泛素-蛋白酶體抑制劑MG132對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)人肺成纖維細(xì)胞活化的影響及分子機(jī)制研究.pdf

1、研究背景：肺纖維化是已知或未知病因的具有相似病理過(guò)程的一組彌漫性肺疾病的共同病理改變。其病理特征主要表現(xiàn)為肺間質(zhì)/肺泡炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)，成纖維細(xì)胞的過(guò)度增殖、活化，細(xì)胞外基質(zhì)成分的大量合成、沉積等而致使正常肺組織的結(jié)構(gòu)改變及功能喪失。大量研究已表明，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(Transforming growth factorβ1，TGF-β1)在這一病理過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵性的作用。TGF-β1通過(guò)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路發(fā)揮作用，而 Smad是其目的基

2、因轉(zhuǎn)錄的主要信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白。這一信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路受到嚴(yán)格而精確的調(diào)控，從而保證在正常的生理?xiàng)l件下信號(hào)輸出的穩(wěn)定性。
　　泛素-蛋白酶體通路（Ubiquitin Proteasome Pathway，UPP）作為真核細(xì)胞中選擇性調(diào)節(jié)內(nèi)源性蛋白質(zhì)降解與功能的重要系統(tǒng)，它廣泛參與了細(xì)胞周期調(diào)控、凋亡、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、抗原提呈等多種生理過(guò)程，因而對(duì)維持細(xì)胞的穩(wěn)態(tài)有著十分重要的意義。國(guó)內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)，泛素-蛋白酶體通路功能的改變或異常可直接導(dǎo)致或誘發(fā)人類

3、許多重要疾病。
　　近年來(lái)研究表明，泛素-蛋白酶體抑制劑能夠減輕或抑制實(shí)驗(yàn)性肝、腎、心臟、骨髓、皮膚和肺纖維化，但其具體的分子機(jī)制尚不十分清楚。MG132是一種醛基肽類泛素-蛋白酶體抑制劑，能夠抑制細(xì)胞中不同類型蛋白酶的活性，從而阻斷靶蛋白的泛素化降解，目前在實(shí)驗(yàn)研究中得到廣泛應(yīng)用。
　　目的：探討泛素-蛋白酶體抑制劑MG132對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)人肺成纖維細(xì)胞活化的影響及可能的分子機(jī)制
　　方法：（1）體外培養(yǎng)人肺成纖

4、維細(xì)胞MRC-5。（2）MTS法檢測(cè)TGF-β1對(duì)人肺成纖維細(xì)胞MRC-5增殖活性的影響。（3）以人肺成纖維細(xì)胞MRC-5為研究對(duì)象，隨機(jī)分為3組：對(duì)照組（未加入TGF-β1或MG132）；TGF-β1組(10 ng/mL)；MG132組[TGF-β1(10 ng/mL)+ MG132(0.5μmol/L)]。（4）Western blot方法檢測(cè)各組細(xì)胞中α-SMA和I型膠原α1（collagen type I alpha1，COL1

5、A1)的表達(dá)情況。（5）RT-PCR和Western blot方法分別檢測(cè)各組細(xì)胞中TGF-βI型受體（TβRI）、Smad2、Smad3、Smad7及核轉(zhuǎn)錄共抑制因子SnoN的mRNA及蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果：（1）TGF-β1對(duì)人肺成纖維細(xì)胞MRC-5的增殖具有明顯促進(jìn)作用，且10ng/ml為最佳作用濃度；同時(shí)TGF-β1對(duì)人肺成纖維細(xì)胞MRC-5表現(xiàn)出明顯的抗增殖抑制作用。（2）與對(duì)照組比較，TGF-β1組中α-SMA和C

6、OL1A1蛋白表達(dá)水平明顯增加（P<0.05）；與單純TGF-β1刺激組比較，MG132組上述2種蛋白表達(dá)水平均有所下降（P<0.05）。（3）與對(duì)照組比較，TGF-β1組和MG132組Smad7和SnoN mRNA的表達(dá)水平均有所增加（P<0.05），而MG132組與單純TGF-β1刺激組比較表達(dá)水平相仿（P>0.05）。與mRNA表達(dá)水平相反，TGF-β1組 Smad7和SnoN蛋白表達(dá)水平與對(duì)照組比較均有所減少（P<0.05）；與

7、單純TGF-β1刺激組比較，MG132組Smad7和SnoN蛋白表達(dá)水平均有所增加（P<0.05）。（4）TGF-β1組和MG132組TβRI mRNA和蛋白表達(dá)水平與對(duì)照組相比均有所增加（P<0.05），而 MG132組與單純 TGF-β1刺激組比較其表達(dá)水平相仿（P>0.05）。（5）三組細(xì)胞Smad2和Smad3 mRNA和蛋白表達(dá)水平相仿（P>0.05）。
　　結(jié)論：（1）TGF-β1對(duì)人肺成纖維細(xì)胞具有促進(jìn)增殖及抗增殖抑