骨形態(tài)發(fā)生蛋白2活性肽在體內(nèi)體外誘導(dǎo)成骨的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討根據(jù)骨形態(tài)發(fā)生蛋白2（BMP-2）自行研制合成的活性多肽在體內(nèi)和體外誘導(dǎo)成骨的作用。
　　 方法：①制備骨形態(tài)發(fā)生蛋-2活性多肽。②制備體內(nèi)實(shí)驗(yàn)所需的水凝膠載體。③將重組人骨形態(tài)發(fā)生蛋-2（rhBMP-2）及骨形態(tài)發(fā)生蛋-2活性多肽與水凝膠復(fù)合作為實(shí)驗(yàn)組，以空白水凝膠作為對(duì)照組。④動(dòng)物試驗(yàn)分6組。A組：?jiǎn)渭兯z作為空白對(duì)照；B組：5 mg活性多肽與水凝膠復(fù)合組；C組：10 mg活性多肽與水凝膠復(fù)合組；D組：20 mg

2、活性多肽與水凝膠復(fù)合組；E組：40 mg活性多肽與水凝膠復(fù)合組；F組：5 μg重組人骨形態(tài)發(fā)生蛋-2與水凝膠組復(fù)合組作為對(duì)照組。⑤將60只大鼠隨機(jī)按上述方法分組，每組10只。每只大白鼠左側(cè)大腿作1cm的切口，制備股四頭肌肌袋模型。將各組實(shí)驗(yàn)材料植入股四頭肌肌袋中。大鼠培養(yǎng)至第6周作放射學(xué)檢查（X-ray，CT），并處死作組織學(xué)（HE染色、Vonkossa染色）檢查。比較各組成骨效果。⑥將重組人骨形態(tài)發(fā)生蛋-2及不同濃度的活性多肽與鼠成骨

3、前體細(xì)胞（MC3T3-E1）復(fù)合培養(yǎng)。重組人骨形態(tài)發(fā)生蛋-2作為對(duì)照組，普通培養(yǎng)基作為空白對(duì)照。分別在3、5、7天檢測(cè)堿性磷酸酶（ALP）活性，比較各組差異。
　　 結(jié)果：①第6周時(shí)X線和CT掃描見(jiàn)：A、B、D組無(wú)明顯高密度影；E組可見(jiàn)不甚明顯的高密度影；C、F組有明顯團(tuán)塊狀高密度影。②組織學(xué)觀察見(jiàn)：6組的水凝膠載體均充分降解，未見(jiàn)殘留物。A、B、D組未見(jiàn)成骨細(xì)胞、骨小梁及新生骨；E組見(jiàn)部分成骨細(xì)胞和軟骨陷窩；C、F組見(jiàn)團(tuán)塊狀新

4、生骨和新生骨小梁，周?chē)@大量成骨細(xì)胞，外周可見(jiàn)新生血管。③堿性磷酸酶檢測(cè)見(jiàn)：重組人骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2與不同劑量活性多肽所復(fù)合的細(xì)胞的堿性磷酸酶活性比空白對(duì)照組明顯增高。重組人骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2組堿性磷酸酶活性最高。活性多肽組隨劑量升高堿性磷酸酶活性逐漸增高，并有時(shí)間相關(guān)性，隨培養(yǎng)時(shí)間增加，堿性磷酸酶活性逐漸增高，在第5天達(dá)到高峰，隨后逐漸下降。
　　 結(jié)論：骨形態(tài)發(fā)生蛋白活性多肽在大鼠體內(nèi)能夠誘導(dǎo)異位成骨，并能誘導(dǎo)鼠成骨前體細(xì)