人乳腺癌細(xì)胞HYAL1基因的轉(zhuǎn)染及其研究.pdf

1、目的：構(gòu)建人乳腺癌HYAL1基因的真核表達(dá)載體并穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HYAL1基因低表達(dá)的乳腺癌MCF-7和ZR-75-30細(xì)胞株，為進(jìn)一步探討HYAL1基因在乳腺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移中的作用奠定基礎(chǔ)。 方法：采用RT-PCR技術(shù)從高表達(dá)HYAL1的人乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-435S中擴(kuò)增透明質(zhì)酸酶HYAL1基因，并將其插入真核表達(dá)載體pcDNA3.1/V5-His-TOPO中，構(gòu)建的重組表達(dá)質(zhì)粒經(jīng)脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染HYAL1基因低表達(dá)的乳腺癌MC

2、F-7和ZR-75-30細(xì)胞。 結(jié)果：用RT-PCR成功地?cái)U(kuò)增出1條1332bp的DNA片段，經(jīng)限制性內(nèi)切酶酶切分析和DNA測序證明已經(jīng)成功構(gòu)建了人乳腺癌HYAL1基因的真核表達(dá)載體。RT-PCR證明轉(zhuǎn)染了重組質(zhì)粒的乳腺癌MCF-7和ZR-75-30細(xì)胞可以高效穩(wěn)定的表達(dá)HYAL1基因。 結(jié)論：成功構(gòu)建了人乳腺癌HYAL1基因的真核表達(dá)載體，獲得了穩(wěn)定表達(dá)人HYAL1基因的MCF-7和ZR-75-30細(xì)胞克隆。

3、目的：探討透明質(zhì)酸酶HYAL1基因的過表達(dá)對人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7和ZR-75-30的遷移能力的影響。 方法：應(yīng)用雙室聯(lián)合培養(yǎng)技術(shù)，建立體外腫瘤侵襲模型，觀察過表達(dá)HYAL1基因?qū)θ橄侔┘?xì)胞穿透ECM gel的能力變化的影響。 結(jié)果：過表達(dá)HYAL1基因的乳腺癌細(xì)胞MCF-7 and ZR-75-30(實(shí)驗(yàn)組)穿透ECM的能力強(qiáng)于對照組明。 結(jié)論：過表達(dá)HYAL1基因能促進(jìn)人乳腺癌細(xì)胞在體外侵襲能力。

4、目的：探討透明質(zhì)酸酶HYAL1基因的過表達(dá)對人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7和ZR-75-30的血管生成能力的影響。 方法：應(yīng)用雙室聯(lián)合培養(yǎng)技術(shù)，建立體外腫瘤血管生成模型，觀察過表達(dá)HYAL1基因?qū)θ橄侔┘?xì)胞誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞形成血管能力的影響結(jié)果過表達(dá)HYAL1基因的乳腺癌細(xì)胞MCF-7 and ZR-75-30(實(shí)驗(yàn)組)誘導(dǎo)血管生成的能力均強(qiáng)于對照組結(jié)論過表達(dá)HYAL1基因能促進(jìn)人乳腺癌細(xì)胞在體外誘導(dǎo)血管生成。 目的：探討透明