腫瘤多藥耐藥性磁性納米反義探針的構(gòu)建.pdf

1、在腫瘤的治療方法中，化療占據(jù)著不可替代的地位。自從化療藥物應(yīng)用于臨床以來，雖對少數(shù)惡性腫瘤的治療取得了成功，但在大多數(shù)惡性腫瘤中收效卻不大，這其中一個很重要的原因就是腫瘤細(xì)胞對化療藥物產(chǎn)生了耐藥性。而腫瘤耐藥的主要原因是腫瘤細(xì)胞耐藥基因的過度表達(dá)，產(chǎn)生相關(guān)蛋白質(zhì)，如：肺耐藥蛋白（LRP）、多藥耐藥蛋白（MRP）和P-糖蛋白（P-gp）。這三種耐藥蛋白分別是LRP基因、MRP基因和MDR1基因的表達(dá)產(chǎn)物。其中MDR1/P-gp介導(dǎo)的腫瘤多

2、藥耐藥（MDR）是目前研究最廣泛深入的機(jī)制。MDR1基因編碼的P-gp是導(dǎo)致MDR最直接的原因，因此MDR1/p-gp的檢測在腫瘤化療的病人極其重要。目前MDR1和p-gp的檢測方法主要有兩類，一類是蛋白質(zhì)測定法，一類是mRNA測定法。但是這些檢測方法首先都必需依賴于腫瘤組織的采樣，給病人帶來巨大痛苦，而且還受MDR1在細(xì)胞表達(dá)的量以及檢測方法的敏感性等多因素的影響。如何從分子水平實(shí)現(xiàn)無創(chuàng)評價(jià)實(shí)體腫瘤組織多藥耐藥性，對于臨床腫瘤多藥耐藥

3、監(jiān)測將是一個重大突破。 氧化鐵磁性納米顆粒具有超順磁性、顆粒為納米級、可以作為生物大分子（如基因、多肽等）載體等特性。MDR1反義脫氧寡聚核苷酸是指與MDR1基因堿基互補(bǔ)，并能與之結(jié)合的一段DNA片段。以氧化鐵磁性納米顆粒為基因載體將MDR1反義脫氧寡聚核苷酸導(dǎo)入體細(xì)胞內(nèi)，應(yīng)用磁共振技術(shù)探測體細(xì)胞內(nèi)的磁信號達(dá)到評價(jià)實(shí)體腫瘤組織MDR1表達(dá)情況的目的。為從分子水平實(shí)現(xiàn)無創(chuàng)評價(jià)實(shí)體腫瘤組織多藥耐藥性提供了可能。 本實(shí)驗(yàn)前期研

4、究表明氧化鐵磁性納米顆粒純度較高、粒徑大小一致、細(xì)胞標(biāo)記率高。分別以人結(jié)腸癌細(xì)胞（LS174T、耐長春新堿HCT-8/VCR）細(xì)胞株進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，利用合成的氧化鐵磁性納米顆粒，構(gòu)建MDR1反義寡聚核苷酸載體，并進(jìn)行體外試驗(yàn)，對氧化鐵磁性納米顆粒作為基因載體轉(zhuǎn)染開展研究。 目的:合成、鑒定氧化鐵磁性納米顆粒MDR1反義寡載體聚核苷酸復(fù)合物，并進(jìn)行體外細(xì)胞轉(zhuǎn)染試驗(yàn)，評價(jià)氧化鐵磁性納米顆粒做為基因載體的可行性。 方法: 1

5、.PAGE評價(jià)DCIONP顆粒MDR1asODN復(fù)合物，以及此復(fù)合物在不同條件下的穩(wěn)定性。 2.流式細(xì)胞術(shù)測定LS174T、耐長春新堿HCT-8/VCR細(xì)胞內(nèi)P-gp表達(dá)水平。 3.MRI測定標(biāo)記細(xì)胞磁信號變化。 4.細(xì)胞轉(zhuǎn)染的檢測：鐵染色法觀察LS174T、耐長春新堿HCT-8/VCR細(xì)胞內(nèi)染成藍(lán)色的鐵顆粒、熒光顯微鏡觀察細(xì)胞內(nèi)的熒光信號、透射電鏡觀察細(xì)胞內(nèi)的鐵顆粒。 結(jié)果: 1.PAGE顯示D

6、CIONP與MDR1asODN在不同的pH值均有良好的結(jié)合能力；pH7.4的弱堿性條件下，PLL-CIONP與MDR1 asODN在一定質(zhì)量比有良好的結(jié)合能力；PLL-CIONP-asODN在人血清、自來水等條件下37℃孵育表現(xiàn)穩(wěn)定。 2.流式細(xì)胞術(shù)測定結(jié)果提示：LS174T組細(xì)胞內(nèi)羅丹明熒光顯著高于HCT-8/VCR組，提示HCT-8/VCR細(xì)胞中P-gp高表達(dá)。 3.MRI測定標(biāo)記細(xì)胞磁信號表明：隨著細(xì)胞數(shù)的增加標(biāo)記