以保留50％抑制活性，其屬于競爭性抑制類型。對其胰蛋白酶抑制劑活性的分析，揭示其電泳純蛋白的比活力為16.13 IU/mg，在25-55℃間受溫度影響較小，65℃保溫半小時，仍可保留50％以上的活力，反應(yīng)的最適溫度為45℃，pH穩(wěn)定范圍為5.0-10.0，最適pH值為pH8.0，屬競爭性抑制類型，抑制活性低于典型胰蛋白酶抑制。利用實(shí)驗室保存的白腐菌（Trametessp.SQ01），毛殼菌（Chaetomiaceae）、紅曲霉（M