蛋白酶體抑制劑MG132對(duì)HSC-T6細(xì)胞TGF-β-Smad信號(hào)通路的影響.pdf

1、目的:研究蛋白酶體抑制劑MG132對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞系HSC-T6細(xì)胞中TGF-β1、Smad3和Smad7表達(dá)的影響,探討泛素-蛋白酶體途徑在參與轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β/Smad(TGF-β/Smad)通路中信號(hào)調(diào)節(jié)的作用。
　　方法:體外培養(yǎng)大鼠肝星狀細(xì)胞系HSC-T6細(xì)胞,用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞來(lái)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。分別設(shè)對(duì)照組(MG132濃度為0)和不同濃度的MG132處理組,不同濃度的MG132處理細(xì)胞24h后,采用MTT法測(cè)定MG132對(duì)H

2、SC-T6細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖抑制作用,并計(jì)算抑制率及IC50值;采用實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(FQ-RT-PCR)和蛋白免疫印跡法(Westernblotting)檢測(cè)HSC-T6細(xì)胞中TGF-β1、Smad3和Smad7的mRNA和蛋白的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:MG132對(duì)HSC-T6細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖具有明顯抑制作用,在濃度為0.5、1、2、2.5、3、5和10μmol/L時(shí),其抑制率分別為10.02％、16.80%、20.18%

3、、23.22%、25.42%、44.53%和65.18%;與對(duì)照組比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),IC50值為6.84μmol/L。濃度為1、2、3μmol/LMG132對(duì)HSC-T6細(xì)胞作用24小時(shí)后,TGF-β1和Smad3的mRNA水平成濃度依賴(lài)性減少(P<0.05),而各組Smad7的mRNA的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);同時(shí)TGF-β1和Smad3蛋白成濃度依賴(lài)性減少,而Smad7蛋白成濃度依賴(lài)性增加(P<