表達(dá)人骨形態(tài)發(fā)生蛋白-7的骨髓基質(zhì)細(xì)胞修復(fù)骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、　　本研究利用CHO表達(dá)系統(tǒng)得到了BMP-7高表達(dá)細(xì)胞株，實(shí)驗(yàn)證明CHO細(xì)胞能夠分泌有體外誘骨活性的BMP-7蛋白。而實(shí)現(xiàn)基因治療的關(guān)鍵在于目的基因的高效轉(zhuǎn)移并適度表達(dá)。腺病毒載體是近年來(lái)用于基因治療最多的病毒載體之一，它可感染多種細(xì)胞，而且不整合到宿主基因組中，表達(dá)持續(xù)的時(shí)間短，這正是局部成骨所需要的。本研究利用了腺病毒的這一特性，嘗試用基因治療的方法使BMP-7在骨缺損局部持續(xù)分泌表達(dá)，驗(yàn)證其加快骨愈合過(guò)程的能力?！　〉谝徊糠郑築

2、MP-7全長(zhǎng)序列的獲得和相關(guān)表達(dá)載體的構(gòu)建：　　結(jié)論：成功得到了與GeneBank報(bào)道序列完全一致的BMP-7cDNA，構(gòu)建了正確的真核表達(dá)載體及重組腺病毒載體，為深入研究BMP-7的生物特性提供了重要的研究基礎(chǔ)?！　〉诙糠郑汉Y選穩(wěn)定表達(dá)hBMP-7的CHO細(xì)胞克?。骸　〗Y(jié)論：篩選出穩(wěn)定表達(dá)BMP-7的CHO細(xì)胞株，所分泌的BMP-7蛋白分子量為32-36kDa；利用特異敏感的ELISA方法精確定量出BMP-7的單細(xì)胞分泌量，根

3、據(jù)ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線，CHO細(xì)胞分泌BMP-7的水平最高可達(dá)15mg/l；建立了靈敏的體外測(cè)活方法，結(jié)果顯示在BMP-7的作用下，ALP的合成呈劑量依賴性和時(shí)間依賴性?！　〉谌糠郑和霉侨睋p模型的建立及AdCMV-BMP-7修復(fù)骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究：　　結(jié)論：本研究成功分離、純化了兔骨髓基質(zhì)細(xì)胞，作為具有分化能力的前體細(xì)胞，MSCs在外源BMP-7作用下，胞內(nèi)ALP合成增多，提示其向成骨方向分化，并且在接受BMP-7刺激信號(hào)后可分泌BM