膜聯(lián)蛋白A4在肛門直腸畸形胎鼠末端直腸中的表達(dá).pdf

1、目的
　　先天性肛門直腸畸形（Congenitalanorectalmalformations，ARMs）是小兒外科常見(jiàn)的消化系統(tǒng)畸形，發(fā)病率在世界范圍內(nèi)占出生嬰兒的1/5000-1/1500，在中國(guó)高達(dá)1/3500。肛門直腸畸形患兒不僅肛門直腸本身發(fā)育缺陷，還常伴有泌尿系統(tǒng)以及其他系統(tǒng)的畸形，嚴(yán)重畸形患兒難以存活，手術(shù)治療后近1/3的患兒合并不同程度的排便功能障礙等而影響生活質(zhì)量，給社會(huì)和家庭帶來(lái)了沉重的負(fù)擔(dān)。
　　膜聯(lián)蛋

2、白A4(Annexin-4，ANXA4)是一類Ca2+依賴的磷脂結(jié)合蛋白質(zhì)，具有參與囊胞運(yùn)輸、促進(jìn)胞膜融合、細(xì)胞骨架運(yùn)動(dòng)、鈣離子通道形成、磷脂化與膜受體的功能調(diào)節(jié)等功能，參與細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化及轉(zhuǎn)化。在人體許多器官組織如腎、肺、氣管和胃腸道等組織大量表達(dá)。并且有研究證實(shí)其先天性肛門直腸畸形和先天性脊柱裂胎鼠脊髓中表達(dá)下調(diào)。但是目前尚無(wú)有關(guān)ANXA4在肛門直腸畸形胎鼠末端直腸表達(dá)、分布情況的報(bào)道。本研究的目的在于觀察ANXA4在妊娠第16天

3、(E16)和妊娠第19天(E19)的正常和ARMs胎鼠末端直腸的表達(dá)，以探討他們與ARMs發(fā)生的關(guān)系。
　　實(shí)驗(yàn)材料
　　一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
　　體重250克-300克Wister大白鼠，由中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院動(dòng)物部提供。
　　二、實(shí)驗(yàn)試劑
　　1.一抗試劑ANXA4多克隆抗體:兔抗鼠，北京博奧森生物技術(shù)有限公司。
　　2.免疫組化試劑盒:北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。
　　3.DAB顯色劑:北京

4、中杉金橋生物技術(shù)有限公司。
　　4.乙烯硫脲(ETU):購(gòu)自Sigma-Aldrich德國(guó)公司。
　　三、實(shí)驗(yàn)方法
　　在成熟健康Wister孕鼠妊娠第10天(E10)，按125mg/kg經(jīng)胃管灌入乙烯硫脲ETU（濃度為1％），制作ARMs大鼠動(dòng)物模型;正常組給予等量的生理鹽水，分別在大鼠妊娠第16天(E16)和妊娠第19天(E19)時(shí)剖宮取胎，經(jīng)4％多聚甲醛磷酸鹽緩沖液固定、脫水后制成蠟塊，行矢狀面的連續(xù)切片，行AN

5、XA4的免疫組化染色。所有切片均用NIS-ElementsF3.0系統(tǒng)NikonE800采集圖片。用Image-proPlus6.0圖像處理軟件進(jìn)行平均光密度值分析。
　　結(jié)果
　　在正常組，E16胎鼠的末端直腸中，腸壁各層次逐漸發(fā)育，可見(jiàn)陽(yáng)性細(xì)胞群主要位于粘膜層，肌層也有表達(dá);E19時(shí)，腸壁各層發(fā)育逐漸完善，在粘膜層及肌層中可見(jiàn)大量陽(yáng)性細(xì)胞，粘膜下層也可見(jiàn)少量陽(yáng)性細(xì)胞。ANXA4的陽(yáng)性表達(dá)為棕黃色顆粒，主要位于細(xì)胞漿中，在

6、正常組腸壁中均有表達(dá)，E16的平均光密度值為0.0895±0.0085，E19的平均光密度值為0.1286±0.0133，兩者存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，提示隨著腸道發(fā)育的成熟，ANXA4的表達(dá)也逐漸增強(qiáng)。在ARMs組，E16時(shí)，可以觀察到所有標(biāo)本短尾或無(wú)尾，尾端結(jié)構(gòu)較紊亂，于粘膜層可見(jiàn)少量陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá);E19時(shí)，腸壁各層分化不良，盲端已經(jīng)見(jiàn)不到正常腸壁結(jié)構(gòu)，陽(yáng)性細(xì)胞分布減少，在粘膜層及粘膜下層呈弱陽(yáng)性反應(yīng)。經(jīng)平均光密度值分析，與正常組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)