吡格列酮對2型糖尿病大鼠血清和胰腺UⅡ及其受體GPR14的影響.pdf

1、目的:
　　采用高脂飼料結(jié)合小劑量STZ一次性腹腔注射誘導(dǎo)正常SD大鼠發(fā)生T2DM，制造一種符合人類T2DM發(fā)病特點(diǎn)的動物模型。觀察T2DM狀態(tài)下大鼠的血清尾加壓素Ⅱ(UrotensinⅡ，UⅡ)、血糖、血脂及胰島素代謝變化，同時觀察UⅡ及其受體GPR14(G protein-coupled receptor14，GPR14)在胰腺組織的表達(dá)情況，探討UⅡ及其受體GPR14在T2DM發(fā)生、發(fā)展中的作用，并觀察噻唑烷二酮類藥物吡格列

2、酮對其影響，為T2DM的防治提供新理念。
　　方法:
　　適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，將40只重約200-250g雄性SD大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為3組，分別為正常對照組（A組）12只，T2DM大鼠非干預(yù)組（B組）14只，T2DM大鼠吡格列酮干預(yù)組（C組）14只，A組予普通飼料喂養(yǎng)，B、C組予高脂飼料喂養(yǎng)。第8周末，3組大鼠禁食不禁水12h，然后B、C組大鼠腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)25mg/kg，A組注射同等體積的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖

3、液作對照。第10周末行OGTT篩選成模大鼠。OGTT篩選成模大鼠后，C組予吡格列酮10mg/kg.d灌胃4周，A、B組予相同體積的蒸餾水灌胃。在實驗第4、8、10、14周末分別取大鼠血清，葡萄糖氧化法檢測空腹血糖(FPG)，放射免疫法檢測胰島素(FINS)，酶法檢測甘油三脂(TG)、總膽固醇(TC)和高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)，ELISA法檢測UⅡ。第14周末處死所有大鼠，取出胰腺和內(nèi)臟脂肪組織，用電子天平稱量內(nèi)臟脂肪并計算體脂比

4、;胰腺組織用HE染色并在光鏡下觀察病理改變，用免疫組織化學(xué)SP法及實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(Real-Time RT-PCR)法檢測UⅡ及其受體GPR14在胰腺組織的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　　1.B、C組大鼠腹腔注射STZ3天后，即出現(xiàn)不同程度的多尿、多飲、多食等癥狀，2周后行OGTT結(jié)果顯示B、C組各時點(diǎn)血糖水平均高于A組，達(dá)到糖尿病成模標(biāo)準(zhǔn)，而A組各時點(diǎn)未達(dá)到成模標(biāo)準(zhǔn)。整個實驗期間大鼠死亡共3只，B組1只、C組

5、2只。
　　2.第4周末，B、C組體重增長顯著高于A組，第8周末最為顯著，出現(xiàn)明顯的腹型肥胖。第8周注射STZ后，B、C組大鼠均先出現(xiàn)體重大幅度下降，然后緩慢有所回升，但至實驗結(jié)束時其體重均小于A組。第4周末TG出現(xiàn)升高(P＜0.05)，第8周末TG、TC均高于A組(P＜0.001)，而HDL-C明顯低于A組(P＜0.001)。至第14周末更加顯著，但C組與B組比較，TG、TC均出現(xiàn)不同程度下降(P＜0.05)，而HDL-C稍有升

6、高，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　3.第4周末，B、C組血清UⅡ、FPG與A組相比無明顯變化，但FINS、胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)輕度升高，而胰島素敏感指數(shù)(ISI)輕度降低(P＜0.05)。第8周末，B、C兩組血清UⅡ、FPG、FINS、HOMA-IR與A組相比均升高(P＜0.05)，ISI繼續(xù)降低(P＜0.05)，B、C組之間相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。第10周末，B、C組血清UⅡ、FPG、HOM

7、A-IR與A組相比，均呈顯著性升高(P＜0.001)，但FINS與第8周相比有所下降，較A組仍高，ISI顯著降低(P＜0.001)。第14周末，C組大鼠血清UⅡ有所下降，同時FPG、FINS和HOMA-IR下降，ISI上升，與第10周同組相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.001)，而未經(jīng)干預(yù)的A、B組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　4.大鼠胰腺HE染色結(jié)果
　　A組:胰島大小不等，呈圓形或卵圓形，分布均

8、勻、形狀規(guī)則、界限清楚，均未見炎癥細(xì)胞，無水腫，胰島細(xì)胞數(shù)量多。
　　B組:胰島變小，分布彌散，部分胰島排列不規(guī)則，形狀不規(guī)則，結(jié)構(gòu)不清，胰島細(xì)胞數(shù)量減少，部分細(xì)胞可見細(xì)胞核固縮。
　　C組:胰島大小不一，形狀偶可見不規(guī)則，界限稍模糊，胰島細(xì)胞數(shù)量介于A、B之間，結(jié)締組織內(nèi)炎性細(xì)胞少見。
　　5.免疫組織化學(xué)染色結(jié)果:UⅡ及其受體GPR14分別與胰島細(xì)胞胞質(zhì)特異性抗體結(jié)合后呈棕黃色或棕褐色顆?；驁F(tuán)塊。胰腺外分泌部管腔中

9、亦可見淡棕黃色的顆粒。
　　A組:低倍鏡下胰島細(xì)胞豐富，多為圓形或橢圓形，大小不一，形態(tài)完整，棕黃色顆粒含量少。高倍鏡下細(xì)胞界限清晰，胞核居中，顆粒含量少，著色淺。
　　B組:低倍鏡下胰島細(xì)胞少見，形態(tài)不規(guī)則，邊緣不整齊，棕黃色顆粒含量豐富;高倍鏡下細(xì)胞界限不清晰，胞核呈偏心分布，棕黃色顆粒含量豐富，著色深。
　　C組:低倍鏡下胰島形態(tài)基本正常，邊緣尚完整，棕黃色顆粒含量介于A、B組之間;高倍鏡下細(xì)胞界限基本清晰，部分

10、胞核呈偏心分布，著色程度介于A、B組之間。
　　6.Real-Time RT-PCR法檢測UⅡ及其受體GPR14mRNA表達(dá):第14周末，B、C組大鼠胰腺組織UⅡ及其受體GPR14mRNA表達(dá)量均較A組顯著增多(P＜0.001);B、C組之間比較，C組表達(dá)量較低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　7.Pearson直線相關(guān)分析顯示，血清UⅡ水平和胰腺UⅡ及其受體GPR14含量與FPG、TG、TC和HOMA-IR呈正相

11、關(guān)(P＜0.05)，與FINS、ISI和HDL-C呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05）。
　　結(jié)論:
　　1.實驗SD大鼠經(jīng)高脂飼料喂養(yǎng)8周后，雖然FPG正常，但HOMA-IR升高、ISI下降，提示存在胰島素抵抗。注射小劑量STZ，損傷部分胰島，成功誘發(fā)T2DM模型。
　　2.T2DM大鼠血清UⅡ水平和胰腺UⅡ及其受體GPR14表達(dá)量顯著高于對照組，與FPG、TG、TC、HOMA-IR呈正相關(guān)，與FINS、ISI、HDL-C呈負(fù)相