磁性反義探針轉(zhuǎn)染腺癌SK-Br3細(xì)胞的有效濃度及時(shí)間的研究.pdf

1、背景:惡性腫瘤是導(dǎo)致人類(lèi)死亡的主要疾病，在許多國(guó)家位列居民死因的第一或第二位，這是由于目前仍然缺乏針對(duì)腫瘤的早期特異性診斷、轉(zhuǎn)移預(yù)警、療效預(yù)測(cè)及有效治療的臨床方法。分子影像學(xué)能夠在解剖形態(tài)基礎(chǔ)上更為深入地揭示組織的生物特點(diǎn)，盡早研究出分子在早期是如何變異及在病理方面如何改變的，既無(wú)創(chuàng)又可重復(fù)得為人們提供組織定量、定時(shí)、可視化的分子基因信息，因此可望實(shí)現(xiàn)腫瘤基因水平的特異性診斷。在活體影像學(xué)研究中，高特異性和親和力的分子探針是分子成像的重

2、要前提。借鑒分子生物學(xué)中的反義基因技術(shù)，本課題組以超順磁性氧化鐵(superparamagnetic iron oxide，SPIO)標(biāo)記的 c-erbB2癌基因反義寡脫氧核苷酸（anti-senseoligodeoxynucleotides，ASODN）探針為基礎(chǔ)，即磁性c-erbB-2反義探針，將該探針用于體外轉(zhuǎn)染高表達(dá)c-erbB2癌基因的SK-Br3腫瘤細(xì)胞株，初步發(fā)現(xiàn)其同時(shí)具有診斷與治療的功能。
　　目的:探討不同濃度磁

3、性c-erbB-2反義探針轉(zhuǎn)染乳腺癌SK-Br3細(xì)胞株后，在不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)其形態(tài)及表達(dá)的影響，得出反義探針轉(zhuǎn)染SK-Br3細(xì)胞的有效濃度及最佳時(shí)間數(shù)據(jù)。
　　方法:一方面將反義探針含鐵質(zhì)量濃度分別定為5、10、25、50及100 mg/L，轉(zhuǎn)染乳腺癌SK-Br3細(xì)胞24 h;另一方面選擇磁性c-erbB-2反義探針的含鐵終濃度為25μg/mL，分別孵育SK-Br3細(xì)胞6h、12h、24h、36h及48h。采用普魯士藍(lán)染色并在光學(xué)顯微

4、鏡及透射電鏡下直接觀察細(xì)胞鐵顆粒，用原子吸收光譜法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)鐵含量，檢測(cè)不同濃度的反義探針在不同孵育時(shí)間下對(duì)SK-Br3細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率。采用臺(tái)盼藍(lán)排除實(shí)驗(yàn)、CCK-8試劑盒觀察細(xì)胞活性，Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)蛋白質(zhì)表達(dá)、RT-PCR實(shí)驗(yàn)檢查mRNA表達(dá)，來(lái)檢測(cè)不同濃度的反義探針在不同孵育時(shí)間下轉(zhuǎn)染后的SK-Br3細(xì)胞生物特性。運(yùn)用MR對(duì)不同濃度的反義探針在不同孵育時(shí)間下轉(zhuǎn)染的SK-Br3細(xì)胞進(jìn)行成像，研究信號(hào)強(qiáng)度的變化。

5、>　　結(jié)果:SK-Br3細(xì)胞對(duì)反義探針在一定質(zhì)量濃度范圍內(nèi)（5 mg/L、10 mg/L、25 mg/L）及時(shí)間范圍內(nèi)(6h、12h、24h)呈依賴(lài)式攝取。當(dāng)探針質(zhì)量濃度為25 mg/L，孵育時(shí)間為24h時(shí)細(xì)胞內(nèi)鐵含量為(18.38±0.28) pg，細(xì)胞活力、存活率、細(xì)胞內(nèi)c-erbB-2蛋白及mRNA表達(dá)量明顯降低(P＜0.05)，磁共振掃描圖像（MRI）顯示該組細(xì)胞T2*值出現(xiàn)明顯的降低(P＜0.05)。50 mg/L及100 m