蛋白酶Corin與妊娠期高血壓疾病的研究.pdf

1、妊娠期高血壓疾病嚴(yán)重影響母嬰健康，是孕產(chǎn)婦及圍生兒發(fā)病及死亡的主要原因之一。近來研究發(fā)現(xiàn)，抗血管生成因子sFlt-1，sEng的升高，促血管生成因子胎盤生長(zhǎng)因子（PlGF）的下降可能參與妊娠期高血壓疾病的形成及進(jìn)展。我們課題組研究發(fā)現(xiàn)Ⅱ型跨膜絲氨酸蛋白酶Corin在調(diào)節(jié)高血壓和心功能方面有非常重要的作用，與高血壓、心肌肥厚及心力衰竭的發(fā)病有關(guān)。妊娠期高血壓疾病為高血壓的特殊類型，有研究表明Corin可能在妊娠高血壓發(fā)病中起作用。

2、　　目的：以妊娠期高血壓疾病患者為研究對(duì)象，通過檢測(cè)育齡女性血漿Corin水平及血管生成因子，分析血漿中可溶性Corin與妊娠期高血壓疾病的關(guān)系，并對(duì)妊娠期高血壓疾病疾病患者Corin基因進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)與疾病相關(guān)的基因突變，探討妊娠期高血壓發(fā)病的分子機(jī)制，并為妊娠期高血壓疾病的診斷提供新方法。
　　方法：
　　1、應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法（EnzymeLinkedImmunosorbentAssay,ELISA）檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組

3、共計(jì)456人血漿中Corin、sEng、sFlt-1、PlGF、sFlt-1/PlGF水平。
　　2、對(duì)子癇前期患者Corin基因進(jìn)行測(cè)序，通過Chromas軟件將測(cè)序結(jié)果與Corin基因序列NM_006587.2進(jìn)行比對(duì)。根據(jù)檢測(cè)到的突變位點(diǎn)，采用定點(diǎn)突變的方法構(gòu)建突變質(zhì)粒K317E-Corin。
　　3、將野生型質(zhì)粒wt-Corin及Corin突變體轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞及穩(wěn)定表達(dá)人pro-ANP重組蛋白的HEK293細(xì)胞

4、，收集上清及裂解液,通過Westernblot分析突變體K317E突變對(duì)Corin的表達(dá)及功能的影響。
　　結(jié)果：
　　1、血漿中可溶性Corin水平，妊娠女性顯著高于正常未孕組；妊娠組中，子癇前期組顯著高于正常孕婦（1.31±0.06vs0.95±0.03ng/mL,p<0.001）；單純?nèi)焉锲诟哐獕航M及單純蛋白尿組分別為1.07±0.04ng/mL和1.25±0.06ng/mL，單純蛋白尿組顯著高于正常妊娠組（p<0.0

5、01）。
　　2、子癇前期患者組，血漿PlGF值顯著低于正常育齡孕婦組（39.1±9.2vs96.0±10.0pg/mL，p=0.001），血漿sFlt-1值顯著高于正常育齡孕婦組（16.0±1.5vs8.4±0.4ng/mL,p<0.001），sFlt-1/PlGF比率顯著高于正常育齡孕婦組（1352.5±236.0vs261±25.9,p<0.001），血漿sEng值顯著高于正常育齡孕婦組（17.6±0.5vs14.9±0.3

6、ng/mL，p<0.001）。
　　3、對(duì)子癇前期患者組Corin基因進(jìn)行測(cè)序分析，發(fā)現(xiàn)其中一患者的第七號(hào)外顯子出現(xiàn)改變，致使Corin蛋白317號(hào)氨基酸由賴氨酸K變?yōu)楣劝彼酔,即K317E。在其他患者及正常人中未發(fā)現(xiàn)此改變，認(rèn)定其為基因突變。
　　4、將野生型Corin（wt-Corin）及K317E表達(dá)載體轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞或穩(wěn)定表達(dá)人pro-ANP的HEK293細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)K317E表達(dá)量未受明顯影響，但活化pro-A

7、NP為ANP的能力降至wt-Corin的36±6％。
　　結(jié)論：
　　1、血漿可溶性Corin在子癇前期患者中顯著升高，提示可作為診斷該病的分子標(biāo)志。
　　2、在子癇前期患者發(fā)現(xiàn)Corin的基因突變，使第317號(hào)氨基酸由賴氨酸K變?yōu)楣劝彼酔（K317E），該突變國(guó)內(nèi)外未見報(bào)道，為新發(fā)現(xiàn)的基因突變。
　　3、體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究顯示，K317E突變影響Corin的活化及對(duì)pro-ANP的剪切能力，是妊娠期高血壓疾病的潛